豆腐柴葉總黃酮的提取、純化及抗氧化活性研究

胡 予,李旭升,馬 楠,張學敏,毛御波,陳黎萍,熊雙麗,薛朝貴

(1.西南科技大學生命科學與工程學院,四川綿陽 621010;2. 四川省生物質資源利用與改性工程技術研究中心,四川綿陽 621010;x3.江油市春雨生態農業科技有限公司,四川江油 621700)

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豆腐柴葉總黃酮的提取、純化及抗氧化活性研究

胡 予,李旭升,馬 楠,張學敏,毛御波,陳黎萍,熊雙麗,薛朝貴

(1.西南科技大學生命科學與工程學院,四川綿陽 621010;2. 四川省生物質資源利用與改性工程技術研究中心,四川綿陽 621010;x3.江油市春雨生態農業科技有限公司,四川江油 621700)

在單因素實驗基礎上,采用響應面法優化豆腐柴葉總黃酮提取工藝,并篩選適合于純化總黃酮的大孔吸附樹脂,最后進行初步鑒定和自由基清除活性分析。結果表明:乙醇浸提總黃酮最佳工藝條件為:乙醇濃度84%、料液比1∶37(g/mL)、溫度81 ℃、時間3.4 h,該條件下總黃酮得率為7.29%。X-5型大孔吸附樹脂適用于提取豆腐柴葉總黃酮。紫外-可見光譜分析和顯色反應初步鑒定其可能為二氫黃酮。豆腐柴葉總黃酮DPPH自由基和羥基自由基的清除率隨濃度的增加而增大,半數抑制濃度值分別為0.10 mg/mL和0.13 mg/mL。當濃度為0.2 mg/mL和0.4 mg/mL時,DPPH自由基和羥基自由基清除率分別為83.75%和80.08%,均接近于叔丁基羥基茴香醚。因此,豆腐柴總黃酮具有較好的抗氧活性,可作為抗氧化劑或者健康食品原料開發。

豆腐柴,總黃酮,提取工藝,優化,抗氧化活性

豆腐柴,又名臭黃荊、觀音草,為馬鞭科豆腐柴屬多年生落葉灌木,高達2～6 m,生長期為每年3～11月,主要分布于我國華南、華東、華中、四川、貴州等地區,日本也有分布[1]。豆腐柴葉中不僅含有大量的果膠、粗纖維、粗蛋白、可溶性糖,還含有豐富的礦物質和黃酮類物質[2]。黃酮類化合具有抗病毒、抗菌、抗衰老、抗腫瘤和抗氧化等生物活性[3],豆腐柴植物顯著的抗炎作用和增強機體非特異性免疫功能的作用可能與其黃酮類成分有關[4-5]。近年來,多位學者對豆腐柴黃酮通過不同方式嘗試了提取,羅文謙等[6]用乙醇超聲波浸提測得秦巴山區豆腐柴葉總黃酮約為6.06%,曹穩根等[7]用微波法提取測得安徽地區豆腐柴葉總黃酮為6.32%,而林穎華等[8]用響應面優化超聲輔助提取測得廣西地區豆腐柴葉總黃酮約為0.81%。四川綿陽江油地區豆腐柴資源豐富,且有用豆腐柴樹葉加工樹葉豆腐的傳統習慣。目前豆腐柴葉中總黃酮的提取工藝優化雖有報道,但關于四川江油地區豆腐柴葉黃酮的提取、分離純化和抗氧化活性等研究很少報道。為更好的了解與利用江油地區豆腐柴資源,本文以江油豆腐柴為原料,首先優化豆腐柴黃酮提取工藝,再采用大孔吸附樹脂對其進行分離純化,最后進行自由基清除活性研究,為江油豆腐柴葉綜合利用提供理論和應用基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

豆腐柴 2015年10月中旬采摘于四川綿陽江油豆腐柴基地(江油市春雨生態農業科技有限公司);蘆丁對照品 南京替斯艾么中藥研究所;DPPH自由基(二苯代苦味肼基自由基)、叔丁基羥基茴香醚(BHA)SIGMA ALDRICH公司;D101、D201、X-5、HZ-806 天津海光化工有限公司;乙醇、VC、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉等 均為分析純。

UV-5800PC紫外可見光分光光度計 上海元析儀器有限公司;MODUL YOD-230冷凍干燥機 美國Thermo Fisher Scientific公司;U-3900H紫外分光光度計 日本日立公司;SF-TDL-550臺式低速大容量離心機 上海菲恰爾分析儀器有限公司;Frontier紅外吸收光譜儀 美國Perkinelmer公司。

1.2 豆腐柴葉總黃酮的提取

1.2.1 工藝流程 洗凈的豆腐柴葉→50 ℃烘干,粉碎過40目篩→精密稱取5.000 g粉末→取一定濃度乙醇水溶液,按一定料液比、提取溫度及提取時間水浴浸提→離心(3800 r/min,10 min)→提取液總黃酮含量測定,計算總黃酮得率。

1.2.2 總黃酮的測定 按照參考文獻[9]中方法,繪制蘆丁標準曲線,測定并計算提取液總黃酮含量與得率。標準曲線為y=0.8814 x+0.0227,相關系數R2=0.9995,x為蘆丁標準液濃度(mg/mL)。準確吸取待測液1.00 mL,按照上述方法添加試劑,通過回歸方程算得總黃酮得率。公式如式(1)所示。

(1)

式中:A-樣品溶液的吸光值;M-提取前豆腐柴葉質量,g。

1.2.3 總黃酮提取工藝單因素實驗 在實驗室研究和參考相關黃酮提取分離資料,主要探討乙醇濃度、料液比、溫度和提取時間對總黃酮得率的影響。

控制料液比1∶20、提取溫度80 ℃、提取時間2 h,考察乙醇濃度(55%、65%、75%、85%、95%)對總黃酮得率的影響。

控制乙醇濃度85%、提取溫度80 ℃、提取時間2 h,考察料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50 g/mL)對總黃酮得率的影響。

控制乙醇濃度85%、料液比1∶20、提取時間2 h,考察提取溫度(50、60、70、80、90 ℃)對總黃酮得率的影響。

控制乙醇濃度85%、料液比1∶20、提取溫度80 ℃,考察提取時間(1、2、3、4、5 h)對總黃酮得率的影響。

1.2.4 響應面分析法優化總黃酮提取工藝 根據單因素實驗結果,進行響應面實驗及分析,得到豆腐柴總黃酮最佳提取工藝,最后進行驗證。因素水平表見表1。

表1 因素水平編碼表

1.3 總黃酮的提取純化

1.3.1 總黃酮粗提液預處理 豆腐柴葉總黃酮提取液50 ℃真空濃縮至無醇味,得總黃酮粗提液,然后用石油醚對總黃酮提取液進行兩次萃取,再取水層濃縮除去殘留石油醚及絕大多數水得總黃酮萃取液,加入95%乙醇溶解,低溫靜置過夜沉降多糖、蛋白質等雜質,抽濾后濃縮除去乙醇,用去離子水稀釋得一定濃度的總黃酮純化液,測定其總黃酮濃度以備用[10-11]。

1.3.2 樹脂的預處理 樹脂先用95%乙醇浸泡4 h,再用乙醇洗至流出液加適量水至無白色渾濁現象,再用去離子水洗盡醇味后用5%鹽酸浸泡4 h,濾過后用去離子水洗至中性,用4%氫氧化鈉溶液浸泡4 h,最后用去離子水洗至中性備用。

1.3.3 樹脂的吸附性能和解吸附性能測定和樹脂篩選 精確稱取抽濾并經濾紙吸干過的樹脂(D101、D201、X-5、HZ-806)各1.00 g于200 mL錐形瓶中,分別加入25 mL濃度為0.984 mg/mL的豆腐柴葉總黃酮純化液,放入水浴振蕩器中振蕩靜態吸附24 h(30 ℃、100 r/min)后測定平衡液總黃酮濃度并計算吸附量和吸附率。依次抽濾后,將大孔樹脂移回錐形瓶中,精密加入25 mL 95%乙醇,再解吸附24 h,測定解吸液總黃酮濃度并計算解吸率。比較篩選出理想型大孔吸附樹脂。吸附量(Q)、吸附率(E)、解吸率(D)、回收率(R)分別按照以下公式計算:

式中:C0-溶液起始濃度,mg/mL;Ce-溶液平衡濃度,mg/mL;V0-吸附液體積,mL;m-樹脂質量,g;Cd-解吸液濃度,mg/mL;Vd-解吸液體積,mL。

1.4 豆腐柴葉總黃酮的初步鑒定

1.4.1 紫外光譜掃描分析 以95%乙醇校準基線,對經大孔吸附樹脂分離后的豆腐柴葉總黃酮分離液,于190～450 nm波長范圍內進行紫外-可見光譜掃描分析。

1.4.2 顯色反應 鹽酸-鋅粉反應、四氫硼鈉反應、鋁鹽反應、鎂鹽反應和濃硫酸反應[12]。

1.5 總黃酮自由基清除活性的測定

DPPH自由基清除活性測定[13],羥基自由基清除活性測定[14]。

1.6 數據處理

響應面實驗結果由軟件“Design-Expert 8.0.6”處理,其余數據由軟件“Excel 2013”處理。

2 結果與分析

2.1 乙醇濃度對總黃酮得率的影響

由圖1可看出,總黃酮得率隨乙醇濃度的增大而增大,當乙醇濃度達到85%時,總黃酮得率可達6.31%,乙醇濃度繼續增大,總黃酮得率下降。這可能取決于黃酮類物質的極性,總黃酮主要以糖苷與黃酮苷元的形式存在,糖苷型易溶于水,而苷元型易溶于乙醇[15],當達到乙醇溶液中的乙醇和水達到最佳配比時,得率可得到最大值。根據總黃酮得率隨乙醇濃度的變化趨勢,后續Box-Behnken實驗設計中乙醇濃度低水平選擇75%,高水平選擇95%。

圖1 乙醇濃度對總黃酮得率的影響Fig.1 Effects of ethanol concentration on extraction rate of total flavonoids

2.2 料液比對總黃酮得率的影響

由圖2可看出,總黃酮得率隨料液比增大而逐漸增大,當料液比達到1∶30時,總黃酮得率達6.93%,此后總黃酮得率趨于穩定。這主要是因為隨著提取液體積的增加,一方面增加了溶劑的擴散速率,另一方面增加了黃酮物質與溶劑的接觸面和保持了增加的濃度差,使得黃酮容易擴散游離出來,進一步提高了黃酮得率。但是當體積增加至一定值時,這種效應降低至無,或者黃酮本身已經最大程度游離。因此,在不影響總黃酮得率的情況下,從節約成本的角度考慮,后續Box-Behnken實驗設計中液比低水平選擇1∶20,高水平選擇1∶40。

圖2 料液比對總黃酮得率的影響Fig.2 Effects of materia/liquid ratio on extraction rate of total flavonoids

2.3 提取溫度對總黃酮得率的影響

控制乙醇濃度85%、料液比1∶20、提取時間2 h。由圖3可看出,總黃酮得率隨溫度的升高而逐漸增大,當溫度達到80 ℃時,總黃酮得率達6.31%。此后總黃酮得率逐漸下降。這可能是由于溫度逐漸升高時,提取液黏度系數逐漸減小,分子擴散系數增大,加快了滲透和傳遞的速度,使得黃酮類化合物從細胞中轉移到溶劑中。當溫度繼續升高,一方面可能由于乙醇揮發,導致提取液乙醇濃度下降,總黃酮溶解度下降;另一方面,溫度過高導致黃酮被氧化,活性受到了破壞,雜質的溶出也影響了浸提效果。因此后續Box-Behnken實驗設計中提取溫度低水平選70 ℃,高水平選擇90 ℃

圖3 提取溫度對總黃酮得率的影響Fig.3 Effects of extraction temperature on extraction rate of total flavonoids

2.4 提取時間對總黃酮得率的影響

由圖4可知,總黃酮得率隨提取時間增長而逐漸升高,當提取時間達到3 h時,總黃酮得率可達6.53%。此后總黃酮得率有減小趨勢,4 h時總黃酮得率為6.42%。這可能因為隨著時間的進一步增加,黃酮氧化分解。因此后續Box-Behnken實驗設計中提取時間低水平選擇2 h,高水平選擇4 h。

圖4 提取時間對總黃酮得率的影響Fig.4 Effects of extraction time on extraction rate of total flavonoids

2.5 響應面實驗

2.5.1 提取工藝優化 響應面實驗結果見表2,方差分析結果見表3。四個因子經過擬合得到的回歸方程為:

Y=7.17-0.20A+0.078B+0.24C+0.18D+0.15AB+0.022AC-0.15AD+0.050BC-0.020CD-0.85A2-0.12B2-0.17C2-0.61D2

表2 響應面分析方案及實驗結果

由R2=0.9551表示方程擬合度較好,說明這種實驗方法是可靠的。方差分析結果表明,該模型差異極顯著(p<0.01),失擬度不顯著(p>0.05),說明該模型很好地反映了實驗的實際情況,能用于豆腐柴葉總黃酮的提取或生產中。由方差分析結果可知,四個因素對總黃酮得率的影響的顯著性依次是:料液比>乙醇濃度>提取溫度>提取時間。由料液比、乙醇濃度、提取溫度三種因素的p值均<0.01,可知,料液比、乙醇濃度、提取溫度三種因素對總黃酮得率的影響極顯著。

兩兩因素相互作用對總黃酮得率的影響見圖5。3D圖形變化的坡度表示總黃酮變化的快慢,坡度越大,變化越快,即實驗條件對結果的影響越顯著。由兩兩因素交互作用的p值均>0.01可知,交互作用對總黃酮得率的影響不顯著。所以舍去不顯著項得到優化模型方程

Y=7.17-0.20A+0.078B+0.24C+0.18D-0.85A2-0.17C2-0.61D2

2.5.2 最佳工藝確定 通過回歸模型預測的豆腐柴中總黃酮提取的最優工藝條件為:乙醇濃度84%、料液比1∶37(g/mL)、提取溫度81 ℃、提取時間3.4 h。在此條件下進行三次提取,實際測得總黃酮平均得率為7.33%,RSD%為0.55%,與理論值7.29%相差不大,說明響應面優化得到的提取工藝條件可靠。

2.6 大孔吸附樹脂對豆腐柴葉總黃酮的吸附效果

大孔吸附樹脂因價格便宜且易再生,現已廣泛應用于天然活性產物的分離[16-17]。由表4可知,從吸附率、解吸率及回收率考慮,X-5型大孔吸附樹脂較為理想。這與大孔樹脂的極性、平均孔徑和比表面積有關系。部分黃酮具有酚羥基和糖苷鏈,具有一定極性和親水性,生成氫鍵能力較強,有利于極性和弱極性樹脂吸附。而X-5型大孔樹脂吸附率較大主要是因為其比表面積大,增大了與黃酮的接觸面積。綜合考慮,選擇用X-5型大孔樹脂吸附。豆腐柴總黃酮經過醇沉和X-5大孔吸附樹脂分離后,以蘆丁為標準品,檢測其黃酮純度達到了85.34%。

表3 方差分析表

表4 不同類型樹脂對總黃酮靜態吸附和解吸結果

2.7 豆腐柴葉總黃酮的初步鑒定

2.7.1 紫外-可見光譜掃描曲線 紫外-可見光掃描結果如圖6所示,豆腐柴總黃酮在300～400 nm之間和220～280 nm之間有吸收峰、肩峰,說明它們可能為異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類。

圖6 豆腐柴葉總黃酮的紫外-可見掃描光譜曲線Fig.6 UV-visible spectrum of total flavonids from Premna microphylla Turcz leaves

2.7.2 顯色反應 總黃酮可能含有黃酮、黃酮醇、查耳酮、二氫黃酮或二氫黃酮醇等。黃酮類化合物分子中酚羥基和γ-吡喃環的差異與不同化學試劑反應后呈現不同的顏色,根據現象可以判斷黃酮類化合物的種類[12]。表5綜合顯示豆腐柴葉總黃酮主要為二氫黃酮。

表5 豆腐柴葉總黃酮的顯色反應

2.8 總黃酮DPPH自由基和羥自由基清除活性

圖7 總黃酮對DPPH自由基的清除活性Fig.7 Scavenging rates of total flavonoids on DPPH free radicals

DPPH自由基為萬能自由基,而羥基自由基為生物體最毒的自由基,兩者廣泛應用于抗氧化劑的抗氧化活性篩選[18-19]。如圖7和圖8所示,豆腐柴葉總黃酮、VC和BHA對DPPH自由基和羥自由基的清除率均隨質量濃度的升高而逐漸增大,半數抑制濃度分別為0.10 mg/mL和0.13 mg/mL。對于DPPH自由基,當濃度小于0.2 mg/mL時,總黃酮純化液對DPPH自由基的清除率與BHA差距較大;當濃度等于0.2 mg/mL時,其清除率為83.75%與同濃度的BHA溶的清除率85.99%相近,但與同濃度VC的清除率92.01%差距較大;當濃度大于0.2 mg/mL后,其清除率基本保持穩定,不再增長,其清除率近與BHA。總黃酮粗提液對DPPH自由基的清除率在濃度為0.2 mg/mL附近時達到穩定,此時清除率為91.43%,接近VC的清除率,優于BHA的清除率,同時也優于黃酮純化液。對于羥自由基,在濃度低于0.1 mg/mL時,總黃酮純化液及粗提液對羥基自由基的清除率要優于VC。當濃度達到0.4 mg/mL時,總黃酮純化液及粗提液對羥基自由基的清除率趨于穩定。此時總黃酮純化液對羥基自由基的清除率為80.08%,與BHA對羥基自由基的清除率相當,但清除效果遠低于VC;總黃酮粗提液對羥基自由基的清除率為98.01%,與VC的98.38%相近,遠優于清除效果BHA。這可能是粗提液中含有其它類型黃酮類化物或者一些抗氧化活性較強的色素類成分。

圖8 不同抗氧化劑對羥自由基的清除活性Fig.8 Scavenging rates of total flavonoids on hydroxyl free radicals

3 結論

四川綿陽江油地區豆腐柴黃酮類化合物豐富。Box-Behnken實驗設計優化乙醇浸提總黃酮工藝,并采用及響應面分析得到適合于總黃酮提取的模型方程。最佳提取工藝為乙醇濃度84%、料液比1∶37(g/mL)、提取溫度81 ℃、提取時間3.4 h,此條件下總黃酮得率為7.29%。X-5型大孔吸附樹脂適合純化豆腐柴葉總黃酮。顯色反應和紫外光譜分析初步鑒定該黃酮主要為二氫黃酮。總黃酮粗提物和純化物均具有較好的抗氧化活性,但粗提物效果更好,可能是因為在純化過程中部分其它結構黃酮丟失,或者有其他非黃酮類成分具有較強的抗氧化活性分析,有待進一步精細分離和構效關系研究。

[1]寧海鳳,童群義.混合酸提取豆腐柴葉中果膠的研究[J].食品工業科技,2011,32(1):222-228.

[2]楚文靖,王世強,謝可為.豆腐柴的開發及利用現狀[J].食品研究與開發,2011,32(7):175-177.

[3]Santos BL,Oliveira MN,Coelho PLC,et al. Flavonoids suppress human glioblastoma cell growth by inhibiting cell metabolism,migration,and by regulating extracellular matrix proteins and metalloproteinases expression Original[J]. Chemico-Biological Interactions,2015,242(5):123-138.

[4]曹穩根,焦慶才.豆腐柴根提取物抗炎作用的實驗研究[J].中國中醫藥科技,2002,9(4):223-224.

[5]Li JE,Fan ST,Qiu ZH,et al. Total flavonoids content,antioxidant and antimicrobial activities of extracts from Mosla chinensis Maxim. cv. Jiangxiangru[J]. LWT-Food Science and Technology,2015,64(2):1022-1024.

[6]羅文謙,王琳,魯緒會,等.野生豆腐柴總黃酮及微量元素測定[J].安徽農業科學,2009,37(14):6429-6430.

[7]曹穩根,段紅,翟科峰,等.正交設計優選豆腐柴葉總黃酮的微波提取工藝[J].光譜實驗室,2013,30(5):2174-2178.

[8]林穎華,吳曉玲,彭榮珍,等.響應面法優化豆腐柴中總黃酮提取工藝[J].中國醫藥報,2013,10(18):116-118.

[9]王軍,王敏,季璐.苦蕎麥麩皮總黃酮提取工藝及其數學模型研究[J].農業工程學報,2006,22(7):223-225.

[10]Zhao P,Qi C,WangG,et al. Enrichment and purification of total flavonoids from Cortex Juglandis Mandshuricae extracts and their suppressive effect on carbon tetrachloride-induced hepatic injury in Mice[J]. Journal of Chromatography B,2015,1007(15):8-17.

[11]王俊,趙輝,吳福安,等.樹脂吸附法分離純化桑葉總黃酮-(I)H103樹脂對桑葉水提取液中總黃酮的吸附性能[J].離子吸附與交換,2008,24(2):139-147.

[12]徐懷德.天然產物提取工藝學[M].北京:中國輕工業出版社,2006:346-348.

[13]Jabbari M,Jabbari A. Antioxidant potential and DPPH radical scavenging kinetics of water-insoluble flavonoid naringenin in aqueous solution of micelles[J]. Colloids and Surfaces A:Physicochemical and Engineering Aspects,2016,489(20):392-399.

[14]Herraiz T,Galisteo J. Hydroxyl radical reactions and the radical scavenging activity ofβ-carboline alkaloids[J].Food Chemistry,2015,172(1):640-649.

[15]孫協軍,李秀霞,馮彥博,等.華山楂黃酮超高壓提取工藝研究[J].食品工業科技,2015,36(2):291-295.

[16]Zhao ZY,Dong LL,Wu YL,et al. Preliminary separation and purification of rutin and quercetin from Euonymus alatus(Thunb.)Siebold extracts by macroporous resins[J]. Food and Bioproducts Processing,2011,89(4):266-272.

[17]Guo HD,Zhang QF,Chen JG,et al. Large scale purification of puerarin from Puerariae Lobatae Radix through resins adsorption and acid hydrolysis[J]. Journal of Chromatography B,2015,980(1):8-15.

[18]Pavithra K,Vadivukkarasi S. Evaluation of free radical scavenging activity of various extracts of leaves from Kedrostis foetidissima(Jacq.)Cogn[J]. Food Science and Human Wellness,2015,4(1):42-46.

[19]趙謀明,劉敏,林戀竹,等.山苦茶多糖結構表征及抗氧化活性研究[J].現代食品科技,2015,31(7):61-66.

Extraction,purification and antioxidant activity of total flavonoids fromPremnamicrophyllaTurcz leaves

HU Yu1,LI Xu-sheng1,MA Nan,ZHANG Xue-min1,MAO Yu-bo1,CHEN Li-ping1,XIONG Shuang-li1,2,*,XUE Chao-gui3

(1.School of Life Science and Engineering,Southwest University of Science and Technology,Mianyang 621010,China;2.Engineering Research Center for Biomass Resource Utilization and Modification of Sichuan Province,Mianyang 621010,China;3.Jiangyou Chunyu Ecological Agricultural Science and Technology Company,Jiangyou 621700,China)

On the basis of the single factor experiment,this article firstly adopted response surface methodology to optimize the extraction technology of total flavonoids frompremnamicrophyllaturcz leaves,then screened macroporous adsorptive resins which were suitable for extracting total flavonoids,at last made the preliminary identification and analyzed free radical scavenging activity of them. The results showed that the optimal conditions of the ethanol extraction were as follows:ethanol concentration for 84%,solid-liquid ratio for 1∶37(g/mL),temperature for 81 ℃ and time for 3.4 h. Under these conditions,we could get 7.29% of the total flavonoids. Meanwhile,the macroporous adsorptive resin X-5 was suitable for the separation of total flavonoids. The colour reaction and UV-vis spectrum exhibited that dihydroflavone was probably the major components. The DPPH radical and hydroxyl radical scavenging rate of the premna leaves flavonoids increased with the increasing of the concentration and the IC50values were 0.10 mg/mL and 0.13 mg/mL,respectively. When the concentrations were 0.2 mg/mL and 0.4 mg/mL. The DPPH radical and hydroxyl radical scavenging rate were 83.75% and 80.08%,respectively,which were close to that of tert-butyl hydroxy anisole. These data suggested that flavonoids frompremnamicrophyllaturcz leaves were developed as antioxidant or raw materials of health food.

PremnamicrophyllaTurcz;total flavonoids;extraction technology;antioxidant activity

2016-03-23

胡予(1995-),女,在讀本科,研究方向:食品生物化學,E-mail:643844210@qq.com。

*通訊作者:熊雙麗(1977-),女,教授,研究方向:功能性食品加工與安全,E-mail:372364129@qq.com。

四川省生物質資源利用與改性工程技術研究中心專職科研創新團隊建設基金項目(14tdgc04)。

TS

A

1002-0306(2016)20-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2016.20.000