遼寧省不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性

王 智, 朱 赫, 祁之秋, 紀明山

(沈陽農業大學植物保護學院, 沈陽 110161)

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遼寧省不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性

王 智, 朱 赫, 祁之秋, 紀明山*

(沈陽農業大學植物保護學院, 沈陽 110161)

為明確遼寧省不同地區間番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性是否存在差異,以及咯菌腈與其他殺菌劑之間是否存在交互抗性,采用菌絲生長速率法測定番茄灰霉病菌對咯菌腈、腐霉利、多菌靈的敏感性。結果表明,從遼寧省6個不同地區分離的番茄灰霉病菌菌株對咯菌腈的平均EC50差異不顯著,番茄灰霉病菌菌株對咯菌腈的敏感性頻率呈正態分布,咯菌腈對不同地區共117株番茄灰霉病菌的EC50平均值為(0.007 3±0.004 5)μg/mL,且咯菌腈與腐霉利和多菌靈之間均不存在交互抗藥性。

番茄灰霉病菌; 咯菌腈; 敏感基線; 交互抗性

番茄灰霉病是由半知菌亞門葡萄孢屬的灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)引起的一種世界性重要病害[1],自20世紀80年代開始在我國出現,現已成為番茄生產中的限制性障礙[2]。目前生產上該病的防治以化學防治為主[3-5],常用的殺菌劑有苯并咪唑類的多菌靈、二甲酰亞胺類的腐霉利、苯胺基嘧啶類的嘧霉胺等。然而番茄灰霉病菌對常用化學殺菌劑的抗性問題已十分突出[6-10]。據報道,新型殺菌劑咯菌腈對番茄灰霉病菌具有很高的抑制活性[11-12],目前,番茄灰霉病菌對該藥的抗性在遼寧省還沒有普遍發生。遼寧省不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈敏感性研究還未見報道,本文檢測了遼寧省6個地區的番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性,并對其進行了比較分析,研究了咯菌腈與其他防治番茄灰霉病菌的殺菌劑之間是否存在交互抗性,旨在為今后遼寧省各地區番茄灰霉病菌的抗藥性監測和治理對策的制定提供參考,同時為咯菌腈在遼寧省多地區的使用提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株

2014年從遼寧省的沈陽市、撫順市、普蘭店市、海城市、北票市、遼中縣采集感染番茄灰霉病的病果和病葉,每個大棚采集4～6個病果或病葉放于自封袋中帶回實驗室。在無菌條件下,經過分離純化共得到117株番茄灰霉病菌,移接到PDA斜面上,于4℃的冰箱內保存備用。

1.1.2 供試藥劑

98%咯菌腈(fludioxonil)原藥,中國農業科學院蔬菜花卉研究所提供;99%腐霉利(procymidone)原藥,連云港優士化學品有限公司提供;50%多菌靈(carbendazim)可濕性粉劑,安徽華星化工有限公司提供。

1.1.3 供試培養基

PDA培養基：200 g馬鈴薯,20 g葡萄糖,15～20 g瓊脂條加水至1 000 mL,于121℃的高壓蒸汽滅菌鍋內濕熱滅菌30 min。

1.2 試驗方法

1.2.1 遼寧省不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性測定及比較

采用菌絲生長速率法[13]。在無菌條件下,將親本菌株接種于PDA平板上,于25℃恒溫培養箱中培養3 d,用打孔器沿菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅,菌絲面向下接種于含系列質量濃度(0、0.000 8、0.004、0.02、0.1、0.5 μg/mL)咯菌腈的PDA含藥平板中央。每個處理3次重復,于25℃恒溫培養箱中培養3 d,用十字交叉法測量菌落直徑,利用DPS軟件統計不同濃度咯菌腈對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制率,以藥劑濃度的對數值為橫坐標(x),抑制率的幾率值為縱坐標(y),求出毒力回歸方程y=a+bx,有效中濃度(EC50)和相關系數(r)。將咯菌腈對不同地區供試菌株的EC50進行整理,采用SPSS軟件對不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈敏感性進行差異性分析。

1.2.2 咯菌腈與不同作用機制殺菌劑的交互抗藥性研究

采用菌絲生長速率法測定不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈、腐霉利、多菌靈的敏感性。使用SPSS軟件分析咯菌腈對所有供試菌株的EC50的對數值與腐霉利、多菌靈對供試菌株的EC50的對數值之間的相關性,確定咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間是否存在交互抗藥性。

2 結果與分析

2.1 遼寧省不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性

采用菌絲生長速率法測定了從遼寧省不同地區分離純化的117株番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性。由表1看出,咯菌腈對不同地區番茄灰霉病菌的EC50為0.000 7～0.024 4 μg/mL,平均值為0.007 3 μg/mL,最大值和最小值相差34.86倍,各地區番茄灰霉病菌菌株對咯菌腈的平均EC50沒有顯著差異。

采用SPSS軟件對不同地區的EC50均值進行單因素方差分析。Tukey’s Multiple對比試驗分析方差,得P=0.384 >0.05,故咯菌腈對不同地區間番茄灰霉病菌的EC50差異不顯著。

表1 不同地區番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性1)Table 1 Sensitivity of Botrytis cinerea from different areas to fludioxonil

1) 同列數據后相同小寫字母表示不同地區分離的菌株平均EC50在0.05水平差異不顯著。

The same letters in the same column indicate no significant difference in the mean EC50values of isolates from different areas at 0.05 level.

2.2 番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性基線的建立

由圖1看出供試的番茄灰霉病菌菌株對咯菌腈的敏感性呈連續性分布。利用SPSS軟件進行K-S法非參數性檢驗,得P=0.089。因P>0.05,供試的117株番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性頻率符合正態分布。各地區間可建立番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感基線[14-15]。在番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性范圍內,以EC50為依據,從0 μg/mL開始,以0.003 μg/mL為截距,將EC50等分為8個階段,以每個階段EC50的范圍為橫坐標,敏感性發生頻率為縱坐標,制作番茄灰霉病菌菌株敏感性頻率分布圖(圖2)。

由圖2可看出,供試的117株番茄灰霉病菌中,EC50在0.003 5～0.006 5 μg/mL的菌株出現頻率最高,為35%,其他區間頻率依次降低。

圖1 番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性分布Fig.1 Sensitivity distribution of Botrytis cinerea to fludioxonil

圖2 番茄灰霉病菌對咯菌腈敏感性頻率分布Fig.2 Frequency distribution of EC50values of Botrytis cinerea to fludioxonil

2.3 咯菌腈與腐霉利和多菌靈之間的交互抗性

咯菌腈對不同菌株EC50對數值與腐霉利、多菌靈對相應菌株的EC50對數值之間的相關系數分別為0.106 (P=0.658)和-0.183(P=0.439),均未達到顯著水平,表明咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間均不存在交互抗藥性(圖3～4)。

圖3 咯菌腈與腐霉利之間的交互抗藥性Fig.3 Cross-resistance between fludioxonil and procymidone

圖4 咯菌腈與多菌靈的交互抗性Fig.4 Cross-resistance between fludioxonil and carbendazim

3 結論與討論

試驗得出遼寧省不同地區番茄灰霉病菌菌株對咯菌腈的敏感性差異不顯著,可能與這些地區對新型藥劑咯菌腈的施藥頻率和使用年限等因素有關。各地區沒有發現對咯菌腈有抗性的菌株,該結果可為今后咯菌腈在遼寧省的使用提供重要依據。將平均EC50(0.007 3±0.004 5)μg/mL定為遼寧省番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性基線。該基線可為今后監測番茄灰霉病菌對咯菌腈的抗性狀況提供參考。

本文結果表明,咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間不存在交互抗藥性。咯菌腈對番茄灰霉病菌的作用機制獨特,對于已對苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、N-苯氧基甲酸酯類等殺菌劑產生抗性的灰霉病菌仍然具有很高的毒力[16-17],可用于番茄灰霉病的防治,但在生產中應與不同作用機制的殺菌劑交替使用,來延緩番茄灰霉病菌對咯菌腈抗性的產生。

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(責任編輯：楊明麗)

Sensitivity ofBotrytiscinereaon tomato from different areas to fludioxonil in Liaoning Province

Wang Zhi, Zhu He, Qi Zhiqiu, Ji Mingshan

(College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China)

This study aims to explicit sensitivity ofBotrytiscinereaon tomato from different areas to fludioxonil in Liaoning Province and make sure that if there is cross-resistance between fludioxonil and other fungicides. Sensitivities ofB.cinereato fludioxonil, procymidone, carbendazim were tested by mycelial growth rate test. The results showed that there were no significant differences in mean EC50values among the isolates ofB.cinereafrom six different regions. The frequencies of the EC50values was in normal distribution and mean of EC50values for 117 isolates was(0.007 3±0.004 5)μg/mL. There is no cross-resistance between fludioxonil and procymidone or carbendazim.

Botrytiscinerea; fludioxonil; baseline sensitivity; cross-resistance

2015-11-05

2015-12-27

公益性行業(農業)科研專項(201303025)

S 436.41，S 482.2

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.038

* 通信作者 E-mail：jimingshan@163.com