高效液相色譜法測定抑毒調(diào)肝合劑中虎杖苷含量*

羅宏麗，肖順林，陳　昆

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，四川 瀘州　646000）

高效液相色譜法測定抑毒調(diào)肝合劑中虎杖苷含量*

羅宏麗，肖順林，陳昆

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，四川 瀘州646000）

目的 建立測定抑毒調(diào)肝合劑中虎杖苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（23∶77），檢測波長為306 nm，流速為1.0 mL／min，柱溫為30℃。結(jié)果 虎杖苷質(zhì)量濃度在20.32～203.20 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 1），平均回收率為94.76%，RSD為1.77%（n=9）。結(jié)論 該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于抑毒調(diào)肝合劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；抑毒調(diào)肝合劑；虎杖苷；含量測定

抑毒調(diào)肝合劑是由丹參、黃精、虎杖、黨參、貫眾5味中藥組方的中藥復(fù)方制劑，經(jīng)水煮醇沉而成，服用方便，具有補(bǔ)氣、解毒、調(diào)肝、健脾的作用，臨床用于治療癥見疲乏無力、不思飲食、肝區(qū)隱痛、自汗的慢性肝炎患者?；⒄溶兆鳛榛⒄鹊闹饕煞种?，已被《中國藥典》定為虎杖藥材的定量指標(biāo)，具有改善微循環(huán)、抗脂質(zhì)過氧化損傷、保肝等重要藥理作用［1-3］，故以虎杖苷作為本制劑的定量指標(biāo)具有重要意義。本研究中以虎杖苷為指標(biāo)成分，建立了測定抑毒調(diào)肝合劑中虎杖苷含量的高效液相色譜（HPLC）法，方法簡單、快速、分離度好、重復(fù)性好，可用于抑毒調(diào)肝合劑的質(zhì)量控制?，F(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Dionex Ultimate3000型高效液相色譜儀（美國戴安公司）；Kromasystem2000型色譜工作站，Hamilton ASO-0023型液相色譜進(jìn)樣器（Bio.Tek Instrument Snl公司）；Sartorius1712型分析天平（德國 Sartorius公司）；AS10200型超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）。

1.2試藥

虎杖苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111575-200502）；抑毒調(diào)肝合劑（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，批號分別為150312，150425，150516，150620，規(guī)格為每支20 mL）；乙腈為色譜純，乙醇為分析純，水為重蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動相：乙腈-水（23∶77）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：306 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2溶液制備

對照品溶液：稱取虎杖苷對照品5.08 mg，精密稱定，置5 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。

供試品溶液：精密量取抑毒調(diào)肝合劑5 mL，置具塞錐形瓶中，用45 mL稀乙醇超聲30 min，冷卻，搖勻，靜置，取上清液置50 mL容量瓶，用稀乙醇定容，作為供試品溶液。

陰性對照品溶液：按處方比例稱取不含虎杖的其他藥材，按抑毒調(diào)肝合劑生產(chǎn)工藝制備缺虎杖的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：分別精密吸取2.2項下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，注入色譜儀，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。在此色譜條件下，對照品溶液與供試品溶液色譜主成分峰的保留時間基本一致，陰性對照無干擾，見圖1。其理論板數(shù)按虎杖苷峰計應(yīng)不低于3 000。

圖1　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取虎杖苷對照品溶液0.1，0.2，0.5，0.8，1.0 mL，分別置5 mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度依次為 20.32，40.64，101.60，162.56，203.20 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣20 μL，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=1.152 2X-4.161 3，r=0.999 1（n=5）。結(jié)果表明，虎杖苷質(zhì)量濃度在20.32～203.20 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液20 μL，按2.1項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果的RSD為0.76%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，在室溫條件下分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h時進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1.16%（n=8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為150516）樣品適量，共5份，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定峰面積。結(jié)果虎杖苷的平均含量為151.64 μg／mL，RSD為1.21%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：精密量取5 mL已知含量的抑毒調(diào)肝合劑適量，置試管中，再分別精密加入低、中、高質(zhì)量濃度的虎杖苷對照品溶液，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4樣品含量測定

分別取4批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定不同批號的樣品中虎杖苷的含量。結(jié)果批號分別為 150312，150425，150516，150620的樣品中虎杖苷的含量分別為155.36，149.05，158.72，164.83 μg／mL。

3　討論

取虎杖苷對照品溶液，在200～400 nm波長范圍進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在306 nm波長處有最大吸收，所以選取306 nm為檢測波長。本試驗中考察了乙腈-水（18∶82）、乙腈-水（20∶80）、乙腈-水（25∶75）、乙腈-水（23∶77）等不同流動相對主峰保留時間、峰形及分離度的影響［4-9］。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-水（23∶77）作為流動相能實現(xiàn)虎杖苷與其他成分的有效分離，峰形良好，保留時間適當(dāng)，理論板數(shù)較高，故選其作為流動相。試驗還發(fā)現(xiàn)，柱溫對虎杖苷分離測定影響較大，在25℃時，主峰的保留時間過長，柱溫過高，其分離度不好，當(dāng)柱溫選擇30℃時，結(jié)果滿意，故選用30℃為柱溫。

虎杖苷在光照條件下不穩(wěn)定，易分解，故試驗需避光操作?；⒄溶找兹苡诩状肌⒁掖肌⒈?、熱水，在提取過程中考察了以甲醇、50%甲醇、無水乙醇、50%乙醇（稀乙醇）為提取溶劑，分別進(jìn)行15，20，25，30，35 min超聲。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，稀乙醇超聲提取30 min效果最好，樣品回收率高，方法簡便，易于操作，且用稀乙醇作為溶劑的供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

［1］陳鵬，胡曉立，雷偉亞，等.虎杖苷對血栓形成及血小板與中性粒細(xì)胞間相互作用的影響［J］.云南大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2006，28（4）：364-368.

［2］趙克森.虎杖苷抗休克的機(jī)理研究［J］.微循環(huán)學(xué)雜志，2006，16（2）：1-5.

［3］張明，鞠楷，孫琴，等.西南5個產(chǎn)區(qū)虎杖中虎杖苷和白藜蘆醇含量比較［J］.中國藥房，2012，23（39）：3723-3725.

［4］余瓊，張玉萍，方步武.蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方中虎杖苷的含量測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21（4）：821-822.

［5］劉艷.HPLC測定乙肝扶正膠囊中虎杖苷的含量［J］.中成

藥，2008，30（10）：24-26.

［6］陳瑞云，溫勇，王德杭，等.HPLC測定眾生丸中三種苷類成

分的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（2）：194-197.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：

中國醫(yī)藥科技出版社，2010：194-195.

［8］白梓靜，齊廣才，劉珍葉，等.高效液相色譜法測定消炎利膽沖

劑中虎杖苷的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2011，26（4）：251-253.

［9］楊海燕，張成.高效液相色譜法測定朱砂七中虎杖苷含量［J］.

中國藥業(yè)，2011，20（10）：29-30.

Content Determination of Polydatin in Yidu Tiaogan Mixture by HPLC

Luo Hongli，Xiao Shunlin，Chen Kun
（Department of Pharmacy，The Affiliated Hospital of Southwest Medical College，Luzhou，Sichuan，China 646000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of polydatin in Yidu Tiaogan Mixture.MethodsThe analysis was carried out at 30℃on an Hypersil C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase consisted of acetonitrilewater（23∶77）and a flow rate of 1.0 mL／min.The detection wavelength was 306 nm.ResultsThe calibration curve of polydatin was linear in the range of 20.32-203.20 μg／mL（r=0.999 1）.The average recovery was 94.76%，RSD=1.77%（n=9）.Conclusion This method is simple，accurate，reproducible and applicable for the quality control of Yidu Tiaogan Mixture.

HPLC；Yidu Tiaogan Mixture；polydatin；conten determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）20-0045-03

*四川省瀘州市科技計劃項目，項目編號：2015-S-45（3／5）。

羅宏麗（1979-），女，漢族，四川樂山人，碩士研究生，主管藥師，研究方向為臨床藥學(xué)，（電話）0830-3165750（電子信箱）luohongli＠stu.xjtu.edu.cn。

（2015-10-14；

2016-06-08）