兩種雜交黃顙魚的生長與形態差異分析

李镕，韓林強，艾麗，古勇明，蔣恩明

（1．佛山市南海百容水產良種有限公司，廣東佛山 528216；2．廣州市農業技術推廣中心，廣東廣州 510520）

兩種雜交黃顙魚的生長與形態差異分析

李镕1，2，韓林強1，艾麗1，古勇明1，蔣恩明1

（1．佛山市南海百容水產良種有限公司，廣東佛山 528216；2．廣州市農業技術推廣中心，廣東廣州 510520）

為評估兩種雜交黃顙魚生長和形態差異，以黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂、黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代為實驗組，全雄黃顙魚群體為對照組，進行同塘生長對比和形態學測量試驗。結果顯示，在3個雜交后代群體中，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代在5月齡和8月齡的體質量均顯著大于其他兩個雜交后代（P<0.05），分別為（15.72±7.19）g和（78.09±25.37）g，并且絕對增重率也高于其他兩個雜交后代，分別為0.23 g/d和0.70 g/d。對形態特征參數進行單因子方差分析，計算差異系數，其值為0.01～0.65，表明3個雜交后代群體的形態學差異處于種群間水平；主成分分析構建了4個主成分，其貢獻率分別為28.52%、17.57%、11.83%、11.29%，累計貢獻率為69.23%；同時，利用第一、第二主成分得分繪制散點圖，顯示黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體和全雄黃顙魚群體基本重疊，而黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂的雜交后代群體偏離了全雄黃顙魚群體，這一結果在聚類分析中更直觀反映出來。由此可見，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體生長速度表現最優，且體形更接近黃顙魚。

黃顙魚；雜交；體質量；形態性狀

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）是我國重要的特種養殖品種之一，屬于鲇形目（Siluriformes）、鲿科（Bagridae）、黃顙魚屬（Pelteobagrus），因其肉質細嫩、味道鮮美、無肌間刺，深受消費者歡迎[1]。近年來隨著黃顙魚養殖技術和繁育技術的推廣，黃顙魚人工育種也得到快速發展。劉漢勤等[2-3]利用性逆轉、雌核發育和測交驗證等技術獲得YY超雄黃顙魚，再與普通XX雌魚交配，培育出黃顙魚“全雄1號”，并在2011年通過全國水產原良種審定委員會新品種認定。桂建芳等[4]和Wang等[5]篩選出能夠產生X或Y染色體的特異AFLP片段，建立PCR性別鑒定方法，加快全雄黃顙魚苗種的規?；l展。不少學者[6-10]利用黃顙魚、瓦氏黃顙魚（Pelteobagrus vachelli）、粗唇鮠（Leiovassis crassilabrus）、烏蘇里擬鲿（Pseudobagrus ussuriensis）等鲿科魚類進行種間雜交和屬間雜交。綜合這些雜交結果發現，烏蘇里擬鲿♂與黃顙魚♀、瓦氏黃顙魚♂與黃顙魚♀兩個組合的雜交后代生長速度高于親本，顯示出良好的生產應用前景，但尚未見有關這兩種雜交后代在生長性能與形態學比較的研究報道。生長性能和形態學性狀是魚類遺傳改良研究的兩個重要內容。樊佳佳等[11]運用協方差分析方法評估10個不同地理來源草魚群體雜交后代的生長性能。劉永新等[12]運用相關分析方法研究牙鲆不同家系早期形態性狀的差異。Gorgonio等[13]研究了墨西哥野生鱒魚不同群體之間的形態差異。為此，本研究以烏蘇里擬鲿、瓦氏黃顙魚為父本，黃顙魚為母本進行雜交，并引入由YY超雄魚和普通XX雌魚雜交獲得的全雄黃顙魚作為對照組，通過同塘生長對比和形態學測量試驗，評估各雜交后代間生長性能和形態學性狀的差異，為今后合理開發利用黃顙魚種質資源及遺傳改良研究提供基礎資料和參考依據。

1 材料與方法

1.1 親本來源與配對

試驗用親魚來源于佛山市南海百容水產良種有限公司，分別為黃顙魚、烏蘇里擬鲿、瓦氏黃顙魚、YY超雄黃顙魚，其中YY超雄黃顙魚是通過性逆轉、PCR性別鑒定等技術獲得的。設以烏蘇里擬鲿、瓦氏黃顙魚和YY超雄黃顙魚為父本，黃顙魚為母本進行雜交，其雜交后代分別標記為FYHX、EYHX和YYHX群體，其中FYHX和EYHX群體為實驗組，YYHX群體為對照組。所有親本均挑選體格健壯、性腺發育成熟、無病灶和外傷的個體，雌雄分開暫養在水泥池中。

1.2 催產與人工授精

催產激素選用促黃體素釋放激素類似物（LRH-A2）、絨毛膜促性腺激素（HCG）、馬來酸地歐酮（DOM）3種[8-9]。雌魚采用兩次注射，間隔時間10～12 h，第一次激素注射量為LRH-A21 μg/kg，第二次為LRH-A25 μg+HCG 1 600 IU+DOM 5 mg/kg。雄魚一次注射，與雌魚第二次注射同步進行，激素用量為雌魚一半?？筛鶕H魚的大小、性腺發育情況對注射劑量進行適當調節，以求獲得最佳催產效果。采用人工干法授精，水溫28℃，8～10 h進入效應期，按雌雄10∶1～15∶1配組，殺死雄魚，取出精巢，放入研缽中碾碎，在碾碎精巢的同時將卵擠入干燥的瓷盆中，用5‰生理鹽水將精巢液稀釋后，加入盛卵盆內立即攪拌，使精卵充分接觸完成受精。最后將受精卵均勻鋪魚巢上，放在池子中進行孵化。

1.3 同塘對比試驗

仔苗孵出3～4 d，分別移入培育水泥池流水培育，以浮游動物為開口餌料，逐步誘食配合飼料，水溫維持在29～32℃。培育至平均體質量2 g左右時，每群體取苗種100尾，用金屬絲標記（Northwest marine technology）進行標記，標記部位分別為FYHX尾部、EYHX頭部、YYHX背鰭基部。然后將3個群體放入0.8×667 m2池塘進行同塘養殖。苗種放入池塘前采用3%～5%食鹽水浸浴10～15 min。養殖期間，池塘配備一臺增氧機，投喂海龍牌浮性顆粒飼料，每15 d用海聯科調水產品進行調水改底，將各項水質指標維持養殖用水合理范圍內，如pH值7～8，溶氧>4 mg/L以上，NO2-N為0.03 mg/L、NH4+-N為0.2 mg/L以下。常見病害有車輪蟲、水霉病等，定期對池塘進行病害預防。分別在5月齡、8月齡用金屬絲標記掃描儀鑒別歸類實驗魚，記錄體質量。

1.4 形態學測量試驗

魚苗培育至平均體質量2 g左右時，每群體取10 000尾分別放入編號為303、304、305池塘（規格均為2×667 m2），即303池培育FYHX群體、304池培育EYHX群體、305池培育YYHX群體。養殖期間按同塘對比試驗的管理方法進行日常管理。魚苗培育至6月齡后，在303、304、305池分別取FYHX、EYHX、YYHX群體樣品，共計107尾（見表1）。

采用傳統形態學測量方法對各群體樣品進行形態學測量，用直尺直接測量樣品體長，精確至0.1 cm；用游標卡尺測量樣品體高、尾柄長、尾柄高、頭長、吻長、背鰭長、背鰭前距、胸鰭前距、腹鰭前距，精確至0.1 cm。各形態參數按如下要求測量[14-15]：①體長（BL）：從吻端到尾鰭基部最后一尾椎骨后緣的長度；②體高（BD）：背鰭起點到腹面的垂直高度；③頭長（HL）：吻前端到鰓蓋后緣的長度不包括鰓蓋膜；④吻長（SL）：眼眶前緣到吻端的直線距離；⑤尾柄長（CPL）：從背鰭最后一根鰭條基部到最后一根尾椎骨后緣直線長度；⑥尾柄高（CPD）：尾柄部分最底處的高度；⑦背鰭長(FDL)：背鰭基部到最長鰭條的末端；⑧背鰭前距（SD）：從吻端到背鰭起點的直線距離；⑨胸鰭前距（SP）：從吻端到胸鰭起點的直線距離；⑩腹鰭前距（SV）：從吻端到腹鰭起點的直線距離；眼間距（EI）：從魚體一側眼眶到另一側眼眶的長度。

表1 FYHX、EYHX、YYHX群體樣品信息（平均值±標準差，P=0.05）

1.5 數據處理

1.5.1 同塘對比數據處理利用SPSS19.0軟件，對各時期的體質量數據進行統計分析和方差分析，顯著性檢驗用Duncan法進行多重比較。絕對增重率=（m1-m2）/（t1-t2）；式中m1、m2分別為t1與t2時的體質量[16]。

1.5.2 形態學數據處理為了消除魚體大小不同對參數值的影響，對頭部的指標量度值除以頭長，尾柄高除以尾柄長，其他指標量度值均除以體長[15]，得到的數值用Microsoft Excel和SPSS19.0進行單因子方法分析、主成分分析、聚類分析[17]。

單因子方法分析：使用SPSS19.0軟件，對形態學指標進行單因子方差分析（one-way ANOVA），對具有方差齊性的變量采用LSD法分析，對不具有方差齊性的變量采用Tamhane's T2法分析。差異系數（C.D）依據Mayr的75%識別與劃分規則，認為當CD>1.28時，表示兩兩群體間形態特征差異達到亞種水平；反之，則屬于種群間的差異[18]。其公式為：CD=（M1-M2）/（S1+S2），式中M1，M2和S1、S2分別表示兩群體性狀的平均值和標準差。

主成分分析：使用SPSS19.0軟件中對形態學指標數據進行主成分分析，得到各主成分特征值和貢獻率，并根據各主成分的得分繪制主成分散點圖[17]。

準確稱量50 g各干燥模式下最終毛葉山桐子，放入小型榨油機進行壓榨，收集毛油，測定各組中毛葉山桐子果實榨取的毛油質量，重復3次，按照公式（4）計算出油率，并進行對比。

聚類分析：使用SPSS19.0軟件中對形態學指標平均值進行聚類分析，使用平方Euclidean距離系數，構建聚類關系樹。

2 結果與分析

2.1 FYHX、EYHX、YYHX群體不同時期生長比較

由表2可見，3個群體在2個階段的體質量生長，均以EYHX群體最大，其平均值分別為（15.72± 7.19）g和（78.09±25.37）g，且與其他群體差異有統計學意義（P<0.05）；絕對增重率隨養殖時間的延長而增大，均以EYHX群體最大，分別為0.23 g/d和0.70 g/d。

2.2 單因子方差分析

表2 FYHX、EYHX、YYHX群體不同時期的體質量及其絕對增重率

由表3可見，FYHX與YYHX群體在CPL/ CPD、HL/BL、EI/HL、FDL/BL、SD/BL、SP/BL、SV/BL共7個指標存在統計學意義差異，EYHX與YYHX群體在BD/BL、EI/HL、SD/BL共3個指標存在統計學意義差異，FYHX與EYHX群體在BD/BL、CPL/ CPD、HL/BL、SV/BL共4個指標存在統計學意義差異。

由表4可見，兩兩群體形態特征的差異系數為0.01～0.65，根據Mayr等提出75%的識別與劃分規則[18]，表明FYHX、EYHX、YYHX群體的形態學差異處于種群間水平。

由表5可見，前四項主成分的累計貢獻率達到69.23%，其中第一項主成分貢獻率為28.52%，其他3個主成分的貢獻率依次為17.57%、11.83%、11.29%。第一主成分中，形態學指標HL/BL、SD/BL、SD/BL載荷值較大，分別為0.827、0.687、0.672；第二、三主成分分別是由EI/HL、BD/BL、FDL/BL決定。

由第一、第二主成分得分繪制的散點圖（圖1）可見，在主成分1軸與2軸上，EYHX群體與YYHX群體質量疊程度比FYHX群體與YYHX群體的多，表明EYHX群體的形態特征更接近YYHX群體。

2.4 聚類分析

由圖2可見，EYHX與YYHX群體距離最短，形態上最為接近，而FYHX與YYHX群體距離較遠，形態趨異程度較大。

表3 FYHX、EYHX、YYHX群體單因子方差分析結果（平均值±標準差，P=0.05）

表4 兩兩群體形態特征的差異系數（CD）值

表5 FYHX、EYHX、YYHX群體主成分分析結果

圖1 FYHX、EYHX、YYHX群體第一、二主成分分布圖

圖2 FYHX、EYHX、YYHX群體的聚類關系圖

3 討論

3.1 三種黃顙魚雜交后代的生長性能對比

雜交后代在生長、繁殖以及抗逆性能等方面可能表現出超親性狀[19]。烏蘇里擬鲿為鲿科魚類中個體較大者，但生長速度慢[8]；瓦氏黃顙魚為黃顙魚屬中體型最大的一種，且生長速度快，但抗應激能力差，體色為灰白色，不易被接受；黃顙魚生長速度快、體色艷麗，但商品規格較小[6]。為了結合它們各自的優點，邱叢芳等[8]用黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂進行雜交，結果顯示雜交后代的生長速度較快、成活率較高；王明寶等[7]和王衛民等[9]用黃顙魚與瓦氏黃顙魚進行雜交，結果顯示黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代受精率較高、生長速度高于親本，且體色形似黃顙魚。本研究以烏蘇里擬鲿、瓦氏黃顙魚、YY超雄黃顙魚為父本，黃顙魚為母本，產生的雜交后代群體用金屬絲在魚的不同部位標記，標記時盡量選取規格接近一致的后代，下塘后其養殖環境、飼料和養殖時間都完全相同，而且采用了隨機取樣方法，盡可能消除初始體質量、外界因素對后期體質量分析的影響。因而，這3個群體表現出來的生長性能差異基本上是由于群體本身的遺傳差異反映出來的結果。通過不同時期體質量的方差分析和日增重率的計算，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代在5月齡和8月齡的體質量均顯著大于其他兩個雜交后代，并且生長速度高于其他兩個雜交后代，表明黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代生長性能不僅優于全雄黃顙魚群體，而且優于黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂的雜交后代。

3.2 三種黃顙魚雜交后代的形態學差異

測量形態學的3個群體雖然是分池培養的，但培養過程中采取嚴格的試驗設計，從餌料投喂、放養密度、光照、水溫、換水、潑藥、調水等操作嚴格統一，而且從表1可見采取的樣品規格沒有統計學意義差別，由此群體間的形態差異基本上是由群體本身的遺傳因子決定的。形態特征是物種最直觀的種質表現之一，研究魚類形態學參數，可為選育良種和檢測原、良種提供依據[20]。已有不少魚類如褐菖鲉[1 7]、羅非魚[21]、團頭魴[22]等通過單因子方差分析、主成分分析、聚類分析等進行形態差異比較，獲得了物種鑒定、育種及進化方面的研究成果。本研究在P= 0.05的水平下對3個群體9組形態量度特征值進行單因子方差分析，并計算兩兩群體間的差異系數，結果顯示這3個群體的形態學差異處于種群間水平。主成分分析發現，4個主成分對不同群體的累計貢獻率為69.23%，且這些群體的差異很大程度是由頭部和軀干部前端差別引起的。從主成分散點圖來看，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體和全雄黃顙魚群體基本重疊，而黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂的雜交后代群體偏離了全雄黃顙魚群體，這一結果能在聚類分析中能直觀反映出來。全雄黃顙魚群體是由YY超雄黃顙魚和普通雌性黃顙魚構建培育出來的[2-3]，其形態學特征代表了黃顙魚物種的特征。由此，相比于黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂的雜交后代群體，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體表現出更明顯的母性效應，在形態特征上更接近黃顙魚物種。

4 結論

通過黃顙魚♀與烏蘇里擬鲿♂、黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體和全雄黃顙魚群體在生長性能和形態學上的比較，結果發現，黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交后代群體生長速度表現最優，且體形更接近黃顙魚。通過這個雜交組合生產優質種苗進行推廣，養殖時間更短，商品魚更能受到市場的歡迎，這可大幅度提高漁民的經濟效益。

[1]古勇明，陳柏湘，韓林強，等．YY超雄黃顙魚精子保存液和激活液的篩選及在生產上的應用[J]．養殖與飼料，2015（8）：5-10．

[2]Liu H Q，Guan B，Xu J，et al．Genetic manipulation of sex ratio for the large-scale breeding of YY super-male and XY allmale Yellow Catfish（Pelteobagrus fulvidraco Richardson）[J]．Marine Biotechnology，2013，15（3）：321-328．

[3]劉漢勤，崔書勤，侯昌春，等．從XY雌魚雌核發育產生YY超雄黃顙魚[J]．水生生物學報，2007，31（5）：718-725．

[4]桂建芳，王達，毛慧玲，等．黃顙魚性染色體特異分子標記及遺傳性別鑒定方法．中國：200810236650.0[P]．2009-04-29．

[5]Wang D，Mao H L，Chen H X，et al．Isolation of Y-and X-linked SCAR markers in yellow catfish and application in the production of all-male populations[J]．Animal Genetics，2009，40（6）：978-981．

[6]王峰．江黃顙魚、黃顙魚、粗唇鮠及其雜交F1代形態差異分析[J]．中國農學通報，2013，29（2）：36-43．

[7]王明寶，陳強，陳耀炳，等．黃顙魚與瓦氏黃顙魚雜交技術研究[J]．現代農業科技，2012（24）：273-278．

[8]邱叢芳．黃顙魚♀×烏蘇里擬鲿♂苗種繁殖養殖試驗[J]．科技信息，2009（4）：313-314．

[9]王衛民，嚴安生，張志國，等．黃顙魚♀與瓦氏黃顙魚♂的雜交研究[J]．淡水漁業，2002，32（3）：3-5．

[10]王峰，王武．江黃顙魚、黃顙魚、粗唇鮠雜交繁育初報[J]．水產科技情報，2004，31（1）：10-11．

[11]樊佳佳，陳柏湘，白俊杰，等．不同地理來源草魚群體雜交后代的生長性能分析[J]．中國農業通報，2015，31（29）：28-32．[12]劉永新，劉海金．牙鲆不同家系早期形態性狀差異比較[J]．東北農業大學學報，2008，39（8）：82-87．

[13]Gorgonio R C，Faustino C R，Alejandro V R，et al.Morphometric variation of wild trout populations from north-western Mexico（Pisces:Salmonidae）[J].Reviews in Fish Biology and Fisheries，2003（13）:91-110.

[14]高天翔，孫希福，宋娜．斑尾復鰕虎魚群體的形態學比較[J]．中國海洋大學學報，2009，39（1）：35-42．

[15]蔡永祥，陳友明，陳校輝，等．江黃顙（Pelteobagrus vachelli）和烏蘇里擬鱗（Pseudobagrus ussuriensis）雜交F1代形態差異[J]．湖泊科學．2011，23（2）：264-270．

[16]劉海涌，李勝杰，白俊杰．大口黑鱸養殖群體和引進群體生長性能的比較分析[J]．水產養殖，2015（9）：1-5．

[17]徐勝勇，張輝，柳本卓，等．中日褐菖鲉群體形態學比較研究[J]．水生生物學報，2013，37（5）：960-966．

[18]Mayr E，Linsley E G，Usinger R L.Methods and principles of Systematic Zoology[M].New York:Toronto and London: McGraw Hill Book Company.1953.

[19]吳清江，桂建芳．魚類遺傳育種工程[M]．上海：上海科學技術出版社，1999：82-85．

[20]李思發，李晨虹．尼羅羅非魚品系間形態差異分析[J]．動物學報，1998，44（4）：450-457．

[21]郭金濤，趙金良，甘遠迪，等．尼羅羅非魚♀×薩羅羅非魚♂雜交后代F1、F2形態性狀的遺傳與變異[J]．中國水產科學，2014，21（2）：275-282．

[22]趙博文，趙鴻昊，楊振華，等．團頭魴（♀）×長春鳊（♂）雜交F1代形態特征及性腺發育[J]．華中農業大學學報，2015，34（4）：89-96．

Comparison of growth and morphology between two kinds of hybrid yellow catfish

Li Rong1，2，Han Linqiang1，Ai Li1，Gu Yongming1，Jiang Enming1
（1.Nanhai Bairong Aquatic Varieties Limited Company，Foshan 528216，China；2.Guangzhou Agricultural Technology Extension Center，Guangzhou 520510，China）

The two experimental groups，including FYHX（Pelteobagrus fulvidraco♀×Pseudobagrus ussuriensis♂）and EYHX（Pelteobagrus fulvidraco♀×Pelteobagrus vachelli♂），and one control group，being all-male yellow catfish，were cultured in same pond to compare their growth difference.Meanwhile，we cultured severally the three groups in different ponds to measure their shapes to analyze their morphological variance.The results of growth experiment showed that at five and eight months old，the average body mass of EYHX was separately（15.72±7.19）g and（78.09±25.37）g，both observably higher than other two groups at the 0.05 probability level，and the absolute rate of body mass gain was separately 0.23 and 0.70 g/d，also higher than other two groups.One-way ANOVA for the morphological characters was analyzed，and coefficients of difference were calculated，with the values laying from 0.01 to 0.65，which indicated that the morphological difference of three groups was below the population level.The contribution ratios of four principal components from principal component analysis were 28.52%，17.57%，11.83%，11.29%，respectively，and the cumulative contribution ratio was 69.23%.In the same time，the scatter diagram was drawn according to the scores from the first and second components，which showed that the scope of all-male yellow catfish group was covered over EYHX group，and deviated from FYHX group.This result was more intuitively reflected in the clustering analysis.Thus，EYHX group grew faster than other two groups，and its shape was closer to yellow catfish.

Yellow Catfish；hybrid；body mass；morphological characters

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.006

Q174

A

1004-2091（2016）10-0029-07

2016-03-30）

清遠市科技計劃項目（2013C007）；清遠市清新區科技術計劃項目

作者介紹：李镕（1984-），男，水產工程師，主要從事水產動物遺傳育種、病害防治工作.E-mail：252979633@qq.com