孕婦乙型肝炎病毒感染模式與宮內感染的關系分析

葉建美，江麗燕

孕婦乙型肝炎病毒感染模式與宮內感染的關系分析

葉建美，江麗燕

目的分析孕婦乙型肝炎病毒感染模式與新生兒宮內感染的關系，為其臨床防治工作提供參考。方法

孕婦；肝炎，乙型；肝炎病毒；宮內感染

乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）感染是世界范圍內的難題，約有一半的人群為母嬰傳播所致[1]。我國是HBV感染高發區，出生后乙肝疫苗接種失敗是新生兒感染HBV的主要原因。研究表明[2]，宮內感染是母嬰傳播的主要方式之一，HBV病毒經由胎盤、羊水以及陰道分泌物等上行傳播至胎兒。其感染機制十分復雜，現有研究已證實母親HBV的復制程度高是宮內感染的獨立危險因素[3]。HBV的復制程度受到病毒感染模式的影響，本研究追蹤分析HBV感染孕婦病毒感染模式與新生兒感染率的關系，以期為宮內感染的預防提供數據支撐。現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集浙江省麗水市蓮都區人民醫院2012年7月至2015年12月收治的113例HBV感染孕婦；年齡22～37歲，平均（29.5±4.1）歲。納入標準：（1）參考文獻[4]診斷標準；（2）足月妊娠。排除標準：（1）妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病等妊期合并癥；（2）先兆流產或早產；（3）明顯黃疸；（4）孕期服用過免疫類藥物；（5）合并有其他類型的肝炎病毒癥狀。其中單胎101例，雙胞胎9例和三胞胎3例；剖宮產51例，順產62例；孕周37～40周，平均（38.3±1.4）周；新生兒體質量3.1～4.9 kg，平均（3.7±1.1）kg。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集和預處理于分娩前1周左右采集孕婦空肘腹靜脈血5～8m l；并于分娩時取臍帶血，生產1個月后，主-被動免疫接種前取新生兒外周靜脈血；置于滅菌管。所得的血液樣品均分為兩份：一份常溫靜置40min以上，3000 r/min離心15min分離血清；另一份采用梯度離心法獲得外周血單個核細胞（PBMC）；所得樣品均－20℃冷凍保存。

1.2.2 HBVM的測定HBVM指乙肝兩對半相關指標，包括HBV表面抗原（HBsAg）、抗-HBs、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、抗-HBe及抗乙型肝炎核心抗原（簡稱抗-HBc）。采用全自動電化學發光免疫分析儀（COBAS6000，上海羅氏）以及上海卡邁舒化學技術有限公司提供的乙肝兩對半檢測ELISA試劑盒進行測定，嚴格根據說明書操作步驟進行。

1.2.3 病毒載量的測定同時檢測血清和PBMC的HBV-DNA載量，其中之一為陽性時則為陽性。血清HBV-DNA檢測需同時考察到外周血清和單個核細胞。檢測方法為PCR熒光探針法，HBVDNA熒光PCR檢測試劑盒由上海艾研生物科技有限公司提供。血清樣品先以TRIZOL試劑提取總RNA，然后再進行反轉錄和實時熒光定量PCR擴增實驗。PBMC樣品采用1 640完全培養基培養，37℃、5%CO2，至對數生長期，調整細胞濃度為109/L，加入細胞裂解液，以裂解法提取DNA，行熒光定量PCR擴增實驗。結果以指數形式表示，有效范圍為103～108copy/m l，不足103copy/m l的為陰性病例。

1.2.4 宮內感染判斷方法胎兒臍血檢測到HBsAg或HBV-DNA陽性者，1個月后復查新生兒股靜脈血，HBsAg或HBV-DNA陽性者即為宮內感染。

1.3 統計方法采用SPSS 16.0統計軟件進行統計學分析，計數資料采用2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV-M與宮內感染的關系本組病例共發現11種HBV-M組合類型，前4位最常見的分別是小三陽、HBsAg與抗-HBc雙陽性、大三陽及HBsAg陽性，其孕婦比例分別為37.2%、18.6%、17.7%、15.0%；113例孕婦共發生宮內感染31例，發生率27.4%，其中感染率最高的是大三陽60.0%，其次是小三陽26.2%、HBsAg與抗-HBc雙陽性23.8%以及HBsAg與HBeAg雙陽性17.6%；大三陽的感染率與小三陽、HBsAg與抗-HBc雙陽性及HBsAg與HBeAg雙陽性相比，差異均有統計學意義（2=6.637、5.528、6.838，均P＜0.05）。其他HBVM組合類型的孕婦例數本身偏少，未發現宮內感染。見表1。

表1 113例孕婦的HBV-M組合類型及宮內感染情況例(%)

2.2 病毒載量與宮內感染的關系本組病例HBV-DNA陽性率為50.4%（57例），根據HBV-DNA載量結果對孕婦進一步分組（血清和PBMC結果差異較大時已較高者為主），分為陰性、103～105，105～107，＞1074組。病毒載量在103～105、～107、＞107者宮內感染率均高于陰性者（2=11.755、21.996、27.395，均P＜0.05）。見表2。

表2 113例孕婦的HBV-DNA載量水平及宮內感染情況例（%）

3 討論

孕婦感染HBV后，可能損傷胎盤血管，并通過垂直感染影響胎兒的免疫功能和正常發育，正因如此，妊娠合并乙肝是常見的高危妊娠之一，及時阻斷HBV母嬰垂直傳播是乙型肝炎防治的一項重要工作。目前，對于HBV宮內感染的臨床診斷標準，尚未達成共識。一般以出生時HBsAg或HBV-DNA陽性作為宮內感染的標準；也有研究指出[5]，出生時新生兒體內的抗體幾乎全部來源于母體，此時陽性結果并不能完全預測宮內感染。因此本研究對出生時HBsAg或HBV-DNA陽性胎兒，于1個月后取其股靜脈血，再次測定HBsAg或HBVDNA陽性率。以出生時臍血和1個月后靜脈血均呈HBsAg或HBV-DNA陽性者為宮內感染標準，來分析孕婦HBV感染模式與新生兒宮內感染的關系。

HBV-M是反映HBV感染狀態的常規指標，本組病例共發現11種HBV-M組合類型，前4位最常見的分別是小三陽、HBsAg與抗-HBc雙陽性、大三陽及HBsAg陽性，其孕婦比例分別為37.2%、18.6%、17.7%及15.0%；這與國內其他報道結果基本相仿[6]。本組病例的宮內感染發生率為27.4%，其中大三陽的感染率最高，高達60.0%，與文獻[7]報道相似。另外，本研究發現即大三陽之后宮內感染率風險最高的三種HBV-M組合類型分別是小三陽（26.2%）、HBsAg與抗-HBc雙陽性（23.8%）及HBsAg與HBeAg雙陽性（17.6%），差異無統計學意義（P＞0.05）。既往研究指出，HBeAg是HBV核心顆粒中的一種可溶性蛋白質，間接反映了病毒復制水平，因此HBeAg陽性說明病毒具備較高的血液傳染能力，新生兒HBV感染和母親HBeAg陽性明顯相關[8]。本組HBV-M組合類型中，凡是HBeAg陽性或抗-HBe陽性者均局部較高的胎內感染率，也證實了其風險性。

另外，部分研究指出[9]，高載量HBVDNA也能增加新生兒HBV宮內感染風險，當孕婦HBV-DNA超出106copies/m l時，可能導致嬰兒免疫失敗。實質上，HBV-DNA載量是反應其傳染性最直接的高特異性指標。基于HBV復制水平不高，本研究結合血清和PBMC兩種樣品來檢測HBV-DNA陽性率，結果發現陰性、103～105，105～107，＞107者宮內感染率分別為5.4%、37.5%、48.3%、 66.7%，證實宮內感染率隨著HBV-DNA載量的升高而升高，也說明了高載量HBV-DNA的風險性。也提示對于過高水平的HBV-DNA載量應給以適當的選擇性阻斷治療，或行HBV疫苗與HBIV聯合接種，以保障新生兒健康。

綜上所述，本研究孕婦乙肝病毒感染模式與新生兒宮內感染關系的考察結果顯示，大三陽孕婦宮內感染發生率較高，應做重點預防，小三陽及HBeAg陽性孕婦也存在一定程度的感染風險，可依據HBV-DNA載量作適當預防。

[1]高爭,譚樂靜,王曉紅.妊娠晚期注射乙肝免疫球蛋白阻斷乙肝病毒母嬰傳播的臨床研究[J].醫學理論與實踐,2014,27(11): 1411-1413.

[2]張紅霞,費安興.乙肝病毒母嬰傳播及阻斷分析[J].湖北理工學院學報,2013,29(5): 52-54,58.

[3]胡洪波.孕婦乙型肝炎血清學模式與新生兒宮內感染的相關性分析[J].實用預防醫學,2011,18(12):2388-2389.

[4]中華醫學會肝病學分會,中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中華肝臟病雜志,2011,19(1):13-24.

[5]王蘭芳.乙肝病毒攜帶產婦感染狀態與新生兒母嬰傳播的相關性研究[D].安徽醫科大學,2014.

[6]周學梅,劉小麗,鄒婧,等.孕婦乙型肝炎病毒感染模式與宮內感染的關系分析[J].中華醫院感染學雜志,2016,26(13):3066-3068.

[7]牛兆儀,王芳,靳晴,等.乙型肝炎病毒母嬰垂直傳播與乙肝抗原及乙肝DNA載量的關系研究[J].中外醫療,2014,27:105-106.

[8]李紀鳳,李瑋.孕婦乙型肝炎病毒感染對妊娠結局的影響分析[J].中華醫院感染學雜志,2014,24(18):4619-4621.

[9]白淑芬,楊立新,王艷,等.乙型肝炎病毒感染孕婦病毒載量與嬰兒免疫失敗關系研究[J].中華實用診斷與治療雜志,2011, 25(12):1230-1231.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.10.057

R714

A

1671-0800(2016)10.1369-03

2016-09-09

（本文編輯：姜曉慶）

323000浙江省麗水，麗水市蓮都區人民醫院

葉建美，Email：huyonghua 21@163.com

回顧性分析113例乙型肝炎病毒（HBV）感染孕產婦的臨床資料，所有孕產婦均于分娩前抽取肘靜脈血，新生兒取臍帶血和出生后1個月靜脈血，采用酶聯免疫吸附實驗檢測血清學標志物HBV-M，采用熒光定量PCR法檢測HBV-DNA水平。結果本組病例共發現11種HBV-M組合類型，前4位最常見的分別是小三陽、HBsAg與抗-HBc雙陽性、大三陽及HBsAg與HBeAg雙陽性，比例分別為37.2%、18.6%、17.7%、15.0%。宮內感染發生率為27.4%，感染率由高到低依次為大三陽（60.0%）、小三陽（26.2%）、HBsAg與抗-HBc雙陽性（23.8%）及HBsAg與HBeAg雙陽性（17.6%）；大三陽的感染率明顯高于其他各組（均＜0.05）。本組病例HBV-DNA陽性率為50.4%，宮內感染率隨著HBV-DNA載量的升高而升高，組與組之間的差異有統計學意義（＜0.05）。結論大三陽宮內感染發生率較高，應做重點預防，小三陽及HBeAg陽性孕婦也存在一定程度的感染風險，可依據HBV-DNA載量作適當預防。