腦康靈C膠囊質量標準研究*

孫婷婷 張 紅 黨秋萍 劉建峰

陜西省中醫藥研究院中藥研究所(西安 710003)

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腦康靈C膠囊質量標準研究*

孫婷婷 張 紅△黨秋萍 劉建峰

陜西省中醫藥研究院中藥研究所(西安 710003)

目的：建立腦康靈C膠囊的質量標準，為控制腦康靈C膠囊的質量提供依據。方法：采用薄層色譜法對該膠囊中的黃芪和山茱萸進行定性鑒別。采用HPLC-ELSD法對君藥黃芪中黃芪甲苷進行含量測定。色譜柱為DIKMA Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-水(32:68)；進樣體積10μl，檢測器為蒸發光散射檢測器，氣體流速：2.8 L/min；漂移管溫度：105℃。結果：定性鑒別中黃芪薄層鑒別斑點清晰，陰性樣品在相應的位置無斑點。含量測定中黃芪甲苷在1.0328～6.1968μg范圍內呈良好的線性關系，陰性無干擾，平均加樣回收率為100.44%，RSD為1.93%。結論：本實驗建立的方法操作簡單，靈敏度高，可作為腦康靈C膠囊的質量控制方法。

腦康靈C膠囊由黃芪、山茱萸、鹿角膠等中藥組成，該制劑是西安中醫腦病醫院臨床應用較好的醫院制劑，具有補腦益髓，健脾利水，促進腦細胞再生，增強腦組織活力的功效，臨床用于外部性腦積水，各型腦積水恢復期，腦發育不全，記憶力減退等屬脾腎陽虛證型者。黃芪為該制劑中君藥，現代藥理研究表明黃芪具有改善大腦退行性病變、提高記憶力以及改善全腦再灌注組織損傷等作用，黃芪甲苷既是黃芪中指標性成分又是活性成分[1]。在不改變腦康靈C原處方的基礎上將其改成膠囊劑，為更專屬、靈敏的控制該制劑的質量、保障臨床用藥的有效性，本研究中采用薄層色譜法對該制劑中黃芪和山茱萸進行薄層鑒別，用HPLC-ELSD法對黃芪中黃芪甲苷進行含量測定并對測定方法進行優化，并在此基礎上制定了質量標準，現將結果報道如下。

1 材 料

Waters 2695高效液相色譜儀(蒸發光散射檢測器)，GCK3308全自動空氣源(北京中惠普分析技術研究所)，Empower操作軟件，數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。黃芪甲苷標準品、馬錢苷對照品均購自中國食品藥品鑒定研究院(批號分別為：110781-200613，11640-200503)，甲醇、乙腈為色譜純(美國Fisher公司產)，水為重蒸水(美國MILLIPORE)，其它試劑為分析純。薄層色譜中所用硅膠板為普通硅膠G板(青島海洋化工有限公司)。本研究中所用腦康靈C膠囊由西安中醫腦病醫院藥劑科生產，60粒/瓶，生產批號為140901、140902、140903。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜定性鑒別 山茱萸定性鑒別[2]：精密稱取膠囊內容物2g，研細，加無水乙醇20ml，超聲提取15min，過濾，揮干溶劑，殘渣加無水乙醇2ml溶解，即為樣品溶液。按照處方比例稱取缺山茱萸藥材的陰性對照藥材，同法制得陰性樣品溶液[3]。取馬錢苷對照品適量，加無水乙醇制得濃度為1mg/ml的馬錢苷對照溶液。各樣品及對照品溶液分別點樣5μl，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50∶10∶1)為展開劑，噴以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰。樣品色譜條帶中，檢出馬錢苷，缺山茱萸陰性樣品無干擾。

黃芪定性鑒別[4]：精密稱取膠囊內容物5g，加甲醇30ml，超聲提取30min，過濾，揮干溶劑，加水使溶解，水溶液用水飽和的正丁醇提取2次各40ml，正丁醇液繼用濃氨試液洗滌2次各15ml，正丁醇液用水洗滌2次各40ml，合并正丁醇溶液，揮干溶劑，殘渣加1ml甲醇溶解，為樣品溶液。精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的黃芪甲苷對照品溶液。按處方比例稱取缺黃芪藥材的陰性對照藥材嚴格按照樣品制備方法制得陰性樣品溶液。點樣量各5μl，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃靜置下層溶液為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液于105 ℃顯色。樣品色譜條帶中檢出黃芪甲苷，缺黃芪陰性樣品未見干擾。

2.2 樣品中黃芪甲苷含量測定 色譜條件：色譜柱：DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相：乙腈-水(32:68)；ELSD條件(檢測器溫度：105℃；氣體流速：2.8 L/min)，進樣體積10μl。樣品溶液配制：對照品溶液配制 精密稱取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成含黃芪甲苷0.5164 mg/ml的對照品溶液。供試品溶液配制[5-6]：精密稱取同一批號樣品內容物適量，研細，精密稱取5份，每份約18g，精密稱定置索氏提取器，加甲醇120ml回流4h，提取液揮去溶劑，殘渣加水溶解，水溶液用水飽和的正丁醇提取3次各40ml，正丁醇液繼用氨試液洗滌2次各40ml，合并正丁醇液，揮干溶劑，殘渣加水溶解，水溶液通過D101型大孔吸附樹脂柱，先用水50ml洗脫，繼用40%乙醇50ml洗脫，最后用70%乙醇溶液50ml洗脫，揮干溶劑，殘渣加甲醇5ml溶解，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，精密吸取10μl，測定黃芪甲苷含量。每份樣品平行做3份。陰性對照樣品的配制：按照原處方稱取除黃芪以外的各藥材，嚴格按照本品制備工藝進行制備，按供試品項下方法進行操作，制得陰性樣品。系統適用性：對照品、供試品以及陰性樣品按照色譜條件進行測定，發現供試品中黃芪甲苷峰分離度好，陰性樣品沒有干擾，故確定流動相比例為乙腈-水(18∶82)。

線性范圍考察：精密吸取0.5164 mg/ml黃芪甲苷對照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl進行測定，以峰面積自然對數為縱坐標(Y)，進樣量自然對數為橫坐標(X)，得回歸方程 y=1.8519x-5.2004，r =0.9997，黃芪甲苷在1.0328～6.1968μg范圍內，峰面積值與進樣量呈良好的線性關系。精密度：精密吸取黃芪甲苷對照溶液10μl，連續進樣5次測定，計算得RSD為2.0%。穩定性：取樣品內容物適量，研細，按供試品項下制得樣品溶液，放置0、2、4、6、8、10、12h進行測定并計算含量，測得RSD為0.2%。結果表明本樣品溶液在12h內穩定。重復性：取樣品批號(140901)內容物適量，研細，精密稱取5份，每份約18g，精密稱定，制得供試品，依次測定，計算黃芪甲苷均值為0.1289 mg/g，RSD1.48%，該方法重現性良好。

加樣回收率：精密稱取已知含量(0.1289 mg/g)的樣品共6份，置三角瓶中，分別精密加入黃芪甲苷對照品(0.5164 g/ml) 2.2、2.2、1.76、1.76、2.64、2.64 ml，按供試品制備方法制成加樣回收供試品溶液，進行測定，結果見下表。試驗結果表明，平均回收率為100.44%，結果顯示RSD為1.93%，黃芪甲苷回收率在95%～105%之間，表明加樣回收率良好。

樣品測定：精密稱取批號為140901、140902、140903腦康靈C膠囊樣品適量，按供試品項下方法制備供試品溶液，測定，結果見下表。

表1 黃芪甲苷回收試驗結果(n=6)

表2 樣品的含量測定結果

3 討 論

腦康靈C膠囊是西安中醫腦病醫院根據中醫辨證論治的理論和實踐總結出的中藥復方制劑。由于本制劑中藥物多、成分復雜，質量控制指標的選擇一直是該制劑質量標準研究中的難點，使其臨床應用受到一定的限制，為此需要對其質量標準進行系統深入的研究[7]。本研究參考相應的文獻對該方中黃芪、熟地、山茱萸、牡丹皮、鹿角膠依次進行了定性鑒別，結果顯示只有黃芪和山茱萸的主斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾。含量測定色譜結果顯示黃芪甲苷能與其他成分良好的分離且保留時間適合，陰性對照無干擾，能夠準確的反映出產品的內在質量[9]。本研究建立的薄層色譜方法以及含量測定方法結果穩定可靠、專屬性強、方法簡單可行，可作為腦康靈C膠囊的質量控制。

[1] 劉 爽.黃芪藥理作用的研究進展[J].北方藥學，2015，12(12)：95-96.

[2] 王桂紅，周松迪，張 駿，等.苗山消渴康復顆粒質量標準研究[J].中藥材，2012,35(3)：482-483.

[3] 李 爽，賈 媛，范 玲，等.芪葵顆粒定性定量方法研究[J].藥物分析雜志，2012,32(9)：1564-1565.

[4] 趙 勇，王 艷，龍海燕，等.阿歸養血顆粒質量標準研究[J].中國藥業，2014,23(18)：43-44.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京: 中國醫藥科技出版社,2015: 302.

[6] 吳高芬.高效液相色譜-蒸發光散射器法測定芪芳氣血顆粒中黃芪甲苷含量[J].中國藥業，2015,24(12)：60-61.

[7] 林玉紅，楊娟英，謝 偉，等.益心解毒顆粒質量標準研究[J].陜西中醫，2011，32(9):1235-1236.

(收稿2016-09-20；修回2016-10-17)

*陜西省科技廳科技攻關項目(201219-03-06)

△通訊作者

色譜法 @腦康靈 C膠囊

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.12.051