糖尿病足潰瘍伴感染患者創(chuàng)面滲液中MMP-2 2及其抑制因子的水平變化

孫夢(mèng)菊，趙鵬飛，李黎

（1萊陽市第二人民醫(yī)院，山東萊陽265202；2煙臺(tái)市萊陽中心醫(yī)院）

糖尿病足潰瘍伴感染患者創(chuàng)面滲液中MMP-2 2及其抑制因子的水平變化

孫夢(mèng)菊1，趙鵬飛2，李黎2

（1萊陽市第二人民醫(yī)院，山東萊陽265202；2煙臺(tái)市萊陽中心醫(yī)院）

目的 觀察糖尿病足潰瘍伴感染患者創(chuàng)面滲液中基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）及其抑制因子（TIMP-2）的水平變化。方法 選擇糖尿病足潰瘍并創(chuàng)面感染患者24例（觀察組），其中單一感染18例（單一感染組）、混合感染6例（混合感染組），根據(jù)Wagnar分類標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ級(jí)潰瘍9例、Ⅲ級(jí)潰瘍15例。選擇同期糖尿病足潰瘍非感染患者20例作為對(duì)照組。采用ELISA法測(cè)定創(chuàng)面滲液中MMP-2及TIMP-2水平，并計(jì)算MMP-2／TIMP-2。結(jié)果 與對(duì)照組比較，觀察組創(chuàng)面滲液中MMP-2水平高，TIMP-2水平低，MMP-2／TIMP-2高（P均＜0.05）。與混合感染組比較，單一感染組MMP-2水平低（P＜0.05）；兩組TIMP-2水平、MMP-2／TIMP-2比較，P均＞0.05。與Ⅲ級(jí)潰瘍比較，Ⅱ級(jí)潰瘍MMP-2、MMP-2／TIMP-2均低（P均＜0.05）；兩者TIMP-2比較，P＞0.05。結(jié)論 糖尿病足潰瘍伴感染患者創(chuàng)面滲液中MMP-2水平升高，TIMP-2水平降低；且細(xì)菌感染種類越多、潰瘍級(jí)別越高，MMP-2水平越高，但TIMP-2水平與細(xì)菌感染種類、潰瘍級(jí)別無關(guān)。

糖尿病足；糖尿病足潰瘍；基質(zhì)金屬蛋白酶2；基質(zhì)金屬蛋白酶2抑制因子

有15%～20%的糖尿病患者發(fā)生下肢潰瘍［1］，其中85%的下肢截肢糖尿病患者歸因于足潰瘍。而糖尿病足潰瘍伴感染（DFI）是常見且較嚴(yán)重的一種并發(fā)癥。研究結(jié)果顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）與基質(zhì)金屬蛋白酶2抑制因子（TIMP-2）水平的變化對(duì)糖尿病足感染創(chuàng)面及組織創(chuàng)傷具有重要作用［2］。2012年8月～2013年7月，我們觀察了DFI患者創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平變化。現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選擇萊陽市第二人民醫(yī)院DFI患者24例（觀察組），均符合1999年WHO的DFI標(biāo)準(zhǔn)［3］，均為2型糖尿病。其中男14例、女10例，年齡28～79（56.32±6.84）歲，病程均＞1個(gè)月。根據(jù)潰瘍局部分泌物細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果顯示，單一感染18例（單一感染組）、混合感染6例（混合感染組）；根據(jù)Wagnar分類標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ級(jí)潰瘍9例、Ⅲ級(jí)潰瘍15例。選擇同期接受診治的糖尿病足潰瘍非感染患者20例作為對(duì)照組，均為2型糖尿病。其中男10例、女10例，年齡27～75（55.44±7.56）歲，病程均＞1個(gè)月。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組均排除嚴(yán)重肝腎功能不全、免疫缺陷疾病、下肢靜脈性潰瘍及中途退出手術(shù)治療者。

1.2創(chuàng)面滲液中MMP-2及TIMP-2水平檢測(cè) 收集滲出液前晚不再進(jìn)食，第2天清晨將患者創(chuàng)面采用無菌半透明塑料膜進(jìn)行覆蓋，患肢下垂，每次間隔1 h在塑料膜下進(jìn)行抽液，置于管中。將收集到的液體離心，以3 000 r／min離心15～20 min，收集上清液于消毒的干燥EP管中，放于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩２捎肊LISA法檢測(cè)MMP-2及TIMP-2，并計(jì)算MMP-2／TIMP-2。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組創(chuàng)面滲液MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較 與對(duì)照組比較，觀察組創(chuàng)面滲液中MMP-2水平高，TIMP-2水平低，MMP-2／TIMP-2高（P均＜0.05）。見表1。

表1　兩組創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

表1　兩組創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別nMMP-2（ng／mL）TIMP-2（ng／mL）MMP-2／TIMP-2觀察組2484.13±14.92*13.04±2.67*6.97±2.48*對(duì)照組2035.24±5.1731.16±4.011.03±0.31

2.2單一感染組與混合感染組創(chuàng)面滲液MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較 與混合感染組比較，單一感染組MMP-2低（P＜0.05）；兩組TIMP-2水平、MMP-2／TIMP-2比較，P均＞0.05。見表2。

表2　單一感染組與混合感染組創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

表2　單一感染組與混合感染組創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

注：與混合感染組比較，*P＜0.05。

組別nMMP-2（ng／mL）MMP-2／TIMP-2單一感染組1880.07±13.49*TIMP-2（ng／mL）13.01±2.436.42±2.30混合感染組697.36±12.2512.73±2.167.61±1.45

2.3Ⅱ級(jí)潰瘍與Ⅲ級(jí)潰瘍創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較 與Ⅲ級(jí)潰瘍比較，Ⅱ級(jí)潰瘍MMP-2、MMP-2／TIMP-2均低（P均＜0.05）；兩者TIMP-2比較，P＞0.05。見表3。

表3　Ⅱ級(jí)潰瘍與Ⅲ級(jí)潰瘍創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

表3　Ⅱ級(jí)潰瘍與Ⅲ級(jí)潰瘍創(chuàng)面滲液中MMP-2、TIMP-2水平及MMP-2／TIMP-2比較（±s）

注：與Ⅲ級(jí)潰瘍比較，*P＜0.05。

潰瘍分級(jí)nMMP-2（ng／mL）MMP-2／TIMP-2Ⅱ級(jí)潰瘍974.18±9.61*13.73±2.945.68±1.42 TIMP-2（ng／mL）*Ⅲ級(jí)潰瘍1592.85±16.79 12.56±2.117.97±2.38

3　討論

糖尿病足潰瘍是糖尿病的一種嚴(yán)重慢性并發(fā)癥，導(dǎo)致糖尿病足潰瘍主要因素是血管病變與神經(jīng)病變，而繼發(fā)感染則會(huì)引起潰瘍加重，是導(dǎo)致截肢與壞疽的重要因素［4］。DFI非常常見，近七成以上的糖尿病足潰瘍合并感染，而一旦發(fā)生感染，往往導(dǎo)致病情迅速惡化，使?jié)兠嫦蛏畈堪l(fā)展，并導(dǎo)致潰瘍面長(zhǎng)期無法愈合［5］。DFI造成感染創(chuàng)面，隨著細(xì)菌數(shù)量的增多，炎癥的浸潤程度也將加重。由于機(jī)體炎性反應(yīng)的持續(xù)存在，容易形成“瀑布效應(yīng)”，使創(chuàng)面上的炎性因子含量明顯增加，并誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生MMP及TIMP［6］。MMP是含有Zn2+的一類內(nèi)源性蛋白水解酶［7］，也是降解細(xì)胞外基質(zhì)的一種主要酶，其能夠降解除了多糖之外的細(xì)胞外基質(zhì)成分，同時(shí)能夠激活其他MMP從而形成級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)［8］。在MMP的眾多成員之中，MMP-2為明膠酶A，屬于明膠酶類，主要的水解底物為明膠，Ⅳ、Ⅴ型膠原蛋白以及纖維黏連蛋白等，是基質(zhì)降解的一種關(guān)鍵酶，由于其能夠降解動(dòng)脈壁基底膜的主要成分之一——Ⅳ型膠原，因此MMP-2又被稱為Ⅳ型膠原酶的基質(zhì)金屬蛋白酶［9］。TIMP是金屬蛋白酶組織抑制因子，它是MMP的內(nèi)源性特異性抑制因子，主要功能為抑制MMP，從而調(diào)節(jié)正常細(xì)胞外基質(zhì)的代謝以及各種病理過程。其中TIMP-2是MMP-2的一種特異性抑制劑，它隨著MMP-2的表達(dá)而表達(dá)，同時(shí)很少受細(xì)胞因子的誘導(dǎo)。若MMP水平上升和（或）TIMP水平下降，將使創(chuàng)面形成一種過度的蛋白水解環(huán)境，從而造成大量創(chuàng)面基質(zhì)水解，進(jìn)而導(dǎo)致DFI患者的傷口愈合失敗。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，觀察組創(chuàng)面滲液中MMP-2水平高；TIMP-2水平低，MMP-2／TIMP-2高（P均＜0.05）。與混合感染組比較，單一感染組MMP-2低（P＜0.05）；兩組TIMP-2水平、MMP-2／TIMP-2比較，P均＞0.05。與Ⅲ級(jí)潰瘍比較，Ⅱ級(jí)潰瘍MMP-2、MMP-2／TIMP-2均低（P均＜0.05）；兩者TIMP-2比較，P＞0.05。與葉林等［10］研究結(jié)果相符。提示DFI患者M(jìn)MP-2、TIMP-2水平均發(fā)生了變化，隨著感染細(xì)菌種類的增加、潰瘍級(jí)別的升高，MMP-2水平升高。不同感染細(xì)菌種類及潰瘍級(jí)別DFI患者TIMP-2水平差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因有待進(jìn)一步探討。

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.031

R587.2

B

1002-266X（2016）21-0077-02

趙鵬飛（E-mail：307798055＠qq.com）

（2016-04-25）