膠體金免疫層析試紙條在豬尿β興奮劑多殘留檢測中的應用

李 莎,白瑞櫻,曾道平,伍志權,沈玉棟,徐振林,楊金易

(1.華南農業大學食品學院,農業部農產品貯藏保鮮質量安全風險評估實驗室,廣東省食品質量安全重點實驗室,廣東廣州 510642;2.新鄉醫學生理學與神經生物學教研室,河南新鄉 453003;3.廣州萬聯生物科技有限公司,廣東廣州 510642;4.廣東匯信農產品檢驗有限公司,廣東佛山 528200)

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李 莎,白瑞櫻,曾道平,伍志權,沈玉棟,徐振林,楊金易

(1.華南農業大學食品學院,農業部農產品貯藏保鮮質量安全風險評估實驗室,廣東省食品質量安全重點實驗室,廣東廣州 510642;2.新鄉醫學生理學與神經生物學教研室,河南新鄉 453003;3.廣州萬聯生物科技有限公司,廣東廣州 510642;4.廣東匯信農產品檢驗有限公司,廣東佛山 528200)

本研究采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液,并對β-興奮劑單克隆抗體進行標記。通過棋盤滴定法和單因素實驗確定最佳的實驗參數,研制出能同時檢測多種β-興奮劑的膠體金免疫層析試紙條。結果表明,本方法對克倫特羅的靈敏度最高,檢測線性范圍(IC20～IC80)為0.31～4.52 μg/L,IC50為1.18 μg/L,檢出限(LOD,IC10)為0.14 μg/L,豬尿樣品無需處理,直接檢測,單個樣品檢測時間只需8 min;與沙丁胺醇、馬布特羅、溴布特羅、氯丙那林、西馬特羅等β-興奮劑類藥物都有交叉,能實現β-興奮劑的多殘留檢測。對陰性豬尿的加標回收實驗中,試紙條批內實驗回收率在83.6%～102.2%之間,試紙條批間實驗回收率在84.2%～101.5%之間,且相對標準偏差均在10%以內,與ELISA、HPLC/MS法的對比實驗表明,該試紙條能應用于豬尿中β-興奮劑多殘留的定量檢測。

膠體金,免疫層析試紙條,β-興奮劑,定量檢測,多殘留檢測

β-興奮劑(β-agonist)全稱β-腎上腺素受體激動劑(β-adrenoceptor agonist),是一類化學結構和生理功能類似腎上腺素和去腎上腺素的苯乙胺類藥物[1]。β-興奮劑在臨床上常用于防治人、畜的支氣管痙攣和哮喘等病癥[2]。大劑量的β-興奮劑能影響營養物質在動物體內的重新分配,加快脂肪的分解代謝,增加蛋白質的合成,顯著提高瘦肉率[3]。因此,β-興奮劑曾被作為飼料添加劑廣泛用于畜牧生產中。β-興奮劑在動物內臟蓄積嚴重,能通過食物鏈進入人體,使人出現心悸、頭暈、心律失常等癥狀,嚴重時甚至會導致死亡[4]。我國農業部發布的第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》明確規定克倫特羅、沙丁胺醇、西馬特羅及其鹽、酯類不得檢出,第1519號公告《禁止在飼料和動物飲水中使用的物質》中馬布特羅、溴布特羅、氯丙那林也被列其中。目前用于β-興奮劑多殘留檢測的方法很多,包括氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)[5-6]、超高效液相色譜-質譜聯用(UHPLC-MS)[7]、液相色譜-質譜聯用(LC-MS/MS)[8]、酶聯免疫法(ELISA)[9]、化學發光法[10]、電化學傳感器[11-12]和其他新型檢測方法[13]等。雖然這些方法靈敏度高、特異性好、準確度高,但是這些方法需要專業實驗人員、大型實驗儀器和繁瑣的樣品預處理。

膠體金免疫層析檢測技術(colloidal gold immunochromatographic assay,GICA)因其快速、方便,適用于現場篩查,被廣泛應用于食品安全檢測中[14-17]。目前用于檢測β-興奮劑殘留的膠體金免疫層析檢測技術已經很多[18-20],Zhang等建立了同時檢測克倫特羅和萊克多巴胺的膠體金免疫層析試紙條,兩者的靈敏度均為(0.1±0.01) ng/mL[18]。近年來關于免疫層析試紙條定量檢測的報道越來越多,其中使用T/C比值法來實現定量檢測是目前最常用的方法,該方法能夠在一定時間內消除免疫反應動力學的差異,縮短判讀時間[21-22]。本研究基于膠體金標記β-興奮劑單克隆抗體,結合方便、快捷的免疫層析定量檢測技術,建立了同時檢測豬尿中多種β-興奮劑殘留的膠體金免疫層析定量檢測方法,對于食品中快速篩查β-興奮劑具有重要參考價值和實際應用。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺 中國獸醫藥品檢查所;馬布特羅、溴布特羅、西馬特羅、氯丙那林、鹽酸腎上腺素、硫酸異丙腎上腺素及重酒石酸去甲腎上腺素 阿拉丁試劑;β-興奮劑單克隆抗體(31D11細胞株)、包被原(CL-BSA)、羊抗鼠 廣州優抗多生物技術有限公司;氯金酸 美國Sigma公司;檸檬酸三鈉 廣州市化學試劑廠;牛血清白蛋白BSA 美國Sigma公司;硝酸纖維素膜 美國Whatan公司;玻璃纖維素膜 美國Ahlstrom公司;吸水紙、PVC底板 基因有限公司;其余試劑 均為國產分析純;β-興奮劑ELISA商業化試劑盒 廣州萬聯生物技術有限公司,陰性豬尿 由廣東溫氏食品集團股份有限公司提供。

膠體金免疫層析讀數儀 南京微測生物科技有限公司;HGS 510劃膜噴金標機、HGS 201高速切條機 杭州峰航科技有限公司;超低溫高速離心機 美國Eppenndorf公司;磁力攪拌器 德國IKA公司;S-520掃描電鏡 日本日立公司;NanoDrop 2000c微量紫外分光光度計 美國Thermo公司;DHG-9123A型電熱恒溫鼓風干燥箱 上海一恒科技有限公司;多功能酶標儀 美國Thermo公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 膠體金溶液的制備 采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液[23]。在圓底燒瓶加入200 mL 0.01%的氯金酸溶液,燒至沸騰后迅速加入4 mL 1%檸檬酸三鈉水溶液,觀察溶液顏色,溶液由黃色變成灰色,后逐漸變成紅色,繼續攪拌加熱3 min,直至溶液的顏色穩定后,關閉電源繼續攪拌5 min,靜置冷卻后轉移到玻璃瓶中,4 ℃冰箱保存,并采用透射電鏡鑒定質量。

1.2.2 金標抗體的制備 將10 mL膠體金溶液加入50 mL的具塞玻璃瓶中,加入80 μL 0.1 mol/L K2CO3調節膠體金溶液到最佳pH,放置于磁力攪拌器上攪拌均勻。再加入9.6 μL的β-興奮劑單克隆抗體至膠體金溶液中,室溫下攪拌30 min。再逐滴加入1/10體積的10% BSA封閉液來封閉多余的膠體金結合位點,持續攪拌30 min。然后12000 r/min離心20 min,去除上清液,再加入復溶液將金標抗體濃縮為原體積1/5,4 ℃保存待用。

1.2.3 膠體金免疫層析試紙條制備及參數的優化 試紙條由金標結合墊、硝酸纖維膜(NC膜)、樣品墊、吸水墊和底板(PVC)5部分組成。將金標結合墊裁成4 mm的細條,將制備好的金標結合物鋪注在結合墊上,置于37 ℃恒溫烘干,烘干后備用。將制備好的15 mm吸水墊、25 mm NC膜、4 mm金標結合墊、18 mm樣品墊,由頂部依次粘于PVC板上,用切條機切成4 mm寬的試紙條裝入檢測卡中即完成試紙條的組裝。

表1 棋盤滴定優化金標稀釋倍數和CL-BSA噴涂濃度

通過棋盤滴定實驗確定最優的金標抗體稀釋倍數和CL-BSA噴涂濃度,選取陰性樣本T、C線顯色正常,陽性樣本(c(CL)=1.5 μg/L)抑制率最高為最優條件,并對膠體金免疫層析試紙條T、C線免疫反應動力學曲線進行測定,步驟如下:將70 μL陰性質控滴加在試紙條的加樣孔中,每隔1 min用膠體金免疫層析讀數儀讀取試紙條中T、C線的T、C值及T/C值,并追蹤記錄30 min。

1.2.4 膠體金免疫層析試紙條標曲的建立 取陰性的豬尿樣品配制濃度分別為0、0.0156、0.0625、0.250、1.00、4.00、16.0、64.0 μg/L的系列標準溶液,用于試紙條檢測,每個濃度重復檢測3次,8 min后用膠體金免疫層析讀數儀讀取試紙條T/C比值。以不同濃度標準品的T/C為縱坐標,標準品濃度對數為橫坐標做圖,采用Origin軟件對實驗數據進行擬合,繪制試紙條競爭抑制曲線,計算試紙條50%競爭抑制率濃度以及確定試紙條檢測線性范圍。

1.2.5 交叉反應率 以克倫特羅(CL)交叉反應率(CR)為100%,采用1.2.4的方法分別繪制β-興奮劑化學結構和生理功能的類似物的競爭抑制曲線,通過公式(1)計算β-興奮劑類似物對CL的交叉反應率:

式(1)

1.2.6 膠體金免疫層析試紙條方法評價 分別用批內、批間試紙條的回收率和相對標準偏差(RSD)來評價試紙條的精確度。批內實驗是使用同一批試紙條對樣品進行檢測(n=3),計算回收率和相對標準偏差(RSD);批間實驗是使用不同批試紙條每隔5 d連續3次對樣品進行檢測(n=3),計算回收率和相對標準偏差(RSD)。

與商業化的ELISA進行比較來驗證膠體金試紙條的實用性。采用同一批試紙條以及商品化的β-興奮劑ELISA試劑盒同時檢測20份含有不同濃度CL的尿樣,計算CL的濃度,并比較膠體金免疫層析試紙條定量方法與ELISA試劑盒定量方法的相關性,采用與HPLC/MS進行比較來驗證膠體金試紙條的準確性。采用同一批試紙條以及HPLC/MS同時檢測9份含有不同濃度CL的尿樣,計算CL的濃度,并比較膠體金免疫層析試紙條定量方法與HPLC/MS方法的相關性。

2 結果與分析

2.1 膠體金質量鑒定

制備的膠體金采用透射電子顯微鏡表征,如圖1所示,制備的膠體金顆粒呈圓形、大小均一,隨機挑選20個膠體金顆粒,計算平均值為18 nm。

圖1 膠體金透射電鏡圖(80 k)Fig.1 TEM image of colloidal gold particles(80 k)

2.2 膠體金免疫層析試紙條參數的優化

金標抗體的稀釋倍數和CL-BSA噴涂濃度會影響試紙條T、C線深淺以及試紙條檢測靈敏度。本實驗通過棋盤滴定法優化CL-BSA噴涂濃度和金標抗體的稀釋倍數,使試紙條的陰性顯色和檢測靈敏度最佳。如表1可以得出,隨著CL-BSA濃度增加和金標抗體稀釋倍數的減小,T、C線的讀數逐漸增加,且抑制率下降。由表1可知,第5、6、9組抑制率相差不大,從中選取抑制率較高且讀數較大的一組——當金標抗體稀釋倍數為1.5倍,CL-BSA噴涂濃度為0.68 mg/mL時,試紙條在克倫特羅(CL)的標品濃度為1.5 ng/mL時的抑制率達到55.42%,且試紙條T、C線的讀數相對較強,選此條件進行下一步實驗。

膠體金免疫層析試紙條反應時間的確定是試紙條定量檢測的前提。試紙條上T、C讀數隨時間的變化可以間接反映免疫學中抗原抗體的動態反應過程。本實驗用膠體金免疫層析讀數儀每隔1 min記錄試紙條T、C和T/C比值,追蹤記錄30 min。如圖2可知,在30 min內T、C線的讀數隨著時間延長不斷升高,22 min后趨于穩定;但T/C比值在8 min之后就趨于穩定,且隨后8～30 min無明顯變化,表明T/C值的定量方法能夠在一定時間內消除免疫反應動力學的差異,縮短判讀時間。因此,膠體金免疫層析試紙條定量檢測時間為8 min。

圖2 膠體金免疫層析試紙條T、C線免疫反應動力學曲線的測定Fig.2 The determination of the kinetic reaction curve of test line and control line of Colloidal gold immunochromatographic strip

2.3 膠體金免疫層析試紙條標曲的建立

為了減少樣品基質的干擾,本實驗直接在陰性豬尿中添加CL標準品,用來配置CL系列標準樣品,建立膠體金免疫層析試紙條的標準曲線,見圖3。

表2 交叉反應測定結果

表3 膠體金免疫層析試紙條的精密度和準確度

在最佳的優化條件下建立GICA的標準曲線的檢測線性范圍為(IC20～IC80)為0.31～4.52 μg/L,50%競爭抑制率濃度(IC50)為1.18 μg/L,檢出限(IC10)為0.14 μg/L。

圖3 克倫特羅膠體金免疫層析試紙條競爭抑制曲線Fig.3 Standard curve for CL by Colloidal gold immunochromatographic strip

2.4 交叉反應

β-興奮劑是一類化學結構和生理功能類似的苯乙胺類衍生物。以CL的交叉反應率(CR)為100%,本實驗測定了10種結構功能類似的β-興奮劑的交叉反應率。如表2,沙丁胺醇、馬布特羅、溴布特羅、氯丙那林、西馬特羅對克倫特羅都有交叉率。說明此種方法可以對β-興奮劑進行多殘留檢測。

2.5 膠體金免疫層析試紙條方法評價

選取CL、SAL兩種標準品進行添加回收實驗,分別測量回收率和相對標準偏差(RSD)對膠體金免疫層析試紙條進行方法評價。在陰性的豬尿中分別添加不同濃度的CL、SAL標準品,用膠體金免疫層析試紙條進行檢測,以膠體金免疫層析試紙條批內、批間的回收率和相對標準偏差(RSD)來評價該方法的準確性和精確度。結果如表3所示,當CL的加標濃度為0.5、1.5、3 μg/L時,試紙條的批內回收率為91.8%、94.4%、97.2%,批間回收率為84.2%、91.2%、102.3%;當SAL加標濃度為1.0、2.0、4.0 μg/L時,試紙條的批內回收率為83.6%、84.2%、102.2%,批間回收率為86.7%、96.2%、101.5%,且試紙條批內、批間的相對標準偏差(RSD)都小于10%。以上結果表明,該方法具有良好的回收率和相對標準偏差(RSD),能夠應用于β-興奮劑多殘留的定量檢測中。

2.6 與ELISA試劑盒比較

將膠體金免疫層析試紙條與商業化的ELISA試劑盒進行比較,對膠體金免疫層析試紙條的實用性進行評價。在20份陰性豬尿中添加一系列1.0～3.0 μg/L的CL,采用同一批試紙條和ELISA試劑盒進行檢測,分別計算CL的含量。由圖4可知,兩種方法的線性相關方程為y=0.9759x+0.1283,R2=0.9647,表明這兩種方法有較好的相似性。且與商業化的ELISA試劑盒相比,膠體金免疫層析試紙條操作簡單,檢測時間短,能夠更好的應用于實際樣品的篩查中。

圖4 GICA與ELISA方法的比較Fig.4 Methodology comparison between the GICA and ELISA methods

2.7 與HPLC/MS方法的比較

將膠體金免疫層析試紙條與HPLC/MS方法進行比較,進一步對膠體金免疫層析試紙條的準確性進行評價。在3份陰性豬尿中分別添加0.5、1.5、3.0μg/L的CL,采用同一批試紙條和HPLC/MS方法進行檢測,分別計算CL的含量。由圖5可知,兩種方法的線性相關方程為y=1.1509x-0.0552,R2=0.9643,表明這兩種方法有較好的相似性,說明該研究研制的試紙條檢測方法準確可靠。

圖5 GICA與HPLC/MS方法的比較Fig.5 Methodology comparison between the GICA and HPLC/MS methods

3 結論

本研究成功建立了豬尿中β-興奮劑多殘留的膠體金免疫層析技術。實驗結果表明,該方法結合T/C定量檢測方法,對豬尿中克倫特羅的檢測范圍在0.31～4.52 μg/L,豬尿樣品無需處理,直接檢測,檢測時間只需8 min;且與沙丁胺醇、馬布特羅、溴布特羅、氯丙那林、西馬特羅等β-興奮劑類藥物都有交叉,能實現β-興奮劑的多殘留檢測。將本實驗研制的試紙條和ELSA、HPLC/MS同時對豬尿樣品進行檢測,該方法與ELISA、HPLC/MS結果基本相符,說明該方法有較好的準確性和實用性。

[1]汪慧蓉.β-興奮劑克倫特羅、沙丁胺醇的免疫檢測方法研究[D]. 西安:西北大學,2006.

[2]Kips J C,Pauwels R A. Long-acting inhaled beta2-agonist therapy in asthma[J]. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine,2001,164(6):923-932.

[3]Mersmann H J. Overview of the effects of beta-adrenergic receptor agonists on animal growth including mechanisms of action[J]. Journal of Animal Science,1998,76(1):160-172.

[4]Salpeter S R,Buckley N S,Ormiston T M,et al. Meta-analysis:Effect of long-acting beta-agonists on severe asthma exacerbations and asthma-related deaths[J]. Annals of Internal Medicine,2006,144(12):904-912.

[5]Wang L,Li Y,Zhou Y,et al. Determination of Fourβ2-Agonists in Meat,Liver and Kidney by GC-MS with Dual Internal Standards[J]. Chromatographia,2010,71(7-8):737-739.

[6]Bocca B,Fiori M,Cartoni C,et al. Simultaneous determination of zilpaterol and other beta agonists in calf eye by gas chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Journal of AOAC International,2003,86(1):8-14.

[7]Wang L,Pu R C,Wang X X,et al. Multiresidue Determination ofβ2-Agonists Including Phenylethanolamine A in Animal-Derived Food by Ultra-High Performance Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry[J]. Journal of Chromatographic Science,2015,53(6):925-931.

[8]Wang L,Zeng Z,Wang X,et al. Multiresidue analysis of nine beta-agonists in animal muscles by LC-MS/MS based on a new polymer cartridge for sample cleanup[J]. Journal of Separation Science,2013,36(11):1843-1852.

[9]Ren X,Zhang F,Chen F,et al. Development of a sensitive monoclonal antibody-based ELISA for the detection of clenbuterol in animal tissues[J]. Food and Agricultural Immunology,2009,20(PII 9168559194):333-344.

[10]Wu Y,Xu F,Jiang H,et al. Determination of Salbutamol,Clenbuterol,and Brombuterol in Urine by a Highly Sensitive Chemiluminescence Enzyme Immunoassay[J]. Analytical Letters,2014,47(16):2761-2773.

[11]Lin X,Ni Y,Kokot S. A novel electrochemical sensor for the analysis ofβ-agonists:The poly(acid chrome blue K)/graphene oxide-nafion/glassy carbon electrode[J]. Journal of Hazardous Materials,2013,260:508-517.

[12]Wang H,Zhang Y,Li H,et al. A silver-palladium alloy nanoparticle-based electrochemical biosensor for simultaneous detection of ractopamine,clenbuterol and salbutamol[J]. Biosensors and Bioelectronics,2013,49:14-19.

[13]Chen X,Luo Y,Shi B,et al. Chemiluminescence diminishment on a paper-based analytical device:high throughput determination of beta-agonists in swine hair[J]. Analytical Methods,2014,6(24):9684-9690.

[14]謝雪欽.免疫層析試紙條標記探針研究進展[J]. 食品安全質量檢測學報,2014(7):2138-2145.

[15]謝艷君,楊英,孔維軍,等. 基于不同納米材料的側流免疫層析技術在真菌毒素檢測中的應用[J]. 分析化學,2015(4):618-628.

[16]徐超蓮,賴衛華,劉道峰. 膠體金免疫層析法檢測食品中天然存在的危害物質的研究進展[J]. 食品科學,2014(5):257-261.

[17]張道宏,李培武,張奇,等. 污染糧油食品的主要真菌毒素及膠體金免疫層析技術在快速檢測中的應用[J]. 中國油料作物學報,2010(4):577-582.

[18]Zhang M,Wang M,Chen Z,et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry,2009,395(8):2591-2599.

[19]李超輝,羅薇,徐波,等. 膠體金免疫層析試紙條定量檢測豬尿中克倫特羅[J]. 食品科學,2013,34(12):114-118.

[20]姜金慶,楊雪峰,王自良,等. 克倫特羅和萊克多巴胺多殘留膠體金免疫層析試紙條的研制[J]. 畜牧獸醫學報,2013(1):87-94.

[21]Duan H,Chen X,Xu W,et al. Quantum-DoT submicrobead-based immunochromatographic assay for quantitative and sensitive detection of zearalenone[J]. Talanta,2015,132:126-131.

[22]Ren M,Xu H,Huang X,et al. Immunochromatographic Assay for Ultrasensitive Detection of Aflatoxin B1 in Maize by Highly Luminescent Quantum Dot Beads[J]. ACS Applied Materials & Interfaces,2014,6(16):14215-14222.

[23]曾文亮,楊金易,王弘,等. 苯甲酸免疫膠體金快速檢測試紙條的研制[J]. 食品工業科技,2013(16):70-74.

Investigation of colloidal gold immunochromatographic strip for quantitative determination of variety ofβ-agonists in swine urine

LI Sha1,BAI Rui-ying2,ZENG Dao-ping3,WU Zhi-quan4,SHEN Yu-dong1,*,XU Zhen-lin1,YANG Jin-yi1,*

(1.Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment in Agricultural Products Preservation Ministry of Agriculture,Guangdong Provincial Key Laboratory of Food Quality and Safety,College of Food Science,South China Agriculture University,Guangzhou 510642,China;2.Department of Physiology and Neurobiology,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003,China;3.Guangzhou Wanlian Biological Technology Co.,Ltd.,Guangzhou 510642,China;4.Guangdong Huixin Agricultural product Inspection Co.,Ltd.,Foshan 528200,China)

In this study,the colloidal gold was obtained by reducing gold chloride with sodium citrate. Then,the colloidal gold and beta-agonists monoclonal antibody was conjugated. By optimized experimental parameters with chessboard titration method and single factor experiment,a method for Colloidal gold immunochromatographic quantitative detection of variety of beta-agonists in swine urine was established. The results showed that the method exhibited dynamic linear range(IC20～IC80)for the detection of clenbuterol(CL)from 0.31 μg/L to 4.52 μg/L,with the median inhibitory concentration(IC50)of 1.18 μg/L,the limit of detection(LOD,IC10)was 0.14 μg/L. Samples were detected directly without treatment,the detection time was only 8 min for each sample. The result showed that the developed method had cross reaction rate with salbutamol,mabuterol,brombuterol,cimaterol,clorprenaline and other beta-agonists,which could achieve multiresidue determination of beta-agonists. In the negative swine urine sample standard addition recovery experiment,the recoveries for intra-assay ranged from 83.6% to 102.2% and inter-assay ranged from 84.2% to 101.5%,and the relative standard deviation of intra-assay and inter-assay were both less than 10%. The comparison experiment with ELISA and HPLC/MS tests showed that the test strip could be used in the multiresidue determination of beta-agonists in swine urine.

colloidal gold;immunochromatographic test strip;beta-agonists;quantitative detection;multiresidue determination

2016-05-04

李莎(1990-),女,在讀碩士研究生,研究方向:食品質量與安全,E-mail:lisha199007@163.com。

廣州市珠江科技新星專項(2013J2200080);國家星火計劃項目(2012GA780001,2013GA780035);廣東省自然科學基金項目(S2013030013338);NSFC-廣東聯合基金項目(U1301214);國家科技支持計劃課題(2012BAD31B0302);廣東省科技計劃項目(2012A020100002);廣州市科技計劃項目(2014J4200015)。

TS207.3

A

1002-0306(2016)20-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2016.20.000

*通訊作者:沈玉棟(19 -),

楊金易(1979-),男,博士,副研究員,研究方向:食品質量與安全,E-mail:yjy361@163.com。