4個木百合品系莖段離體繁殖生根技術研究

孔曜　代色平　張平　姚焱

摘要：木百合Leucadendron是優良的切花及園林綠化植物。通過利用不同I隊濃度、生根基質及培養環境對木百合莖段離體培養產生的芽苗進行生根培養，結果表明：采用3g/L IBA浸蘸處理木百合莖段離體誘導的芽苗，插于混合基質（珍珠巖：細沙：泥炭土=3：2：1）中培養，根的誘導和生長效果優于瓊脂MS+I BA2mg/L培養基；在光照強度和溫度均變化的溫室環境比恒溫培養室更利于根的增殖。

關鍵詞：木百合Leucadendron；生根；培養基質；環境因子

引言

木百合，是山龍眼科Proteaceae木百合屬常綠喬木或灌木，在全球約有80多個種。木百合是一類觀賞價值很高的高檔切花品種，起源于南非，20世紀80年代開始在南非、澳大利亞等國進行馴化栽培，現商業生產地主要分別在澳大利亞、以色列、肯尼亞及夏威夷等國家和地區。

目前，國內外對木百合某些稀有品種及具有較高經濟性狀雜交種進行了離體快速繁殖研究。我國已引進木百合部分品種，并在引種馴化和栽培繁殖方面開展了研究。種子育苗、扦插繁殖是繁殖木百合品種的常見方法。種子育苗法的引進成本高、周期長，限制了優良種的推廣；扦插繁殖時，材料基因型、季節影響、激素、基質類型等多種因素會影響插條生根率。利用離體培養莖段誘導腋芽成苗生根可加速木百合的繁殖，但生根階段發根率低，造成莖段繁殖率低下。

本研究將木百合莖段離體培養誘導產生的腋芽苗，在瓊脂生根培養基和混合基質上進行生根誘導及生長能力比較，探索一種適合木百合莖段離體生根繁殖的方法。

1.材料及方法

1.1材料

木百合屬四個種間雜交后代品系，每個品系編號以及親緣關系分別為01；02；03；04。

1.2莖段培養及增殖

選取健康的中上部莖，剪除葉片后，均截取長20 mm的莖段進行無菌處理，接種在培養基MS+BAP0.1 mg/L+蔗糖20 g/L+瓊脂3g/L中誘導出芽（圖1），并置于溫度25%、光照時間16 h、光強度40umol/m2s的光照培養箱中培養。7周后選擇長度適宜的芽苗轉置于瓊脂培養基或混合基質上進行誘導生根。

1.3生根培養

誘導01，02，03獲得株高適宜的苗接種于不同生根基質上進行生根處理（表1）。

1.3.1瓊脂培養基培養

取長30 mm的芽苗，去除頂芽第三片葉以下的葉片，然后插入瓊脂MS培養基（含IBA 2 mg/L），深度約10 mm。每個品系設置6個培養瓶，每瓶插入6份芽苗。置于25℃，16h/d光照培養箱中培養。

1.3.2混合基質培養瓶培養

250 ml聚碳酸酯培養瓶（配有聚四氟乙烯通氣孔）裝入25 mm高度的混合基質（珍珠巖：細沙：泥炭土=3：2：1）。培養瓶與混合基質均在121℃高壓滅菌15 min。取長30 min的芽苗，去除頂芽第三片葉以下的葉片，浸蘸無菌的3 g/L濃度IBA溶液后，插入混合基質中，深度為10 mm。澆灌苗采用無菌去離子水。每個品系設置6個培養瓶，每瓶插入6份嫩莖。置于25℃，16 h/d光照的培養箱中培養。

1.3.3混合基質育苗盤培養

將經過121℃滅菌15 min的混合基質裝入大小為34 mm×34 mm×50 mm的育苗盤中。取30 mm高的芽苗，去除頂芽第三片葉以下的葉片，浸蘸無菌的3 g/L濃度IBA溶液后，插入混合基質中，深度為10 mm。每格種植一株苗，每品系種植16份材料。用塑料膜覆蓋包裹托盤，置于25℃，16 h/d光照的培養箱中培養。

5周后，記錄各處理的存活率和根誘導情況。在無菌的條件下，將采用B處理（瓊脂培養基）和c處理（混合基質培養瓶）培養的材料轉移到滅菌的混合基質育苗盤中，覆蓋塑料膜包裹好放入培養室。9周后，將混合基質育苗盤中的材料轉移到溫室中，遮光50%，適當揭開塑料膜通風，每周澆水和施肥一次。11周后，逐漸移除覆蓋物，通過濕度控制裝置進行灌溉。20周后將存活植株移栽到盆中。

1.4生根環境條件比較

將02品系莖段誘導增殖產生的60份芽苗分別置于2種生根條件下誘導生根。30份芽苗放入25℃，光照16 h，光強度40 gmol/m2s培養室培育：15份芽苗培養基質為瓊脂培養基；15份芽苗培養基質為混合基質。30份芽苗放入溫室中，并保持50%遮光：氣溫在10.5℃～28.6℃波動，平均氣溫為21.1℃；光照16 h，光照強度約為100～350 gmol/m2s。培養材料、基質處理均與培養室培養相同。5周后統計生根情況。

2.結果與討論

2.1IBA及培養基質對生根的作用

與IBA接觸時間的長短對根的誘導和生長有重要作用。品系04各處理在生根方面具有良好的表現，而01和03在瓊脂培養基中誘導生根效果較差（表2）。基因型01從生根培養基轉移到混合基質上，11周后產生根的達到94.4%，而留在瓊脂培養基中的材料僅有11.1%產生了根。另外，01、03和04材料在與IBA長時間接觸的瓊脂培養基中前5周的生根率均較低，而且產生的根質量較低；蘸取高濃度IBA（3g/L）后隨之轉移到無激素混合基質中培養，則有助于根的誘導和生長（表2中c、D處理）。Dias Ferreira等發現，將木百合“Safari Sunset”插條進行短時間接觸1 g/L的IBA，隨后轉移到不含IBA的基質處理，可誘發根的產生。Gorst等則發現根在持續接觸IBA后生長受阻，在加入核黃素對IBA進行光氧化后成功提高了根的伸長率。

另外，培養基質對生根也很重要。在混合基質中的根數多，生長更旺盛；而在生根培養基內誘導的根較少、易碎且在伸展階段就已停止生長（圖2）。Newell等發現，木本植物在混合基質中根的發育啟動與生長要優于瓊脂培養基。

需要注意的是實驗中所用到的培養基等材料及工具須經過高溫滅菌，前5周進行的實驗操作需在超凈工作臺中完成，從而降低該階段病原菌與細菌的感染。在5-11周內，葡萄孢屬真菌和一些未知的病菌污染亦可能導致材料的損失，使用一定的殺菌劑可以減少該狀況的發生，從而提高11周后的存活率。

2。2培養環境對生根的影響

溫室環境比培養室更易促進根的誘導和生長（表3）。溫室與培養室的環境差異主要在于光照強度與溫度：溫室的光照強度約為100-350 umol/m2s，氣溫在10.5℃-28.6℃間波動；培養室中光照強度恒定在40umol/m2s，溫度保持在25℃。溫室環境條件更接近于自然環境，波動的溫度及光照更利于根的生長。同時還觀察到，瓊脂培養基上培養的材料，在噴霧溫室條件下的根發生能力高于培養室。這可能是因為IBA在強光照下降解更快，降低對根部生長的抑制效應，或是強光照下光合作用增強而促進生根。

綜上得出，對莖段離體誘導的芽苗采用3 g/L IBA浸蘸處理，插于混合基質中培養，有利于木百合不同品系根的誘導和生長；在光照強度較高的溫室環境比光照培養室更利于根的增殖。endprint