慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者鼻黏膜組織中YKL-40及TLR4的表達變化及意義

王愛平，孫海波

（1遼寧中醫藥大學，遼寧大連116600；2遼寧中醫藥大學附屬醫院）

慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者鼻黏膜組織中YKL-40及TLR4的表達變化及意義

王愛平1，2，孫海波1，2

（1遼寧中醫藥大學，遼寧大連116600；2遼寧中醫藥大學附屬醫院）

目的 觀察幾丁質酶3樣蛋白1（YKL-40）及Toll樣受體4（TLR4）在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者竇口鼻道復合體黏膜組織中的表達變化，并探討其臨床意義。方法 留取46例慢性鼻-鼻竇炎伴息肉患者（伴息肉組）和41例不伴息肉患者（不伴息肉組）的竇口鼻道復合體黏膜標本，30例鼻中隔偏曲患者（對照組）的正常鼻黏膜組織標本。采用實時熒光定量PCR法檢測鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、核因子κB（NF-κB）、白細胞介素1β（IL-1β）、環氧化酶2（COX-2）mRNA表達，Pearson相關分析變量間的關系。結果 伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達量均高于不伴息肉組、對照組（P均＜0.05）；Pearson相關分析顯示，伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40 mRNA相對表達量與TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相對表達量呈正相關（r分別為0.416、0.364，P均＜0.05）。結論 慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB呈高表達，YKL-40、TLR4可能協同作用參與激活NF-κB信號通路促進病情進展。

慢性鼻-鼻竇炎；鼻息肉；幾丁質酶3樣蛋白1；Toll樣受體4；核因子κB信號通路

慢性鼻-鼻竇炎發病機制復雜，病程遷延反復［1］，包括伴鼻息肉和不伴鼻息肉兩種亞型［2］。然而，這兩種亞型的發生機制、治療手段及預后等均存在差異［3］。研究表明，幾丁質酶3樣蛋白1（YKL-40）與炎性疾病的發生關系密切［3，4］。Toll樣受體4（TLR4）作為Ⅰ型跨膜糖蛋白受體，可與配體結合誘導核因子κB（NF-κB）信號通路異常活化而增強炎癥反應［5］。本研究對YKL-40及TLR4在慢性鼻-鼻竇炎患者黏膜組織中表達變化進行分析，探討其在伴鼻息肉患者發病中的意義。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選取2013年2月～2015年3月在遼寧中醫藥大學附屬醫院行手術治療的慢性鼻-鼻竇炎患者87例，均符合慢性鼻-鼻竇炎診療指南［2］，其中男54例、女33例，年齡（45.7±9.2）歲，伴息肉46例（伴息肉組）、不伴息肉41例（不伴息肉組），病程3～14年。排除術前1個月接受糖皮質激素類藥物、抗菌藥物治療。術中均留取竇口鼻道復合體黏膜標本。同期，選取單純外傷性鼻中隔偏曲患者30例作為對照組，男21例、女9例，年齡（44.2±8.7）歲，病程2～12 d，均留取正常鼻黏膜組織。三組均排除腫瘤、免疫功能異常、支氣管疾病、肺囊性纖維化以及高血壓、冠心病、糖尿病、高脂血癥等慢性疾病。三組性別、年齡等比較差異無統計學意義。本研究經醫院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、白細胞介素1β（IL-1β）、環氧化酶2（COX-2）mRNA表達檢測 采用實時熒光定量PCR法。三組留取的標本經生理鹽水沖洗，洗凈血液及黏液，保存于-70℃冰箱中備檢。組織經研磨后，用細胞裂解液裂解，利用TRIzol總RNA提取試劑盒（購自美國Invitrogen公司）提取總RNA。用逆轉錄試劑盒（大連寶生物公司）將總RNA逆轉錄為第一模板鏈cDNA，以cDNA為模板用PCR試劑盒（大連寶生物公司）進行檢測。引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司設計合成，YKL-40引物序列上游：5′-TGAGGCATCGCAATGTAAG-3′，下游：5′-AAGGGGAAGTAGGATAGGGG-3′；TLR4引物序列上游：5′-TGTCCTCCCACTCCAGGTAAGT-3′，下游：5′-GATTGCTCAGACCTGGCAGTT-3′；NF-κB引物序列上游：5′-TCCAGAAGTATTTCAACCACAG-3′，下游：5′-GCCTTCACATACATAACGGA-3′；IL-1β引物序列上游：5′-ACCTGCTGGTGTGTGACGTT-3′，下游：5′-TCGTTGCTTGGTTCTCCTTG-3′；COX-2引物序列上游：5′-TGCTGTACAAGCAGTGGCAA-3′，下游：5′-GCAGC-CATTTCCTTCTCTCC-3′；GAPDH引物序列上游：5′-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3′，下游：5′-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3′。PCR反應條件：94℃60 s，92℃30 s，56℃30 s，74℃30 s，38個循環。每個標品均設3個平行反應復孔。利用2-ΔΔCt公式計算目的基因相對表達量。

1.3統計學方法 采用SPSS21.0統計軟件。計量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；Pearson相關分析變量間關系。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1三組鼻黏膜組織YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表達比較 見表1。

表1　三組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達量比較（±s）

表1　三組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相對表達量比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與不伴息肉組比較，＃P＜0.05。

組別nYKL-40 mRNATLR4 mRNANF-κB mRNAIL-1βmRNACOX-2 mRNA伴息肉組460.89±0.16*＃0.90±0.17*＃0.84±0.13*＃1.47±0.21*＃1.73±0.15*＃不伴息肉組410.75±0.12*0.65±0.14*0.68±0.11*1.24±0.18*1.38±0.19*對照組300.51±0.110.49±0.120.37±0.161.05±0.131.08±0.11

2.2伴息肉組鼻黏膜組織中YKL-40、TLR4、NF-κB的關系 Pearson相關分析結果顯示，伴息肉組鼻黏膜組織YKL-40 mRNA相對表達量與TLR4、NF-κB mRNA相對表達量呈正相關（r分別為0.416、0.364，P均＜0.05）。

3　討論

YKL-40是新近發現的炎性標志物，可由多種細胞分泌，在調控先天免疫系統激活中發揮重要作用［6］。有研究［5］指出，YKL-40在慢性鼻-鼻竇炎患者血漿中表達升高，且與鼻-鼻竇炎患者亞型有關。本研究結果顯示，慢性鼻-鼻竇炎伴息肉組和不伴息肉組患者鼻黏膜組織YKL-40 mRNA相對表達量均高于對照組，且伴息肉組高于不伴息肉組（P均＜0.05），說明YKL-40基因在慢性鼻-鼻竇炎患者黏膜組織中呈高表達，且在伴息肉患者黏膜組織中表達更為顯著，提示YKL-40可能在慢性鼻-鼻竇炎伴息肉發病中發揮重要作用。研究證實，Th2介導的體液免疫在鼻-鼻竇炎伴息肉發病中占優勢，而不伴息肉者則以Th1為主，YKL-40可能參與了Th2介導的炎性反應及組織重構［7，8］。本研究證實，YKL-40在黏膜組織中表達異常可能是導致慢性鼻-鼻竇炎表型不同的原因。

研究表明，TLR4可誘導NF-κB通路激活，促使下游IL-1β和COX-2等炎性因子表達而增強炎癥反應［9，10］。本研究結果顯示，在慢性鼻-鼻竇炎患者鼻黏膜組織中TLR4、NF-κB、IL-1β和COX-2表達升高，且伴息肉患者更顯著，提示TLR4可能通過激活NF-κB信號通路而使下游IL-1β和COX-2炎性因子表達升高，從而促進慢性鼻-鼻竇炎發生，尤其是在伴息肉患者中作用更為顯著。Pearson相關分析顯示，慢性鼻-鼻竇炎伴息肉組患者黏膜組織中YKL-40 mRNA表達量與TLR4 mRNA和NF-κB mRNA表達量均呈正相關，進一步說明YKL-40和TLR4可能共同作用于NF-κB信號通路而參與慢性鼻-鼻竇炎伴息肉的發生。

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.036

R765.4

B

1002-266X（2016）21-0088-02

孫海波（E-mail：402767260＠qq.com）

（2015-12-07）