CEACAM-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

馬 賽， 安 峰*， 胥愛文， 王 芹， 劉 博， 張 利， 李立恒

(1河北北方學院附屬第一醫院口腔頜面外科, 張家口 075000; 2河北北方學院附屬第一醫院病理科； *通訊作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)

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CEACAM-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

馬 賽1， 安 峰1*， 胥愛文1， 王 芹1， 劉 博2， 張 利1， 李立恒1

(1河北北方學院附屬第一醫院口腔頜面外科, 張家口 075000;2河北北方學院附屬第一醫院病理科；*通訊作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)

目的 探討癌胚抗原相關細胞黏附分子-1(CEACAM-1)和VEGF在涎腺腺樣囊性癌(SACC)中的表達及其與腫瘤侵襲、轉移的相關性。 方法 采用免疫組織化學方法檢測CEACAM-1和VEGF在40例SACC和40例癌旁正常涎腺組織中的表達情況，分析二者的陽性表達與SACC 臨床病理因素的關系及其在SACC 病變中的相關性。 結果 SACC組中CEACAM-1蛋白陽性表達率為62.50%，明顯高于正常涎腺組織的12.50%；SACC組中VEGF蛋白陽性表達率明顯高于正常涎腺組織，差異顯著(72.50%vs17.50%,P<0.001)；SACC組中中低分化者CEACAM-1和VEGF 陽性表達率明顯高于高分化病者，Ⅲ+Ⅳ期的陽性表達率明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，伴淋巴結轉移、肺轉移、脈管浸潤組的陽性表達率明顯高于不伴淋巴結轉移、無肺轉移和無脈管浸潤者(P<0.05)；而不同性別、年齡及病變部位的CEACAM-1和VEGF陽性表達率則無明顯統計學差異(P>0.05)；且CEACAM-1和VEGF在SACC中的表達呈正相關(r=0.545，P<0.001)。 結論 CEACAM-1和VEGF與SACC的發生、發展、侵襲、轉移密切相關，二者可能在SACC的演進中存在協同作用，相互影響。

涎腺腺樣囊性癌； CEACAM-1； VEGF

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系常見的涎腺惡性腫瘤之一，病理類型以腺癌居多，侵襲性生長，惡性度較高，早期即可出現局部擴散或血行轉移，因而預后較差[1,2]。癌胚抗原相關黏附分子-1(CEACAM-1)系癌胚抗原家族重要成員之一，屬于免疫球蛋白一族，大量文獻顯示CEACAM-1可介導腫瘤細胞黏附，調節腫瘤細胞增殖、凋亡、分化，參與腫瘤血管、淋巴管生成過程，促進腫瘤細胞侵襲、遷移，抑制免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷[3,4]。血管內皮生長因子(VEGF)是迄今發現體內特異性最高的血管內皮分裂原，能刺激血管內皮細胞增殖，誘導腫瘤微血管形成，是腫瘤生長、侵襲、浸潤、轉移過程中重要的物質基礎與關鍵環節[5]。目前，國內關于CEACAM-1在SACC組織表達的相關報道較少，其在SACC組織中的浸潤轉移機制并不明確，本實驗以CEACAM-1在SACC病變的關系為中心，通過免疫組化檢測CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的表達及與臨床病理特征之間的關系，并分析二者的相關性，為臨床精準診療提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集2010-06～2015-06河北北方學院附屬第一醫院口腔頜面醫學科手術切除的SACC組織40例，癌組織取自癌灶中心處，另取切緣經病理證實為癌旁正常組織40例。依據2005年WHO關于SACC病理分型及TNM分期，篩孔型15例，實體型11例，管狀型14例；TNMⅠ+Ⅱ期23例，Ⅲ+Ⅳ期17例；小涎腺12例，大涎腺28例。所有患者均為原發性腫瘤，其中男 ∶女為26 ∶14,年齡40-62(52±2.7)歲。

1.2 免疫組化染色方法及試劑

兔抗人單克隆濃縮型CEACAM-1抗體、VEGF抗體均購于Santa Cruz公司, DAB顯色試劑盒購于博士德公司。

石蠟包埋、切片，3%甲醇-H2O2室溫孵育10 min，滅活內源性過氧化物酶，PBS沖洗，滴加10%正常山羊血清封閉游離的結合位點，滴加一抗、二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗，滴加辣根酶HRP標記鏈霉卵白素工作液，PBS洗3次，DAB顯色、復染、梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 CEACAM-1、VEGF陽性判定標準

CEACAM-1和VEGF均以細胞膜和細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性表達，根據染色程度及染色細胞百分率進行評定和分析。染色程度：基本不著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分；染色細胞百分率：無為0分，<25%為1分，25%-50%為2分，>50%為3分。染色程度得分與染色細胞百分率得分各自相乘：0-1分為陰性(-)，2-3分為(+)，4-6分為(++)，6分以上為(+++)[6]。

1.4 統計學方法

運用SPSS17.0統計軟件分析整理數據，用百分率表示計數資料，采用χ2檢驗分析 CEACAM-1和VEGF的表達與臨床病理參數的關系，相關性分析采用Spearmen檢驗，設P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的表達及相關性

SACC 組中的CEACAM-1和VEGF陽性表達高于癌旁正常組(見圖1)。SACC 組中的CEACAM-1陽性表達率為62.50%(25/40)，明顯高于癌旁正常組的12.50%(5/40)，差異有統計學意義(χ2=17.934，P<0.001)；SACC 組中的VEGF陽性表達率為72.50%(29/40)，明顯高于癌旁正常組的17.50%(7/40)，差異有統計學意義(χ2=19.271，P<0.001)。

圖1 免疫組化檢測腮腺組織中CEACAM-1、VEGF蛋白的陽性表達 (SP,×200)Figure 1 Expression of CEACAM-1 and VEGF in parotid tissues of SAAC and normal tissues by immunohistochemistry (SP,×200)

2.2 CEACAM-1和VEGF的表達與SACC臨床病理參數間的關系

CEACAM-1和VEGF在中/低分化組織中的表達率高于高分化者，在Ⅲ+Ⅳ期的陽性率高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結轉移、肺轉移組織中的陽性表達率遠高于無淋巴結轉移、無肺轉移者，在伴脈管浸潤組織中的陽性率遠高于無脈管浸潤者，以上差異均有統計學意義(均P<0.05，見表1)，而二者在性別、年齡及腫瘤部位中的表達則無明顯差異(均P>0.05，見表1)。

2.3 SACC組中CEACAM-1和VEGF表達的相關性

SAAC組中CEACAM-1和VEGF共同陽性者21例，共同陰性7例，符合一致率為70.00%(28/40)兩者呈明顯正相關(r=0.545，P<0.001，見表2)，表明CEACAM-1和VEGF在SAAC病變的發生、進展過程中具有協同作用。

表1 CEACAM-1和VEGF陽性表達與SACC臨床病理參數的關系 例(%)

Table 1 Positive expression of CEACAM-1and VEGF in SACC tissue and its correlation with clinical pathological features cases(%)

臨床病理參數nCEACAM-1表達VEGF表達陽性χ2P陰性χ2P性別1.1050.3061.5420.203 男2616(61.54)19(73.07) 女149(64.26)10(71.43)年齡1.4550.2131.1760.301 ≥50歲2416(66.67)18(75.00) <50歲169(56.25)11(68.75)腫瘤部位1.0710.3982.9470.106 小涎腺127(58.33)8(66.67) 大涎腺2818(64.29)21(75.00)病理分級10.8470.0009.6220.002 中/低分化2522(88.00)23(92.00) 高分化153(50.00)6(40.00)TNM分期5.1790.0227.2580.006 Ⅰ+Ⅱ2311(47.83)13(56.52) Ⅲ+Ⅳ1714(82.35)16(94.12)淋巴結轉移6.2590.0146.2810.013 有1412(85.71)13(92.86) 無2613(50.00)16(61.54)肺轉移6.6340.0127.8170.005 有76(85.71)7(100.00) 無3319(57.58)22(66.67)脈管浸潤7.0460.0078.6500.003 有98(88.89)9(100.00) 無3117(54.84)22(70.97)

表2 SACC組中CEACAM-1和VEGF表達的相關性

Table 2 Correlation of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues

CEACAM-1VEGF+-合計rP+214250.5450.000-8715合計291140

3 討論

CEACAM-1系癌胚抗原家族中最保守的基因，位于染色體19q13.2區域，由9個外顯子，11個亞型構成，其中多數亞型內含CEACAM1-L和CEACAM1-S2個亞組，前者內含72-74個氨基酸殘基，后者內含12-14個氨基酸殘基[7，8]。CEACAM1-L內含2個免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)，能通過磷酸化參與多個細胞內信號傳導，發揮其抑制下游信號的作用，而CEACAM1-S內含原肌球蛋白、鈣調蛋白及肌動蛋白的結構域，對維系細胞骨架有重要的調節作用[9]。CEACAM-1廣泛表達于內皮細胞、上皮細胞、各類粒細胞、淋巴細胞和腫瘤細胞中，除以少數分泌形式分布于體液中外，大多數以跨膜形式表達于細胞中。研究表明：CEACAM-1在乳腺癌、肝癌、大腸癌、泌尿系腫瘤等惡性腫瘤中的表達明顯降低，其沉默或下調在惡性腫瘤發生過程中發揮重要作用，因而CEACAM-1屬抑癌基因，能抑制腫瘤細胞的增殖[10,11]；但近年來相關文獻報道CEACAM-1在胃癌、肺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤中呈高表達，且與腫瘤的惡性生物學行為呈正相關[12-14]，從這方面考慮，CEACAM-1系致癌基因，因而目前認為CEACAM-1在腫瘤發生、進展中有雙重作用。

VEGF作為一種特異性極高血管內皮分裂原，能促進內皮細胞變形、遷移，分化和增殖，通過與VEGF-3等受體結合引起一系列信號傳導，釋放FGF、EGF等因子來誘導內皮細胞生成新生血管[15]。

本研究結果表明，CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的陽性表達遠高于癌旁正常組織，因而CEACAM-1在SACC的病變過程中發揮致癌作用。且其在中、低分化組織中的表達明顯高于高分化組織，其與SACC的TNM分期、肺轉移、淋巴結轉移及脈管浸潤等均具有一定相關性，進一步分析顯示二者在SACC病變中呈正相關。CEACAM-1能夠促進腫瘤新生血管的形成，Zhu等[16]研究顯示：在腫瘤新生血管內皮細胞中CEACAM-1表達異常增高，而在成熟的各類血管中幾無表達，且通過外源性CEACAM-1刺激腫瘤血管內皮細胞后，腫瘤細胞的增殖、遷移、浸潤及微血管腔形成的能力均有明顯提高，考慮在促血管生成的機制中CEACAM-1是VEGF一個極其重要的效應分子，即CEACAM-1通過某種信號傳導可誘導VEGF表達上調，從而促進血管生成。Kilic等[17]研究顯示：CEACAM-1的高表達會引起VEGF、VEGFR-2、Tie-2、angiopoietin-1、IL-8等血管形成因子表達上調，且CEACAM-1高表達能促進微血管內皮細胞向血管生成表型轉化。而Najjar等[18]應用CEACAM-1抗體封閉血管內皮細胞后發現，微血管的生成轉化過程幾乎停滯。

總之，CEACAM-1的異常表達參與SACC的發生、進展，并與血行浸潤、轉移等惡性生物學行為相關，其誘導VEGF的過表達可能是促進其發展的重要途徑之一，因而，對二者作用機制的深入探討將有望為SACC精準化診療提供科學依據。

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Expression of CEACAM-1 and VEGF in salivary adenoid cystic carcinoma and its clinical significance

MA Sai1, AN Feng1*, XU Aiwen1, WANG Qin1, LIU Bo2,ZHANG Li1, LI Liheng1

(1DepartmentofOralMaxillofacialSurgery,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China;2DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity；*Correspondingauthor，E-mail:yfyanfeng@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of CEACAM-1 and vascular endothelial growth factor(VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma(SACC) and its relationship with invasion and metastasis.MethodsThe expression of CEACAM-1 and VEGF in 40 cases of SACC and 40 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationships between their expression and clinicopathologic features in SACC were analyzed.ResultsThe positive expression rate of CEACAM-1 was significantly higher in SACC tissues than those in tumor adjacent normal tissues(62.5%vs12.5%,P<0.001).The positive expression rate of VEGF was significantly higher in SACC tissues than that in tumor adjacent normal tissues (72.5%vs17.5%,P<0.001).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were higher than those in patients without metastasis, respectively(P<0.05).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF were significantly higher in stage Ⅲ+Ⅳ patients than those in stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05),higher in middle-low differentiation patients than those in high differentiation patients(P<0.05), and also higher in vascular invasion patients than those in non-vascular invasion patients(P<0.05).There was no significant difference in positive expression of CEACAM-1 and VEGF among different gender, age and tumor size.There was a positive correlation beween the positive expression of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues(r=0.545,P<0.001).ConclusionThe expression of CEACAM-1 and VEGF may be closely correlated to the invasion and metastasis of SACC, and they may both paly important roles in the progression of SACC.

salivary adenoid cystic carcinoma; CEACAM-1; VEGF

河北省醫學科學研究重點課題資助項目(20150059)；河北省政府資助臨床醫學優秀人才培養和基礎課題研究項目(361009);河北張家口市科學技術研究與發展指導計劃資助項目(1421128D)

馬賽，男，1984-09生，碩士，主治醫師

2016-09-28

R739.8

A

1007-6611(2016)11-1022-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.016