麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義

付強,于會娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長江大學第二臨床醫學院荊州市中心醫院兒科，湖北 荊州 434020

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麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義

付強,于會娜, 王婷, 吳屏, 劉劍峰,晏霞, 屈悅, 唐臨飛, 余孔貴

長江大學第二臨床醫學院荊州市中心醫院兒科，湖北 荊州 434020

目的：探討麻疹患兒外周血輔助性T細胞17(Th17)及其效應因子白介素(IL)-17的表達及臨床意義。方法：采用流式細胞儀(FCM)檢測20例普通麻疹患兒(無并發癥)、15例麻疹并發細菌性肺炎患兒、20例健康對照組兒童外周血Th17細胞的百分率；酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清IL-17、IL-6的水平；并分析了Th17百分率與血清C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)的水平的關系。結果：麻疹并發細菌性肺炎組Th17細胞百分率均值為(4.15±0.76)%、高于普通麻疹患兒(1.71±0.63)%及對照組(1.59±0.58)%(P<0.05)。IL-17、IL-6、CRP、PCT在麻疹合并細菌性肺炎組分別為：(78.04±12.67)、(35.23±10.36)pg/mL、(3.97±0.56)ng/mL和(37.05±9.27)mg/L；在普通麻疹組的均值分別為：(50.21±10.55)、(13.18±6.93)pg/mL、(0.10±0.02)ng/mL和(0.76±0.11)mg/L；在健康對照組均值分別為：(45.95±9.33)、(11.07±6.52)pg/mL、(0.06±0.01)ng/mL和(0.45±0.08)mg/L。麻疹并發細菌性肺炎組各指標均明顯高于普通麻疹患兒及健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；普通麻疹患兒與對照組間的差異無統計學意義(P>0.05)。麻疹并發細菌性肺炎患兒外周血Th17比率與CRP、PCT水平呈正相關(r=0.63、0.67，P<0.05)。結論：麻疹患兒外周血Th17細胞及其效應因子IL-17表達升高可能與繼發細菌感染有關，可作為監測病情的實驗室指標之一

麻疹；輔助性T細胞17；白介素-17； 細菌感染；兒童

麻疹是由副黏病毒引起的小兒常見的急性呼吸道傳染病，通過空氣飛沫傳播，以發熱、咳嗽、流涕、結膜炎、口腔麻疹黏膜斑及皮膚特殊性斑丘疹為主要臨床表現，部分患兒可繼發嚴重肺炎危及生命[1,2]。輔助性T細胞17(T helper 17 cells, Th17)是一種新發現的CD4+T細胞亞群，在自身免疫性疾病和機體防御反應中均有重要意義[3,4]。Th17細胞的主要效應因子白介素17(Interleukin-17, IL-17)具有強大的招募中性粒細胞的功能，能夠促進多種細胞釋放炎性因子，可使氣道黏液腺分泌大量黏液，增加氣道的高反應性[5,6]。Th17細胞及IL-17在麻疹并發細菌性肺炎中有何作用目前尚不清楚。本研究觀察了普通麻疹患兒及麻疹并發細菌性肺炎患兒外周血Th17細胞及IL-17的變化，探討Th17細胞及IL-17在麻疹繼發細菌感染中可能的作用及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2015年1月至2016年2月在我院感染科住院的麻疹患兒35例，診斷符合《諸福棠實用兒科學》第7版的標準[7]，麻疹患兒均為發病后3～6d入院，具有典型麻疹的臨床表現，血清經荊州市疾病預防與控制中心檢測，麻疹病毒IgM抗體陽性，均排除其他感染性疾病和免疫性疾病。其中20例為普通麻疹患兒，無明顯并發癥出現，男15例，女5例；年齡6個月～15個月，中位年齡8個月。15例為麻疹并發細菌性肺炎患兒，男9例，女6例；年齡6個月～18個月，中位年齡8個月。麻疹并發細菌性肺炎的診斷除符合上述麻疹的診斷標準外，還需符合下述條件中的4條以上：①咳嗽，咳黃膿痰。②退疹時仍高熱或下降后再升高。③胸片示：肺部感染性病變。④血常規示：白細胞及中性粒細胞比例升高。⑤痰培養陽性[8]。平均熱程(7.0±2.5)d。21例有心肌受損(血清肌酸激酶同工酶升高或心電圖ST-T改變)，5例有肝功能受損(丙氨酸轉氨酶升高)，2例行機械通氣輔助呼吸治療，所有患兒均治愈出院，隨訪3個月無明顯異常。另選取20名同期到我院行健康體檢的兒童做為健康對照組，近期均無感染性疾病史，留取清晨空腹血進行檢測，其中男13例，女7例；年齡5個月～17個月，中位年齡8個月。3組患者年齡、性別無統計學差異。研究方案經醫院倫理委員會批準。所有研究對象的家長均知情同意。

1.2 方法

1)標本采集。采集麻疹患兒急性期清晨空腹靜脈血3mL，乙二胺四乙酸(EDTA)鉀鹽抗凝。

2)流式細胞儀(Flow cytometry, FCM)檢測Th17細胞比率。取外周抗凝血50μL，與50μL RPMI1640培養液混勻，加入4μL刺激劑，置于37℃、5%CO2培養箱中培養刺激5h。取出刺激后的細胞，混勻，加入CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)20μL，室溫避光孵育30min，加入破膜劑100μL，混勻，室溫放置5min，加抗人IL-17-藻紅蛋白(PE) 20μL于實驗管，對照管加入同型熒光標記的鼠抗人IgG 20μL，室溫孵育30min。洗滌、重懸、然后上機檢測Th17細胞占外周血單個核細胞比率。

3)酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IL-17及白介素6(Interleukin-6, IL-6)的水平。取全血1mL置于普通試管中，離心(3000r/min，15min，離心半徑15.2cm)后收集血清，采用ELISA法分別測定血清中IL-17及IL-6的水平，操作步驟嚴格按試劑說明進行。

4)免疫比濁法檢測血清中降鈣素(Procalcitonin, PCT)及C反應蛋白(C-reactive protein, CRP)的水平。半自動免疫比濁儀(r)PLUS、CRP及PCT測定試劑盒均購自ORION公司。采用散色比濁法，反應杯中加入配制好的反應液0.5mL(30mL緩沖液加入0.5mL試劑)，室溫(20～25℃)，反應25～35min，然后用免疫比濁儀測定。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平比較見表1，其中各組間外周血Th17細胞和IL-17、IL-6、PCT及CRP水平表達的差異均有統計學意義(P<0.05)。兩兩比較顯示，麻疹并發細菌性肺炎組的外周血Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT水平與普通麻疹組和對照組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；普通麻疹組與健康對照組間比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表1 各組間Th17細胞和IL-17、IL-6、CRP及PCT的比較

注：健康對照組相比，aP<0.05；與麻疹并發細菌性肺炎組相比,bP<0.05。

2.2 麻疹并發肺炎組外周血Th17細胞表達與CRP及PCT的相關性

麻疹并發細菌性肺炎組的外周血Th17細胞表達與血清CRP及PCT均成正相關(r=0.63、0.67，P<0.05)。

3 討論

雖然麻疹在我國已經得到了很好的控制，近年來無大規模流行，但有些地區仍有不少病例發生，甚至有小的流行或暴發。感染麻疹病毒后，機體發生暫時性的免疫抑制，表現為抗細菌免疫反應低下，部分患兒可并發嚴重肺炎危及生命[9]。本研究顯示，麻疹并發細菌性肺炎患兒的外周血Th17細胞和IL-17水平明顯高于普通麻疹患兒和對照組，同時，IL-6水平也是明顯升高的，而普通麻疹患兒與對照組間比較無明顯差異，這表明Th17細胞及IL-17參與了麻疹并發細菌性肺炎的發病過程。由此推測，當呼吸道粘膜受到外來細菌侵襲時，樹突狀細胞分泌產生大量的IL-6，誘導Th0細胞分化成大量的Th17細胞，并使Th17細胞活化和增殖[10]，產生IL-17。IL-17募集大量中性粒細胞到氣道，對細菌進行吞噬、清除，并且誘導一系列抗菌肽的產生，如防御素-2β及來自氣管上皮細胞的S100家族中的成員等[11-12]。因此，Th17細胞及IL-17對麻疹并發肺炎的呼吸道存在一定的保護作用。

此外，本實驗還顯示，麻疹并發肺炎患兒血清CRP及PCT均明顯升高。CRP和PCT是目前被認為是膿毒血癥和細菌感染的診斷指標。CRP是一種急性時相反應蛋白，與炎性反應程度密切相關[13,14]。PCT在健康人體中含量極低，病毒感染狀態下，血清PCT通常不升高，而在細菌毒素刺激下增高明顯，尤其是在嚴重感染狀態下升高得非常快[15]。麻疹并發肺炎患兒外周血Th17細胞表達與CRP及PCT均呈正相關，表明當麻疹患兒外周血Th17細胞比率及IL-17水平升高時，一定程度上提示著機體可能并發細菌感染，并且其升高的水平與炎癥輕重程度一致。

同時，值得注意的是，雖然IL-17具有一定的保護機制，但當麻疹患兒炎癥過重，IL-17產生過多，亦或由于麻疹病毒導致的免疫功能紊亂，致使大量炎癥因子“瀑布式”釋放入血，產生全身炎癥反應綜合征(SARS)，此時，血CRP、PCT及IL-6會異常升高，機體有可能發生全身多器官功能衰竭、感染性休克、彌漫性血管內凝血(DIC)而危及生命，此時IL-17已經不再是一種保護作用。

綜上所述，麻疹患兒外周血Th17細胞及其效應因子IL-17表達升高可能與繼發細菌感染有關，可作為監測病情的指標之一，但尚需擴大樣本量進行更為深入細致的研究。

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[編輯] 劉陽

2016-07-11

荊州市醫療衛生科技計劃項目(2014051)。

付強(1977-)，男，主治醫師，博士，主要從事兒科疾病研究；通信作者：余孔貴，fuqiang5918@163.com。

R725.1

A

1673-1409(2016)30-0001-03

[引著格式]付強， 于會娜， 王婷，等. 麻疹患兒外周血輔助性T細胞17及其效應因子白介素-17的表達及臨床意義[J]. 長江大學學報(自科版),2016,13(30):1～3,11.