獸用止痢散抗炎效果分析

胡冰野，保丹東

（1.貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025）

獸用止痢散抗炎效果分析

胡冰野1，保丹東2

（1.貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省生化工程中心，貴州 貴陽 550025）

為了研究止痢散抗炎的藥理學作用，為最終的臨床研究提供指導和借鑒意義。采用冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳廓腫脹、等方法研究止痢散的抗炎作用。二甲苯致小鼠耳廓腫脹結果顯示，與空白對照組相比：陽性組耳廓腫脹度極顯著降低（P＜0.01），抑制率極顯著增高（P＜0.01）；止痢散中、高劑量組耳廓腫脹度顯著降低（P＜0.05），抑制率顯著增高（P＜0.05）；其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用，但不明顯。冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加結果顯示：陽性組抑制率最高為46.45%；止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%，表明止痢散中、高劑量組對毛細血管通透性有一定的抑制性，但作用不明顯。結論顯示：止痢散具有抗炎作用，抗炎作用明顯。

獸用止痢散；消炎；抑制率

多葉勾兒茶，是一種勾兒茶屬綱鼠李目雙子葉植物，多葉勾兒茶全身可供藥用，勾兒茶主要含有多種活性化學物質，有治療風濕性關節炎、急性慢性氣管炎、止咳化痰等功效，具有一定的抗炎作用。地榆，地榆屬薔薇目雙子葉植物綱，微寒性，苦味酸澀，中醫理論上歸肝大腸經，主要含有皂苷，鞣質，黃酮類物質，功能涼血止血解毒斂瘡。地偷抗炎作用的有效成分為3，3'，4-三-O-甲基并沒食子酸，其抗炎作用明顯［1］。烏藥，山胡椒屬毛茛目山雙子葉植物綱，為常用傳統中藥，是重要的溫胃理氣止痛藥之一，主要含有揮發油，異吡喹酮類生物堿，用于溫中散寒，順氣止痛。烏藥還具有抗病毒性作用。

動物新獸藥止痢散主要組成是多葉勾兒茶輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復方中藥制劑。民間長將三者進行配方使用，用于抗炎的效果是肯定的，但是其抗炎作用與效果只見于民間口頭相傳，缺乏足夠的實驗依據與書籍記載，因此本實驗以此組方作為實驗抗炎對象，通過對獸用止痢散進行抗炎藥效學實驗研究分析，為臨床上廣泛運用提供理論基礎，同時為中藥在抗炎方面提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SPF級昆明小白鼠，體重20±2 g，購自解放軍第三軍醫大學實驗動物中心（動物許可證號：SCXK（渝）2012-0003），在貴州大學貴州省生化工程中心SPF級動物實驗室（動物使用許可證號：SYXK（黔）2013-0001）飼養，試驗過程中對動物的處理方法符合中華人民共和國科學技術部頒發的《關于善待實驗動物的指導性意見（2006）》的規定。

1.1.2 實驗試劑 止痢散原藥、多葉勾兒茶、地榆、烏藥（均由貴州省農業科學院畜牧獸醫研究所提供；）冰醋酸（安徽深藍醫療科技有限公司）；生理鹽水（北京科友佳生物技術有限公司）

1.1.3 藥物保存 止痢散高劑量組按止痢散原藥100 g +100 mL雙蒸水稀釋，止痢散中劑量組：按止痢散原藥100 g+200 ml雙蒸水稀釋，止痢散低劑量組按止痢散原藥100 g+900 mL雙蒸水稀釋；止痢散、多葉勾兒茶、地榆、烏藥等藥物均置于4攝氏度冰箱保存，使用時水浴加熱到25攝氏度。

1.1.4 實驗儀器 RE-52旋轉蒸發器（上海生化儀器廠）；SBH-IIIA循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；電子天平（北京賽多利斯天平儀器廠）；KQ3200電熱恒溫水浴鍋（北京醫療設備廠）；LS-B75立式壓力蒸汽滅菌器（江陰濱江醫療設備廠）；DHG-9230A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；0.5%伊文思蘭生理鹽水液（廣州化學試劑廠，批號20101217）；分光光度計Thermo Multiskan GO全波長酶標儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；打孔器（山東省醫學科學院設備站生產）等。

2 實驗方法

2.1 毛細血管通透實驗

根據參考文獻毛細血管實驗分組［1-2］，將140只小鼠按隨機次數分布表，隨機分為7組，每組20只（雌雄各半），設生理鹽水空白組、止痢散高、中、低劑量組，多葉勾兒茶+地榆組、多葉勾兒茶+地榆組+烏藥組，阿司匹林陽性對照組。除空白對照組給予同體積的生理鹽水外，灌胃給藥，在正常飼養基礎上連續用藥5 d，給藥體積0.2 mL/10 g。末次給藥30 min后，予1%伊文思蘭生理鹽水溶液10 mL/kg 尾靜脈注射后，隨即予0.6%醋酸0.2 mL只腹腔注射。20 min后脫頸處死各組小鼠，剪開腹腔，用0.9%氯化鈉注射液5 mL 沖洗腹腔數次收集洗滌液。將收集到的洗滌液置于離心機上，以4 000 r/min 離心速度，離心15 min，取上清液，用分光光度計在590 nm處比色測各組吸光度（OD）值［3］。得出吸光度（OD）值后通過計算得出各組小鼠伊文思藍含量，并計算各組抑制率見圖1。

抑制率（%）=（空白對照組伊文思藍含量-給藥組伊文思藍）/空白對照組伊文思藍含量×100%

2.2 二甲苯致耳廓腫脹實驗

實驗分組、給藥同消炎實驗，用灌胃針灌胃給藥，連續用藥5 d，給藥體重0.02 mL/g，在最后一次給藥后的1.2 h用致炎劑二甲苯均勻涂于小鼠右耳正反兩面，每只小鼠0.03 mL左耳不涂作為對照［4-6］。40 min后脫臼處死小鼠并沿耳基線剪下左右兩片耳朵，用8 mm 的打孔器分別在左右兩片耳朵鉆取相同部位，置于精密電子天平上稱量，計算腫脹度和抑制率［7］。

腫脹度=（右耳質量-左耳質量/左耳質量）

抑制率（%）=［（對照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/對照組耳腫脹度］×100%

3 結果

3.1 止痢散抗炎作用

3.1.1 止痢散對正常小鼠毛細血管通透性影響 結果如表1所示，與空白組相比陽性組伊文思藍含量極顯著減少（P＜0.01），OD590值顯著降低（P＜0.01），止痢散高劑量組伊文思藍含量顯著減少（P＜0.05）。抑制率結果如表2所示，陽性組抑制率最高為46.45%；止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%，這一結果顯示止痢散中、高劑量組對毛細血管通透性有一定的抑制性，但不明顯。

3.1.2 止痢散對二甲苯致小鼠耳廓腫脹影響 結果如表3所示，與空白對照組相比陽性組耳廓腫脹度極顯著降低（P＜0.01），抑制率極顯著增高（P＜0.01）；止痢散中高劑量組耳廓腫脹度顯著降低（P＜0.05），抑制率顯著增高（P＜0.05）；其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用，但不明顯。

圖1 伊文思藍含量與OD值對照標準曲線圖

表1 各組小鼠伊文思藍含量和OD90值比較（n=20，±SE）

表1 各組小鼠伊文思藍含量和OD90值比較（n=20，±SE）

組別 伊文思藍含量 OD590值空白組 0.003 10±0.000 47 0.190 377低劑量組 0.003 11±0.000 39 0.206 110中劑量組 0.002 90±0.000 38 0.192 388高劑量組 0.002 60±0.000 45 0.172 021多地組 0.003 44±0.000 43 0.226 615多地烏組 0.002 95±0.000 35 0.195 498

表2 各組小鼠伊文思藍含量及抑制率比較（n=20，±SE）

表2 各組小鼠伊文思藍含量及抑制率比較（n=20，±SE）

注：*，**表示 P＜0.05，P＜0.01；△，△△與陽性組比P＜0.05，P＜0.01。

空白組 0.003 10±0.000 47 -陽性組 0.001 66±0.000 6 46.45%低劑量組 0.003 11±0.000 39 5.34%中劑量組 0.002 90±0.000 38 6.45%高劑量組 0.002 60±0.000 45 16.13%多地組 0.003 44±0.000 43 5.78%組別 伊文思藍含量 抑制率（%）多地烏組 0.002 95±0.000 35 4.84%

表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較（n=20，±SE）

表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較（n=20，±SE）

注：*，**表示P＜0.05，P＜0.01；△，△△與陽性組比P＜0.05，P＜0.01。

組別 腫脹度（g） 抑制率（%）空白組 0.020 91±0.005 228 -陽性組 0.007 59±0.006 401** 63.70低劑量組 0.020 16±0.004 458 3.59中劑量組 0.018 75±0.003 379* 10.33高劑量組 0.018 09±0.005 974* 13.46多地組 0.019 98±0.004 208 4.45多地烏組 0.020 07±0.004 667 4.02

4 討論

炎癥是機體對于刺激的一種防御反應，表現為紅、腫、熱、痛和能障礙。實驗常用物理、化學刺激法制造炎癥動物模型來觀察藥物的抗炎作用，如外傷、高溫、低溫、紫外線或二甲苯、角叉菜膠等化學藥物致炎［8］。炎癥是具有血管系統的活體組織對損傷因子所發生的防御反應，根據其病程經過可分為急性炎癥和慢性炎癥。炎癥早期由于炎癥介質的刺激，血管擴張，血管內皮細胞間隙增大，血管壁通透性增高，炎癥局部組織血管內的液體和細胞成分通過血管壁進入組織間質、體腔和黏膜表面，造成組織腫脹。因此，炎性滲出和組織腫脹是急性炎癥早期的重要指標。本實驗采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高觀察止痢散的抗炎效果。

影響炎癥的因素有很多，炎癥反應受到機體不同的影響和調節，不僅和體內細胞因子有關，還與機體所處的外界環境有關，在大量的抗炎實驗中，通過觀察二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高來判斷實驗藥物的抗炎作用是一個比較可靠的方法。

因此，在本組實驗的對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響以生理鹽水為空白對照藥、對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹模型中，以阿司匹林作為陽性對照藥。目前阿司匹林是使用最為廣泛的鎮痛抗炎藥。

本實驗通過對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響和對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響實驗來研究觀察止痢散的抗炎作用［9］，結果表明，止痢散有一定的抗炎作用，但抗炎作用不顯著。

［1］韋健全，羅瑩，黃健，等.穿破石抗炎鎮痛活性觀察及最大給藥量測定［J］.中成藥，2011，（9）.

［2］張明發，沈雅琴.小檗堿的消炎鎮痛作用［J］.天然產物研究與開發，1990.

［3］李效振，賈書紅，張東升，等.中藥復方宮炎凈不同溶劑提取物對小鼠耳廓腫脹及毛細血管通透性的影響［J］.西北農業學報，2014，（2）.

［4］楊桂明，艾丹.白鮮皮抗炎有效部位的研究［J］.時珍國醫國藥，2010，（9）.

［5］鄂裘愷，謝煥松，周鳴鳴.芹菜素鎮痛消炎作用研究［J］.遼寧中醫藥大學學報，2008，（10）：145-146.

［6］張穎，張立木，李同德，等.紫荊葉與紫荊皮消炎鎮痛作用比較［J］.中國醫院藥學雜志，2011，（31）.

［7］李效振，賈書紅，張東升，等.谷新利中藥復方宮炎凈不同溶劑提取物對小鼠耳廓腫脹及毛細血管通透性的影響［J］.西北農業大學報，2014，（23）.

［8］馮潔，周勁帆，覃富景，等.兩面針根和莖抗炎鎮痛不同部位活性比較研究［J］.中藥藥理與臨床2011，（6）.

［9］楊何，蔣秀全.獸用止痢、止瀉中草藥新制劑的藥理試驗［J］.中獸醫學雜志，2014，（10）.

（編輯：張淑鳳）

R725.1

B

1006-799X（2016）10-0084-02

胡冰野（1993-），男，貴州正安人，本科在讀，主要研究方向為動物醫學。

貴州省重大專項（黔科合重大專項字［2013］6014）。