遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性

王 智, 朱 赫, 祁之秋, 紀(jì)明山

(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 沈陽(yáng) 110161)

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遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性

王 智, 朱 赫, 祁之秋, 紀(jì)明山*

(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 沈陽(yáng) 110161)

為明確遼寧省不同地區(qū)間番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性是否存在差異,以及咯菌腈與其他殺菌劑之間是否存在交互抗性,采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈、腐霉利、多菌靈的敏感性。結(jié)果表明,從遼寧省6個(gè)不同地區(qū)分離的番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的平均EC50差異不顯著,番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的敏感性頻率呈正態(tài)分布,咯菌腈對(duì)不同地區(qū)共117株番茄灰霉病菌的EC50平均值為(0.007 3±0.004 5)μg/mL,且咯菌腈與腐霉利和多菌靈之間均不存在交互抗藥性。

番茄灰霉病菌; 咯菌腈; 敏感基線; 交互抗性

番茄灰霉病是由半知菌亞門葡萄孢屬的灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)引起的一種世界性重要病害[1],自20世紀(jì)80年代開(kāi)始在我國(guó)出現(xiàn),現(xiàn)已成為番茄生產(chǎn)中的限制性障礙[2]。目前生產(chǎn)上該病的防治以化學(xué)防治為主[3-5],常用的殺菌劑有苯并咪唑類的多菌靈、二甲酰亞胺類的腐霉利、苯胺基嘧啶類的嘧霉胺等。然而番茄灰霉病菌對(duì)常用化學(xué)殺菌劑的抗性問(wèn)題已十分突出[6-10]。據(jù)報(bào)道,新型殺菌劑咯菌腈對(duì)番茄灰霉病菌具有很高的抑制活性[11-12],目前,番茄灰霉病菌對(duì)該藥的抗性在遼寧省還沒(méi)有普遍發(fā)生。遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈敏感性研究還未見(jiàn)報(bào)道,本文檢測(cè)了遼寧省6個(gè)地區(qū)的番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性,并對(duì)其進(jìn)行了比較分析,研究了咯菌腈與其他防治番茄灰霉病菌的殺菌劑之間是否存在交互抗性,旨在為今后遼寧省各地區(qū)番茄灰霉病菌的抗藥性監(jiān)測(cè)和治理對(duì)策的制定提供參考,同時(shí)為咯菌腈在遼寧省多地區(qū)的使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株

2014年從遼寧省的沈陽(yáng)市、撫順市、普蘭店市、海城市、北票市、遼中縣采集感染番茄灰霉病的病果和病葉,每個(gè)大棚采集4～6個(gè)病果或病葉放于自封袋中帶回實(shí)驗(yàn)室。在無(wú)菌條件下,經(jīng)過(guò)分離純化共得到117株番茄灰霉病菌,移接到PDA斜面上,于4℃的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 供試藥劑

98%咯菌腈(fludioxonil)原藥,中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所提供;99%腐霉利(procymidone)原藥,連云港優(yōu)士化學(xué)品有限公司提供;50%多菌靈(carbendazim)可濕性粉劑,安徽華星化工有限公司提供。

1.1.3 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：200 g馬鈴薯,20 g葡萄糖,15～20 g瓊脂條加水至1 000 mL,于121℃的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)濕熱滅菌30 min。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性測(cè)定及比較

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[13]。在無(wú)菌條件下,將親本菌株接種于PDA平板上,于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d,用打孔器沿菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅,菌絲面向下接種于含系列質(zhì)量濃度(0、0.000 8、0.004、0.02、0.1、0.5 μg/mL)咯菌腈的PDA含藥平板中央。每個(gè)處理3次重復(fù),于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d,用十字交叉法測(cè)量菌落直徑,利用DPS軟件統(tǒng)計(jì)不同濃度咯菌腈對(duì)番茄灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率,以藥劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)(x),抑制率的幾率值為縱坐標(biāo)(y),求出毒力回歸方程y=a+bx,有效中濃度(EC50)和相關(guān)系數(shù)(r)。將咯菌腈對(duì)不同地區(qū)供試菌株的EC50進(jìn)行整理,采用SPSS軟件對(duì)不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈敏感性進(jìn)行差異性分析。

1.2.2 咯菌腈與不同作用機(jī)制殺菌劑的交互抗藥性研究

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈、腐霉利、多菌靈的敏感性。使用SPSS軟件分析咯菌腈對(duì)所有供試菌株的EC50的對(duì)數(shù)值與腐霉利、多菌靈對(duì)供試菌株的EC50的對(duì)數(shù)值之間的相關(guān)性,確定咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間是否存在交互抗藥性。

2 結(jié)果與分析

2.1 遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了從遼寧省不同地區(qū)分離純化的117株番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性。由表1看出,咯菌腈對(duì)不同地區(qū)番茄灰霉病菌的EC50為0.000 7～0.024 4 μg/mL,平均值為0.007 3 μg/mL,最大值和最小值相差34.86倍,各地區(qū)番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的平均EC50沒(méi)有顯著差異。

采用SPSS軟件對(duì)不同地區(qū)的EC50均值進(jìn)行單因素方差分析。Tukey’s Multiple對(duì)比試驗(yàn)分析方差,得P=0.384 >0.05,故咯菌腈對(duì)不同地區(qū)間番茄灰霉病菌的EC50差異不顯著。

表1 不同地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性1)Table 1 Sensitivity of Botrytis cinerea from different areas to fludioxonil

1) 同列數(shù)據(jù)后相同小寫字母表示不同地區(qū)分離的菌株平均EC50在0.05水平差異不顯著。

The same letters in the same column indicate no significant difference in the mean EC50values of isolates from different areas at 0.05 level.

2.2 番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性基線的建立

由圖1看出供試的番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的敏感性呈連續(xù)性分布。利用SPSS軟件進(jìn)行K-S法非參數(shù)性檢驗(yàn),得P=0.089。因P>0.05,供試的117株番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性頻率符合正態(tài)分布。各地區(qū)間可建立番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感基線[14-15]。在番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性范圍內(nèi),以EC50為依據(jù),從0 μg/mL開(kāi)始,以0.003 μg/mL為截距,將EC50等分為8個(gè)階段,以每個(gè)階段EC50的范圍為橫坐標(biāo),敏感性發(fā)生頻率為縱坐標(biāo),制作番茄灰霉病菌菌株敏感性頻率分布圖(圖2)。

由圖2可看出,供試的117株番茄灰霉病菌中,EC50在0.003 5～0.006 5 μg/mL的菌株出現(xiàn)頻率最高,為35%,其他區(qū)間頻率依次降低。

圖1 番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性分布Fig.1 Sensitivity distribution of Botrytis cinerea to fludioxonil

圖2 番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈敏感性頻率分布Fig.2 Frequency distribution of EC50values of Botrytis cinerea to fludioxonil

2.3 咯菌腈與腐霉利和多菌靈之間的交互抗性

咯菌腈對(duì)不同菌株EC50對(duì)數(shù)值與腐霉利、多菌靈對(duì)相應(yīng)菌株的EC50對(duì)數(shù)值之間的相關(guān)系數(shù)分別為0.106 (P=0.658)和-0.183(P=0.439),均未達(dá)到顯著水平,表明咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間均不存在交互抗藥性(圖3～4)。

圖3 咯菌腈與腐霉利之間的交互抗藥性Fig.3 Cross-resistance between fludioxonil and procymidone

圖4 咯菌腈與多菌靈的交互抗性Fig.4 Cross-resistance between fludioxonil and carbendazim

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)得出遼寧省不同地區(qū)番茄灰霉病菌菌株對(duì)咯菌腈的敏感性差異不顯著,可能與這些地區(qū)對(duì)新型藥劑咯菌腈的施藥頻率和使用年限等因素有關(guān)。各地區(qū)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)咯菌腈有抗性的菌株,該結(jié)果可為今后咯菌腈在遼寧省的使用提供重要依據(jù)。將平均EC50(0.007 3±0.004 5)μg/mL定為遼寧省番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的敏感性基線。該基線可為今后監(jiān)測(cè)番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈的抗性狀況提供參考。

本文結(jié)果表明,咯菌腈與腐霉利、多菌靈之間不存在交互抗藥性。咯菌腈對(duì)番茄灰霉病菌的作用機(jī)制獨(dú)特,對(duì)于已對(duì)苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、N-苯氧基甲酸酯類等殺菌劑產(chǎn)生抗性的灰霉病菌仍然具有很高的毒力[16-17],可用于番茄灰霉病的防治,但在生產(chǎn)中應(yīng)與不同作用機(jī)制的殺菌劑交替使用,來(lái)延緩番茄灰霉病菌對(duì)咯菌腈抗性的產(chǎn)生。

[1] 康立娟,張小風(fēng),王文橋,等.灰霉菌的抗藥性與適合度測(cè)定[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2000,2(3):39-42.

[2] 李寶聚.溫室番茄灰霉病流行規(guī)律研究[M]//馮蘭香,楊又迪.中國(guó)番茄病蟲(chóng)害及其防治技術(shù)研究,北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1999:31-35.

[3] 尹元拴,張治家,張琦.番茄灰霉病田間藥效試驗(yàn)[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(4):69-70.

[4] 張智,李君明,宋燕,等.番茄灰霉病及其防治研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,26(2):125-128.

[5] 王勇,郝永娟,劉春艷,等.幾種殺菌劑防治番茄灰霉病的藥效評(píng)價(jià)[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,33(S1):95-97.

[6] 紀(jì)明山,祁之秋,王英姿,等.番茄灰霉病菌對(duì)嘧霉胺的抗藥性[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào),2003,30(4):396-400.

[7] 丁中,劉峰,王會(huì)利,等.番茄灰霉菌的多重抗藥性研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2001,32(4):452-456.[8] 周明國(guó),葉鐘音,劉經(jīng)芬.殺菌劑抗性研究進(jìn)展[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1994,17(3):33-41.

[9] Latorre B A, Spadaro I, Rioja M E. Occurrence of resistant strains ofBotrytiscinereato anilinopyrimidine fungicides in table grapes in Chile [J]. Crop Protection, 2002, 21(10): 957-961.

[10]Myresiotis C K, Karaoglanidis G S, Tzavella-Monari K. Resistance ofBotrytiscinereaisolates from vegetable crops to anilinopyrimidine, phenylpyrrole, hydroxyanilide, benzimidazole, and dicarboximide fungicides [J]. Plant Disease, 2007, 91(4): 407-413.

[11]劉穎超,張金林,龐民好,等.咯菌腈對(duì)草莓灰霉病Botrytiscinerea的毒力及防效研究初報(bào)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2002,4(3):94-96.

[12]楊玉柱,焦必寧.新型殺菌劑咯菌腈研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2007,6(5):35-39.

[13]慕立義.植物化學(xué)保護(hù)研究方法[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1994:142.

[14]Liang Hongjie, Di Yali, Li Jinli, et al. Baseline sensitivity and control efficacy of fluazinam againstSclerotiniasclerotiorum[J].European Journal of Plant Pathology,2015,142(4):691-699.

[15]Li Jinli, Liu Xiangyang, Di Yali, et al. Baseline sensitivity and control efficacy of DMI fungicide epoxiconazole againstSclerotiniasclerotiorum[J]. European Journal of Plant Pathology, 2015, 141(2): 237-246.

[16]丁中,劉峰,慕立義.不同抗性型灰葡萄孢菌Botrytiscinerea對(duì)不同作用機(jī)制殺菌劑的敏感性研究[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,3(4):59-63.

[17]陳治芳,王文橋,韓秀英,等.新殺菌劑對(duì)番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力及田間防效[J].植物保護(hù),2011,37(5):193-195.

(責(zé)任編輯：楊明麗)

Sensitivity ofBotrytiscinereaon tomato from different areas to fludioxonil in Liaoning Province

Wang Zhi, Zhu He, Qi Zhiqiu, Ji Mingshan

(College of Plant Protection, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China)

This study aims to explicit sensitivity ofBotrytiscinereaon tomato from different areas to fludioxonil in Liaoning Province and make sure that if there is cross-resistance between fludioxonil and other fungicides. Sensitivities ofB.cinereato fludioxonil, procymidone, carbendazim were tested by mycelial growth rate test. The results showed that there were no significant differences in mean EC50values among the isolates ofB.cinereafrom six different regions. The frequencies of the EC50values was in normal distribution and mean of EC50values for 117 isolates was(0.007 3±0.004 5)μg/mL. There is no cross-resistance between fludioxonil and procymidone or carbendazim.

Botrytiscinerea; fludioxonil; baseline sensitivity; cross-resistance

2015-11-05

2015-12-27

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303025)

S 436.41，S 482.2

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.038

* 通信作者 E-mail：jimingshan@163.com