欖香烯誘導SHG-44細胞凋亡和對細胞周期各時相的影響

李英夫，宣兆博，廉曉宇

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

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欖香烯誘導SHG-44細胞凋亡和對細胞周期各時相的影響

李英夫，宣兆博，廉曉宇*

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：觀察人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞在欖香烯誘導下形態的變化。方法：采用用流式細胞儀檢測人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞在欖香烯誘導下細胞凋亡和細胞周期的改變。結果：欖香烯可以抑制體外培養的SHG-44細胞的生長，并且不同濃度的欖香烯對SHG-44細胞的抑制作用程度是不相同的，隨著欖香烯濃度的增加，SHG-44細胞的凋亡率升高，呈現劑量依賴性。結論：欖香烯對SHG-44細胞有非常明顯的增殖抑制作用，可以加速SHG-44細胞的凋亡，具有抗腫瘤活性。

欖香烯；SHG-44細胞；凋亡；細胞周期

神經膠質瘤是位于神經外胚層的腫瘤，屬于顱內腫瘤的一種，一般手術治療難以徹底治愈，臨床手術治療后的復發率非常高。現在我國神經膠質瘤的藥物治療方面，一些新的化療藥物對穿透患者的血腦方面沒有突破，如何對神經膠質瘤進行治療是醫學界一直的研究課題之一[1]。

欖香烯是從抗癌藥物莪術中提練出來的抗癌活性成分，呈揮發油類，通過進行動物實驗和臨床實踐證明對腫瘤細胞具有抑制作用。

本文分析了欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44誘導SHG-44細胞凋亡和對細胞周期各時相的影響，旨在為膠質瘤的臨床治療提供有益的理論依據。通過欖香烯對體外培養的人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞誘導分化，對人腦膠質瘤細胞SHG-44進行體外培養，經過不同濃度的欖香烯作用后，用相差顯微鏡觀察細胞形態的變化，用流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期的改變。結果顯示欖香烯可以抑制體外培養的膠體瘤細胞SHG-44細胞生長，不同濃度的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44有著不同的抑制作用。對照組人腦膠質瘤細胞SHG-44的存活率明顯的高于實驗組，隨著欖香烯濃度的增加，觀察組的細胞殺傷力越來越高,并呈劑量依賴性。現將結果報道如下。

1 材料和方法

1.1 試劑

欖香烯；細胞培養基；胎牛血清；以上試劑由中國醫學科學院生物工程研究所提供。

1.2 方法

人腦膠質瘤細胞SHG-44由北京大學放射生物實驗室提供，在培養基里放入10%的胎牛血清，培養基中的溫度保持在35℃左右，在CO2含量為5%的培養箱中進行傳代培養。運用比色法對欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞增殖抑制率進行測定，移除細胞培養液，加入0.25%的胰酶，消化掉貼壁細胞，隨后加入10 ml的細胞培養液，調整細胞濃度，細胞培養液的濃度分別設置為0.05、0.15、0.25 mol/L，在每個孔里放入20 μL的噻唑藍，培養完成后將培養液移除。

測試完成后對吸光度的值進行計算，并計算細胞增殖抑制率。用比色法對欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞殺傷作用進行測定時，在每個孔里加入人腦膠質瘤細胞SHG-44。用流式細胞儀對欖香烯對人腦膠質瘤細胞凋亡情況進行測定，在24孔平地培養板中，培養不同濃度的欖香烯，測定人腦膠質瘤細胞的凋亡壞死率。

1.3 統計學處理

采用SSPS17.0統計軟件進行統計分析，計數資料以率進行比較，計量資料以均數±標準差表示，用單因素方差分析進行組間比較，P<0.05表示具有統計學意義。

2 結果

2.1 細胞形態觀察

欖香烯抑制SHG-44細胞增殖效果明顯，不同濃度的欖香烯制劑與SHG-44細胞共同孵育24 h，相關顯微鏡下觀察細胞呈多邊形貼壁生長，細胞的數目較多。不同濃度的欖香烯組SHG-44細胞，浮著的細胞數目增多，細胞數目減少，隨著濃度的增加細胞的殺傷性越強。不同濃度的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44會有不同的抑制作用，0.25 mol/L的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44的抑制作用大于0.05 mol/L的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44的抑制作用。不同濃度的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44的抑制作用見表1。

表1 不同濃度的欖香烯對SHG-44細胞周期及調亡率的影響

2.2 流式細胞術的試驗結果

不同濃度的欖香烯對SHG-44細胞的周期各時相變化都有影響，隨著欖香烯濃度的升高，作用效果越來越明顯。見表2。

2.3 透射電鏡的觀察結果

0.05 mol/L欖香烯組中SHG-44細胞的線粒體腫脹，細胞內有空泡形成，0.25 mol/L欖香烯組中的SHG-44細胞染色質靠邊緣進行凝集，導致細胞核破碎，可以明顯看到凋亡現象。

表2 不同濃度的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44的抑制作用及調亡率的影響

3 討論

通過對欖香烯誘導SHG-44細胞凋亡和對細胞周期各時相的影響進行試驗，用欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞增殖抑制率、細胞殺傷率進行測試，采用的是MTT法中的比色法，用流式細胞儀對欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44細胞調亡進行測試，不同濃度的欖香烯對人腦膠質瘤細胞SHG-44周期各時相均有影響。欖香烯使人腦膠質瘤細胞SHG-44的G1期受阻細胞堆積，不能快速的進入S期，使G2/M期的細胞數量相對較多，是由于細胞受到了損傷。

隨著藥物的濃度越來越高，患者細胞的殺傷作用逐漸增強，凋亡率在升高，組間的比較差異非常顯著。也說明了腫瘤是一種細胞的周期疾病，細胞的周期調整控制異常，是與細胞的癌變情況有關系的[2-4]。對照組人腦膠質瘤細胞SHG-44存活率明顯高于實驗組，而且實驗組中的每個組別隨著欖香烯濃度的增加，抑制作用在前期短暫的耐藥反應之后一直在持續升高。欖香烯不僅可以抑制人腦膠質瘤細胞SHG-44的增殖和調亡，也可以誘導調亡的抗腫瘤活性。總之，欖香烯有非常確度的抗腫瘤作用，毒副作用較小，抗癌譜廣，對SHG-44細胞有非常明顯的增殖抑制作用，可以加速SHG-44細胞的凋亡，同時也可以誘導細胞凋亡，具有抗腫瘤活性，其作用機理有待于進一步的研究。

[1] 朱迎君，周莉，樊永平，等.基于數據挖掘的中醫藥治療膠質瘤組方用藥規律探討[J].中醫藥學報，2016,44(3):12-15.

[2] 吉宏明.Β-欖香烯抑制膠質瘤兔角膜移植模型血管生成的實驗研究[J].黑龍江醫藥科學,2014,36(4):38-40.

[3] 柳影,陳儇,郭杰,等.氯化甲基汞對人SHG-44人腦膠質瘤細胞抗腫瘤活性的體外實驗研究[J].中國實驗診斷學,2010,14(4):475-478.

[4] 郭云寶,韓斌,楊洪發.三氧化二砷對人腦SHG-44人腦膠質瘤細胞作用的體外實驗研究[J].中風與神經疾病雜志,2013,30(4):365-368.

理 論 探 討

黑龍江省衛生廳科研項目(No.2014-222)

李英夫(1979-)，男，碩士，主治醫師，主要研究方向：膠質瘤的綜合治療。

廉曉宇*(1964-)，男，主任醫師，碩士研究生導師，主要研究方向：神經內鏡在臨床中的應用，膠質瘤的綜合治療。

2016-06-07

R285.5

A

1002-2406(2016)06-0011-02

修回日期：2016-07-05