復方中藥對腹水綜合征肉雞肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量的作用

韓燁晨，張 娟，王俊武，員世宇，吳海萍，溫 爽，趙冬冬，王 卓，蘇曉菲，朱昱波，程 佳，孫耀貴，王文魁，李宏全，段智變*

(1.山西農業大學動物科技學院，太谷 030801；2.山西省畜牧獸醫學校，太原 030024；3.河南科技學院動物科技學院，新鄉 453003)

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復方中藥對腹水綜合征肉雞肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量的作用

韓燁晨1，張 娟1，王俊武1，員世宇1，吳海萍1，溫 爽1，趙冬冬1，王 卓1，蘇曉菲2，朱昱波3，程 佳1，孫耀貴1，王文魁1，李宏全1，段智變1*

(1.山西農業大學動物科技學院，太谷 030801；2.山西省畜牧獸醫學校，太原 030024；3.河南科技學院動物科技學院，新鄉 453003)

本試驗旨在研究腹水綜合征(AS)肉雞肝組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、I型膠原和III型膠原蛋白變化及復方中藥的防治作用。將309羽7日齡羅斯肉雞隨機分為6組，空白組正常飼養，其余5組飼養環境為9～11 ℃、高能飼料和高鈉飲水，模型組不給予任何藥物，中藥組(高、中、低劑量組)分別給予2、1、0.5 g·(kg·d)-1復方中藥，L-Arg組飼料中添加1% L-Arg。結果表明：15、25、35和45日齡，與空白組相比，模型組AS發病率、腹水心臟指數、心臟指數、肺臟指數、肝臟指數、肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量顯著增加(P<0.01或P<0.05)，脾臟指數顯著降低(P<0.01或P<0.05)；與模型組相比，各劑量中藥組和L-Arg組均能改善上述指標(P<0.01或P<0.05)。肉雞腹水綜合征肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量顯著上升，參與AS病理發生發展；氣血雙補、行氣利水的復方中藥能有效防治AS，其機制與復方中藥能顯著降低AS肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量相關。

復方中藥；肉雞腹水綜合征；α-SMA；I型膠原蛋白；III型膠原蛋白

腹水綜合征(ascites syndrome，AS)是主要發生于28～49日齡肉雞的一種營養代謝病，病因涉及遺傳、缺氧、低溫、營養和疾病等方面，臨床表現為腹水、右心肥大、肝和肺充血腫大，世界AS發病率約為25%[1]。

AS肉雞肝的變化是AS三大評判標準之一[2]，剖檢可見肝充血腫大，有血漿凝塊附著。臨床表現和病理剖檢均提示AS中存在肝機能障礙，且有學者認為AS中的腹水產生可能與肝損傷有關，其根本原因為缺氧[3]。哺乳動物及人類醫學研究表明[4]，缺氧可直接損傷肝功能，引發肝纖維化，繼而形成腹水。因此，肝或許在AS發生發展中有重要作用。

α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin， α-SMA)是肝星狀細胞活化的特異性標志物，肝星狀細胞活化是肝纖維化的中心環節[5]，因此α-SMA水平的變化與肝纖維化水平正相關。I型膠原的大量合成是肝纖維化和肝硬化發生發展的中心環節，是細胞外基質的主要成分[6]。III型膠原則在肝星狀細胞活化較早期合成較多[7]。因此，α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量與肝纖維化水平密切相關。

中藥是具有整體調節機體各項功能特點的純天然產物，在畜禽各類疾病中具有獨特的治療優勢和研究意義。本課題組前期結果表明[8]，復方中藥能通過影響NO、ET-1有效防治AS，本試驗通過測定不同日齡AS肉雞肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量，并以當歸、黃芪、丹參、茯苓等自擬復方中藥進行治療觀察，為AS及其中藥防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物分組

1日齡羅斯肉雞309羽(雌雄不限)及三段式飼養飼料(購自山西省文水縣大象禽業有限公司)。常規育雛至7日齡，健康雞隨機分為6組：空白組、模型組、L-Arg組和中藥組(分為高、中、低劑量組)，自由飲水采食。參考文獻方法[8-10]，對模型組、L-Arg組和中藥組采用低溫(9～11 ℃)、高能飼料(添加3%豬油、4%魚粉)、高鈉(飲水總Na+為0.12%)多因素法誘發肉雞腹水綜合征試驗模型，L-Arg組在飼料中額外添加1% L-精氨酸，中藥組(高、中、低劑量組)在飲水中分別添加2、1、0.5 g·(kg·d)-1劑量復方中藥。

于15、25、35和45日齡隨機取10羽雞，稱重，處死后迅速剖取心、肺、肝和脾，測定臟器指數和腹水心臟指數，取部分肝組織樣品測定α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量。取35日齡肉雞肝組織部分樣品制作病理切片。

1.2 制備復方中藥藥劑

參考前期試驗，選擇能影響肉雞NO和ET-1的復方中藥[8]，將當歸、黃芪、丹參、茯苓以2∶3∶2∶2比例依次配比組方(藥材購自山西省太谷縣藥材公司)，清水浸泡30 min后熬制40 min，收集藥液，重復3次，合并藥液過濾，減壓蒸餾濃縮至1 g·mL-1湯劑，-20 ℃保存備用，飼喂前溫化處理。

1.3 檢測指標

1.3.1 常規指標 通過觀察肉雞臨床癥狀(腹部膨大有波動感)、剖檢結果(肝充血腫大，有血漿凝塊附著)和腹水量(大于20 mL)[9]判定AS發病。

腹水心臟指數(Ascites heart index, AHI)：右心室重與全心室重的比值(RV/TV)。取心臟，沿冠狀溝剪去兩心房，清除多余組織，稱取全心室重量(TV)，沿前后縱溝剪下右心室(RV)，稱重，計算AHI[5]。正常肉雞AHI小于0.219，AS肉雞 AHI大于0.250[11]。

臟器指數：臟器/體重。稱量剖取的心、肺、肝和脾，計算臟器指數。

1.3.2 肝組織病理學觀察 取35日齡肉雞左側肝葉中間部分肝組織，10% 中性甲醛固定，石蠟包埋，常規切片5 μm，Masson染色觀察肝組織膠原。

1.3.3 肝組織α-SMA、I型膠原蛋白和III型膠原蛋白含量測定 取肝組織(0.1～0.2 g)，于冰冷生理鹽水中洗凈，拭干，稱重，按質量(g)∶體積(mL)=1∶9加入0.9 %生理鹽水，在冰水浴環境下用勻漿機制備肝組織勻漿，3 000 r·min-1離心15 min，取上清液，按試劑盒說明測定肉雞肝組織α-SMA、I型膠原和III型膠原蛋白含量。

1.3.4 主要化學試劑及儀器設備 雞α-SMA蛋白ELISA試劑盒(上海藍基生物科技有限公司)，雞I型膠原蛋白ELISA試劑盒(上海藍基生物科技有限公司)，雞III型膠原蛋白ELISA試劑盒(上海藍基生物科技有限公司)，高速冷凍離心機(D-375型，德國Sigma公司)，石蠟切片機(上海躍進醫療器械)，倒置熒光顯微鏡(IX81-F72FL/PH，日本Olympus公司)。

1.4 數據處理與分析

2 結 果

2.1 發病率、體重、AHI及臟器指數

結果表明，模型組肉雞發育遲緩，個頭較小，被毛粗亂，食欲較差，腹部膨大著地，試驗后期模型組肉雞腹部皮膚青紫發紺，脹滿下垂，站立困難，呼吸急促，腹部觸診有明顯波動感，可抽出30～200 mL的稻草黃色液體。剖檢可見心室肥大，心包積液；肝淤血腫大，偶見斑駁的黃色病變；肺充血水腫等癥狀。各中藥組和L-Arg組肉雞臨床癥狀明顯改善。表1結果表明，根據試驗方法中的肉雞臨床癥狀、剖檢結果和腹水量作為標準判定AS發病，模型組肉雞腹水綜合征累計發病率顯著高于空白組(P<0.01)，高、中劑量中藥組和L-Arg組發病率顯著低于模型組(P<0.01)。

表1 肉雞腹水綜合征發病率

Table 1 Incidence of broilers with AS

項目Item空白組GroupNone模型組GroupControlL-Arg組GroupL-Arg高劑量中藥組HighTCMgroup中劑量中藥組MiddleTCMgroup低劑量中藥組LowTCMgroup發病率/%Incidence(%)3.9(2/51)30.2A(16/53)9.8B(5/51)5.9B(3/51)11.8b(6/51)19.2(10/52)

括號內為該組發病個體數和試驗總數。與空白組對比，a.P<0.05，A.P<0.01；與模型組對比，b.P<0.05，B.P<0.01。下同

The number in bracket is individuals with AS and the total number in the corresponding group. compared with group None, a.P<0.05, A.P<0.01; compared with group Control, b.P<0.05, B.P<0.01. The same as below

表2結果表明，各日齡模型組肉雞體重均極顯著低于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和中劑量中藥組15、25、35日齡以及15日齡低劑量中藥組體重顯著高于模型組(P<0.01，P<0.05)；15、25、35日齡L-Arg 組體重顯著高于模型組(P<0.01或P<0.05)。

各日齡模型組AHI均極顯著高于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和各日齡中劑量中藥以及15日齡低劑量中藥組AHI顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；各日齡L-Arg組AHI極顯著低于模型組(P<0.01)。

各日齡模型組心臟指數均極顯著高于空白組(P<0.01)；15、25、45日齡高劑量中藥組和15、25、45日齡中劑量中藥組心臟指數顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、25、45日齡L-Arg組心臟指數極顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)。

各日齡模型組肺臟指數顯著高于空白組(P<0.01或P<0.05)；各日齡高劑量中藥組和25、35、45日齡中劑量中藥組以及45日齡低劑量中藥組肺臟指數顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、45日齡L-Arg組肺臟指數顯著低于模型組(P<0.05)。

各日齡模型組肝臟指數顯著高于空白組(P<0.01或P<0.05)；各日齡高劑量中藥組肝臟指數顯著低于模型組(P<0.05)；15、45日齡L-Arg組肝臟指數顯著低于模型組(P<0.05)。

25、35、45日齡模型組脾臟指數顯著低于空白組(P<0.01或P<0.05)；35、45日齡高劑量中藥組脾臟指數顯著高于模型組(P<0.05)；35日齡L-Arg組脾臟指數顯著高于模型組(P<0.05)。

項目Item日齡Day空白組GroupNone模型組GroupControlL-Arg組GroupL-Arg高劑量中藥組HighTCMgroup中劑量中藥組MiddleTCMgroup低劑量中藥組LowTCMgroup體重/gBodyweight15482.0±18.4360.3±15.4A427.7±9.3B451.7±10.4B417±15.9B395±23.8b251014.0±39.6941.7±31.1A1047.3±36.6B1049.7±33.1B1002.7±30.3b947.7±27.8351803.0±131.01429.8±140.3A1650.7±33.2b1821.3±136.2B1618.3±102.3b1546.7±44.8452901.7±553.92280.8±120.9A2621.0±155.42886.3±11.2B2639.3±275.02416.2±91.9AHI150.1799±0.01280.2722±0.0116A0.2070±0.0214B0.2045±0.0177B0.2132±0.0144B0.2454±0.0183b250.1976±0.00740.2733±0.0137A0.2239±0.0070B0.2188±0.0185B0.2455±0.0072B0.2615±0.0075350.2205±0.01560.3376±0.0072A0.2662±0.0211B0.2571±0.0113B0.2959±0.0098B0.3208±0.0172450.2708±0.00890.3829±0.0203A0.3152±0.0116B0.3049±0.0126B0.3387±0.0096B0.3727±0.0124心臟指數/‰Heartindex156.138±0.1106.982±0.090A6.332±0.185B6.367±0.301B6.382±0.271b6.597±0.329254.492±0.3335.639±0.226A4.774±0.297B4.608±0.350B4.883±0.111b5.296±0.414353.850±0.2694.643±0.266A4.307±0.1374.402±0.0864.427±0.5194.574±0.130454.089±0.0585.150±0.316A4.681±0.281b4.416±0.154B4.697±0.159b4.940±0.211肺臟指數/‰Lungindex155.084±1.1806.825±0.604a5.428±0.248b5.127±0.615b5.696±0.6276.135±1.117254.385±0.6805.846±0.213A4.904±0.4134.346±0.392B4.565±0.648b5.112±0.756354.642±1.1015.795±0.624a4.987±0.3024.578±0.274B4.801±0.286b5.222±0.309454.974±0.3775.994±0.272A5.160±0.516b5.011±0.438B5.078±0.334B5.267±0.403b肝臟指數/%Liverindex152.739±0.1013.688±0.331A2.966±0.114b3.004±0.196b3.102±0.4773.202±0.266252.252±0.1642.710±0.282a2.302±0.1062.250±0.227b2.329±0.3442.614±0.253352.161±0.1842.554±0.179a2.170±0.1192.147±0.147b2.213±0.3582.370±0.166452.241±0.1822.503±0.066a2.272±0.192b2.242±0.201b2.296±0.2032.328±0.046脾臟指數/‰Spleenindex151.198±0.3900.712±0.1170.904±0.0471.065±0.5870.840±0.1330.732±0.150251.188±0.1530.808±0.101a1.003±0.2401.035±0.1990.963±0.1670.874±0.078351.538±0.2210.889±0.238A1.424±0.294b1.434±0.232b1.213±0.1911.085±0.245451.563±0.3350.874±0.140A1.181±0.2531.265±0.368b1.185±0.2341.002±0.140

2.2 35日齡肉雞肝組織病理學變化

圖1結果表明，35日齡空白組肝結構清晰，肝細胞排列整齊，間隙中偶見少量纖維組織沉積；模型組肝結構紊亂，肝細胞界限不清晰，間隙內有大量纖維組織沉積；高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組和L-Arg組均對肝臟間隙內纖維組織的沉積有不同程度的改善作用。

2.3 肝組織α-SMA蛋白含量

圖2顯示，各日齡模型組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量均極顯著高于空白組(P<0.01)；各日齡高劑量中藥組和15、35、45日齡中劑量中藥組以及15、45日齡低劑量中藥組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、35、45日齡L-Arg組肉雞肝組織α-SMA蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)。

2.4 肝組織I型膠原蛋白含量

圖3顯示，15、25、35日齡模型組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量極顯著高于空白組(P<0.01)；15、25、35日齡高劑量中藥組和15、25、35日齡中劑量中藥組以及15、25日齡低劑量中藥組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；15、25、35日齡L-Arg組肉雞肝組織I型膠原蛋白含量極顯著低于模型組(P<0.01)。

A.空白組；B.模型組 ；C. L-Arg組：D.高劑量中藥組； E.中劑量中藥組；F.低劑量中藥組A. Group None; B. Group Control; C. Group L-Arg; D. High dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group; E. Middle dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group; F. Low dosage of compound recipe of the traditional Chinese medicine group圖1 35日齡肉雞肝組織切片(Masson染色， 400×)Fig.1 Liver microscopic images of broilers at 35 days of age (Masson-trichrome, 400×)

圖2 肉雞肝組織α-SMA蛋白含量Fig.2 The level of α-SMA protein in liver of broilers

圖3 肉雞肝組織I型蛋白含量Fig.3 The level of collagen type I protein in liver of broilers

2.5 肝組織III型蛋白含量

圖4顯示，各日齡模型組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著高于空白組(P<0.01，P<0.05)；各日齡高劑量中藥組和各日齡中劑量中藥組以及25、35、45日齡低劑量中藥組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；各日齡L-Arg組肉雞肝組織III型蛋白含量顯著低于模型組(P<0.05或P<0.01)。

圖4 肉雞肝組織III型蛋白含量Fig.4 The level of collagen type III protein in liver of broilers

3 討 論

肉雞腹水綜合征是一種常見的營養代謝病，肝是機體重要的代謝和解毒器官，在疾病的發生發展中有重要作用。本試驗剖檢結果顯示，病雞腹腔內有大量稻草黃色膠狀液體，肝門靜脈充血，肝充血腫大呈暗紅色，邊緣鈍圓，被膜緊張，表面有淡黃色血漿纖維蛋白凝塊附著，或呈斑駁黃色，表面不平，有膠狀凝塊附著。AS肉雞心臟指數、肝臟指數和肺臟指數顯著增加表明臟器發生增生、充血和腫大，脾臟指數顯著減小表明脾萎縮，免疫功能減退。

目前，對AS的研究主要集中在肺動脈高壓、心功能等方面，而對肝的相關研究較少[1]。肝纖維化[12]是指肝細胞損傷、炎癥等病因導致的慢性肝損傷，肝纖維結締組織病理性增生的過程，待發展到假小葉形成時則稱為肝硬化。哺乳動物及人類醫學研究表明，正常肝內含有少量細胞外基質，正常Disse間隙由基底膜樣基質構成，主要為IV和VI型膠原蛋白，使肝竇內維持相對穩定的微循環。當肝受到炎癥等刺激或損傷時，如脂肪性、非酒精性脂肪性肝炎[13]、病毒性肝炎[14]、酒精性肝纖維化[15]等疾病，肝星狀細胞被缺氧、炎癥因子等各種刺激激活，變成具有增生性、移動性、收縮性和纖維原性的肌成纖維細胞，合成分泌α-SMA，因此α-SMA被認為是肝星狀細胞活化的標志[16]。當連續的基底膜形成，內皮窗孔消失，肝Disse間隙中富含IV和VI型膠原的低密度基底膜膠原轉化為富含纖維形成膠原的高密度間質膠原，即I和III型膠原[17]。待發展到肝纖維化時，I和III型膠原蛋白含量可達細胞外基質的80%～95%[18]，此時肝小葉正常結構喪失，促使炎癥介質和活性氧產生，誘導肝細胞變性壞死[19]，肝竇內皮細胞微孔減少，竇內血流減少，肝竇內壓力和肝內血管阻力增加，血液動力學改變，門靜脈系統血流增加，是形成門靜脈系統高壓的直接原因[20]，是腹水形成的主要原因之一。正常的肝纖維化病程較長，但在肉雞生長發育過程中，由于遺傳育種學對肉雞增重性能的選擇，而沒有相應改善其心肺功能，使肉雞能自發形成肺動脈高壓，導致組織缺氧[21]，同時肉雞飼養過程中使用含有大量蛋白質的飼料，提高機體代謝率，增加耗氧量，因此肝纖維化病程發展迅速。

中獸醫學認為，AS癥候主要由氣血雙虛、氣滯血瘀、水濕停聚所致，因此治療AS宜活血行氣、化濕逐瘀、疏肝理氣，與中醫理論分析肝纖維化為正氣不足、肝血瘀阻、濕熱耗陰所致相似。本試驗過程中，AS肉雞心、肝和肺充血腫大，脾萎縮，且肝呈肝纖維化癥狀，腹腔有大量稻草黃色腹水，病理組織學顯示肝細胞間隙中有大量膠原蛋白沉積，肝正常生理結構被破壞。

人類醫學臨床常用補虛藥和活血化瘀等藥防治肝纖維化，如丹參、黃芪、柴胡、白術等[22]。動物醫學常用腹水消[23]、苓桂術甘湯[24]等中藥防治AS發生。本試驗中，AS肉雞肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量顯著升高，表明AS肉雞肝損傷，刺激肝組織大量合成α-SMA、I型和III型膠原蛋白，促進腹水形成，參與AS發生發展，當歸、黃芪、丹參、茯苓等組成的復方中藥和L-Arg能有效減少肝組織α-SMA、I型和III型膠原蛋白含量，維持肝正常生理結構，保護肝功能，有效防治AS。有研究表明，當歸屬于重要的活血化瘀中藥，能在肝纖維化早、中期顯著減輕肝纖維化程度，降低肝內膠原含量[25]；黃芪具有補中益氣等功效，是主要的扶正藥物之一，能明顯降低受損肝總膠原、I型、III型和V型膠原的含量[26]；丹參有活血祛瘀的功效，丹參酸乙是其主要成分之一，能顯著提高肝細胞非膠原蛋白生成量，降低膠原蛋白生成率和生成量[27]；茯苓健脾利水，能增加肝硬化中膠原纖維的降解，降低膠原纖維含量[28]。L-Arg能通過產生外源性一氧化氮(nitric oxide，NO)發揮生理作用，而NO能調節肝星狀細胞和內皮細胞，阻止肝星狀細胞收縮，松弛已收縮的細胞并減少α-SMA表達[29]，同時通過調節肝血流，降低組織細胞氧化損傷，保護肝功能[30]。這些中藥的藥理作用是本試驗所用復方防治AS的藥理基礎，但中藥及復方中藥對機體組織細胞的藥理作用是通過多種活性物質單一或協同作用于多種受體，多重作用于一條或數條信號通路產生，因此能整體調節機體各項功能，提高免疫力。

本試驗表明，肝α-SMA、I型膠原和III型膠原參與了AS的發生發展，復方中藥能通過影響肝α-SMA、I型和III型膠原蛋白防治AS，但是其具體機制尚待進一步研究。

[1] HASSANZADEH M. Endogenous and environmental factors interactions that contribute to the development of ascites in broiler chickens: a review[J].IntJVetRes, 2010, 4(2): 117-126.

[2] ZHANG J, FENG X, ZHAO L, et al. Expression of hypoxia-inducible factor 1α mRNA in hearts and lungs of broiler chickens with ascites syndrome induced by excess salt in drinking water[J].PoultSci, 2013, 92(8):2044-2052.

[3] BALOG J M. Ascites syndrome (pulmonary hypertension syndrome) in broiler chickens: Are we seeing the light at the end of the tunnel?[J].AvainPoultBiolRev, 2003, 14(3):99-126.

[4] WATANABE N, TAKASHIMIZU S, NISHIZAKI Y, et al. An endothelin A receptor antagonist induces dilatation of sinusoidal endothelial fenestrae: implications for endothelin-1 in hepatic microcirculation[J].JGastroenterol, 2007, 42(9):775-782.

[5] OLSEN A L, BLOOMER S A, CHAN E P, et al. Hepatic stellate cells require a stiff environment for myofibroblastic differentiation[J].AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol, 2011, 301(1):G110-G118.

[6] 葉立紅, 王翀奎, 楊 莉,等. 軟肝化堅顆粒對肝纖維化模型C57小鼠肝組織α-SMA、TGFβ1表達和Ⅰ型膠原水平的影響[J]. 臨床肝膽病雜志, 2012, 28(9):685-688.

YE L H, WANG C K, YANG L, et al. Effects of Ruangan Huajian granule on hepatic expression of α-SMA, TGFβ1, and COL-Ⅰ in C57 mice with experimental hepatic fibrosis[J].JournalofClinicalHepatology, 2012, 28(9):685-688. (in Chinese)

[7] 李 萍, 胡國齡, 譚德明, 等. γ-干擾素對肝纖維化大鼠I、III型膠原表達的影響[J]. 中國臨床藥理學與治療學, 2005,10(2):137-140.

LI P, HU G L, TAN D M, et al. Effects of γ-interferon on expression of collagen Ⅰ,Ⅲ of fibrosis in rats[J].ChineseJournalofClinicalPharmacologyandTherapeutics, 2005,10(2):137-140. (in Chinese)

[8] 韓燁晨, 蘇曉菲, 王俊武, 等. 復方中藥對肉雞腹水綜合征肺組織NO、ET-1的作用及機制[J].畜牧獸醫學報, 2015, 46(6):1055-1062.

HAN Y C, SU X F, WANG J W, et al. The effect and mechanism of the compound recipe of the traditional chinese medicine on NO, ET-1 in lung of broiler with ascites syndrome[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica, 2015, 46(6):1055-1062. (in Chinese)

[9] LI K, ZHAO L H, GENG G R, et al. Increased calcium deposits and decreased Ca2+-ATPase in erythrocytes of ascites broiler chickens[J].ResVetSci, 2011, 90(3):468-473.

[10] JULIAN R J. The effect of increased sodium in the drinking water on right ventricular hypertrophy, right ventricular failure and ascites in broiler chickens[J].AvianPathol, 1987, 16(1):61-71.

[11] JULIAN R J, CASTON L J, MIRSALIMI S M, et al. Effect of poultry by-product meal on pulmonary hypertension, right ventricular failure and ascites in broiler chickens[J].CanVetJ, 1992, 33(6):382-385.

[12] ALCOLADO R, ARTHUR M J, IREDALE J P. Pathogenesis of liver fibrosis[J].ClinSci(Lond), 1997, 92(2):103-112.

[13] HANNAH W N Jr, HARRISON S A. Noninvasive imaging methods to determine severity of nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis[J].Hepatology, 2016, 102:162-174.

[14] ULVELING D, LE CLERC S, COBAT A, et al. A new 3p25 locus is associated with liver fibrosis progression in HIV/HCV coinfected patients[J/OL].Hepatology, 2016,64(5):1462-1472.[2016-09-21]. http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/hep.28695/pdf.

[15] BINQüL I, BAARAN-Kü?üKGERGIN C, AYDIN A F, et al. Betaine treatment decreased oxidative stress, inflammation, and stellate cell activation in rats with alcoholic liver fibrosis.[J].EnvironToxicolPhatmacol, 2016, 45:170-178.

[16] CLOUSTON A D, JONSSON J R, PURDIE D M, et al. Steatosis and chronic hepatitis C: analysis of fibrosis and stellate cell activation[J].JHepatol, 2001, 34(2): 314-320.

[17] HENDERSON N C, IREDALE J P. Liver fibrosis: cellular mechanisms of progression and resolution[J].ClinSci(Lond), 2007, 112(5):265-280.

[18] 陳勇良. TGF-β1、PDGF-BB、CTGF在慢性乙型肝炎和肝硬化患者肝組織中的表達水平變化及意義[D]. 石家莊：河北醫科大學, 2008.

CHEN Y L. The significance of TGF-β1, PDGF, CTGF with chronic hepatitis B in liver fibrosis[D]. Shijiazhuang：Hebei Medical University, 2008. (in Chinese)

[19] JAESCHKE H, GORES G J, CEDERBAUM A I, et al. Mechanisms of hepatotoxicity[J].ToxicolSci, 2002, 65(2):166-176.

[20] 丁惠國，汪俊韜，于中麟. 門脈高壓癥的細胞調節機制[J]. 中華肝臟病雜志, 1998，6(2):121-122.

DING H G, WANG J T, YU Z L. The mechanism of cells regulation in portal hypertension[J].ChineseJournalofHepatology, 1998,6(2):121-122. (in Chinese)

[21] LORENZONI A G, RUIZ-FERIA C A. Effects of vitamin E and L-arginine on cardiopulmonary function and ascites parameters in broiler chickens reared under subnormal temperatures[J].PoultSci, 2006, 85(12):2241-2250.

[22] 劉鳴昊, 薛博瑜. 近5年來肝纖維化中醫證治用藥規律的文獻研究[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2011, 17(18): 279-282.

LIU M H, XUE B Y. To explore Chinese medicine regularity on hepctic fibrosis in last five years[J].ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulae, 2011, 17(18): 279-282. (in Chinese)

[23] 喬 健, 李樹春, 李連海,等. 復方中藥哈特維(腹水消)對肉雞腹水綜合征的預防作用研究[J]. 中國農業大學學報, 1998, 3(3):113-116.

QIAO J, LI S C, LI L H, et al. Prophylaxis of ascites syndrome in broiler chicken by using chinese herbal medicine[J].JournalofChinaAgriculturalUniversity, 1998, 3(3):113-116. (in Chinese)

[24] 王文魁, 齊永華, 程 佳, 等. 苓桂術甘湯對肉雞腹水綜合征的防治作用[J]. 畜牧獸醫學報, 2005, 36(11):1215-1222.

WANG W K, QI Y H, CHENG J, et al. The preventive effect of LGZG Tang on ascites syndrome of broiler[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica, 2005, 36(11):1215-1222. (in Chinese)

[25] 黃自平, 艾 莉, 袁順玉, 等. 當歸對CCl4所致肝損傷大鼠的抗肝纖維化作用[J]. 中國病理生理雜志, 1996, 12(2):152-154.

HUANG Z P, AI L, YUAN S Y, et al. The effect of radix angelicae sinensis on hepatic fibrosis in rat with chronic CCl4-induced liver injury[J].ChineseJournalofPathophysiology, 1996, 12(2):152-154. (in Chinese)

[26] 馬 紅, 王寶恩, 陳翌陽, 等. 黃芪對免疫損傷性肝纖維化大鼠的治療作用[J]. 中西醫結合肝病雜志, 1997, 7(1):32-35.

MA H, WANG B E, CHEN Y Y, et al. The therapeutic effect of Astragalus membranaceus on liver fibrosis induced by immunologic injury in rats[J].ChineseJournalofIntegratedTraditionalandWesternMedicineonLiverDiseases, 1997, 7(1):32-35. (in Chinese)

[27] 劉 平, 劉乃明, 徐列明, 等. 丹參酸乙對大鼠肝細胞增殖及膠原生成的影響[J]. 中華肝臟病雜志, 1996, 4(4):235-236.

LIU P, LIU N M, XU L M, et al. The effects of Salianic-acid B on proliferation of hepatic cells and production of collagen in rats[J].ChineseJournalofHepatology, 1996, 4(4):235-236. (in Chinese)

[28] 尹 鐳, 趙元昌, 許瑞玲, 等. 茯苓對實驗性肝硬變的治療作用[J]. 山西醫學院學報, 1992, 23(2):101-103.

YIN L, ZHAO Y C, XU R L, et al. The therapeutic effet of tuchahoe on experimental liver cirrhosis[J].JournalofShanxiMedicalCollege, 1992, 23(2):101-103. (in Chinese)

[29] 米海燕. 肝硬化門脈高壓癥患者血漿ADM、ET-1濃度改變及臨床意義[D]. 蘇州：蘇州大學, 2011.

MI H Y. The changes and clinical role of plasma ADM and ET-1 in Cirrhosis patients with portal hypertension[D]. Suzhou： Soochow University, 2011. (in Chinese)

[30] 劉近春, 張新日, 韓德五, 等. NO在肝纖維化形成中對肝臟微循環的影響[J]. 中國微循環, 2004, 8(5):295-297.

LIU J C, ZHANG X R, HAN D W, et al. The effect of nitric oxide (NO) on hepatic microcirculation in the development of hepatic fibrosis[J].JournalofChineseMicrocirculation, 2004, 8(5):295-297. (in Chinese)

(編輯 白永平)

The Effect of the Compound Recipe of the Traditional Chinese Medicine on Collagen in Liver of Broilers with Ascites Syndrome

HAN Ye-chen1, ZHANG Juan1, WANG Jun-wu1, YUN Shi-yu1, WU Hai-ping1, WEN Shuang1,ZHAO Dong-dong1, WANG Zhuo1, SU Xiao-fei2, ZHU Yu-bo3, CHENG Jia1,SUN Yao-gui1, WANG Wen-kui1, LI Hong-quan1, DUAN Zhi-bian1*

(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu030801,China; 2.ShanxiHusbandryandVeterinarySchool,Taiyuan030024,China; 3.CollegeofAnimalScinece,HenanInstituteofScienceandTechnology,Xinxiang453003,China)

The objective of this study was to investigate the changes of α-smooth muscle actin (α-SMA), collagen type I and collagen type III in liver of broilers with ascites syndrome (AS) and the prevention and treatment of the compound recipe of the traditional Chinese medicine (TCM) on AS. A total of 309 7-day-old Ross broilers were randomly divided into six groups, group None was bred with normal diet, the rest were bred with high-energy diet derived from standard diet added with 3% lard and 4% fish meal and 0.12% Na+in drinking water at 9-11 ℃ to induce AS, group Control was given no medicine, compound recipe of the TCM groups (High, Middle, Low) were respectively given a dose of 2, 1, 0.5 mL·kg-1of the TCM in drinking water, and group L-Arg with 1% L-arginine in diet. The results showed that at 15, 25, 35 and 45 days of age, compared with group None, the incidence of AS, ascites heart index, heart index, lung index, liver index, the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers in group Control were increased significantly (P<0.01 orP<0.05), and spleen index in group Control was decreased significantly (P<0.01 orP<0.05). Compared with group Control, the items above were all improved in compound recipe of the traditional Chinese medicine groups and group L-Arg (P<0.01 orP<0.05). The study showed the increases of the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers participated in the pathogenesis of AS. The studied compound recipe of the traditional Chinese medicine with the role of tonifying qi-blood and activating qi to excrete water can prevent and treat AS of broilers effectively, and the mechanism was related to the decreases of compound recipe of the traditional Chinese medicine on the levels of α-SMA, collagen type I and collagen type III in liver of broilers with AS.

compound recipe of the traditional Chinese medicine; ascites syndrome; α-smooth muscle actin; collagen type I; collagen type III

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.11.020

2016-06-30

山西省科技攻關項目(20140311022-1)；山西農業大學橫向科技項目(2013HX28)

韓燁晨(1992-)，女，黑龍江省雙鴨山人，碩士生，主要從事中藥防治動物血管病變研究，E-mail：hanyechen1992@163.com

*通信作者：段智變，女，山西祁縣人，博士，教授，博士生導師，主要從事中獸醫藥對動物血管病變及脾胃病證研究，E-mail：duanzhibian2008@aliyun.com

S853.33

A

0366-6964(2016)11-2310-08