池養鏡泊湖蒙古鲌的人工繁殖及胚胎發育和胚后發育觀察

姜海峰，耿龍武，佟廣香，李晨宇，王四澤，徐 偉

( 中國水產科學研究院 黑龍江水產研究所，黑龍江 哈爾濱150070 )

池養鏡泊湖蒙古鲌的人工繁殖及胚胎發育和胚后發育觀察

姜海峰，耿龍武，佟廣香，李晨宇，王四澤，徐 偉

( 中國水產科學研究院 黑龍江水產研究所，黑龍江 哈爾濱150070 )

研究了池塘養殖條件下鏡泊湖蒙古鲌的人工繁殖及胚胎和胚后發育。試驗結果顯示，池養蒙古鲌人工催產的適宜時間為6月上旬，水溫為23～26 ℃。混合激素400 IU/kg 絨毛膜促性腺激素+ 4 g/kg絨毛膜促性腺激素A2+ 2 mg/kg 地歐酮，催產率達80% 以上。鏡泊湖蒙古鲌成熟卵呈圓球形，淡黃色，半透明，屬沉黏性卵； 平均卵徑為 (1.10 ± 0.03) mm，吸水膨脹后的卵徑為 (1.42 ± 0.05) mm。水溫23～25 ℃時，受精卵至破膜需38 h，積溫926.3 ℃·h。鏡泊湖蒙古鲌的胚胎發育時序和特征符合鲌屬魚類胚胎發育的一般規律，可分為胚盤、卵裂、囊胚、原腸、神經胚和器官形成6個發育階段，進一步細分應為21個發育時期，初孵仔魚全長 (4.32 ± 0.31) mm，當達到(5.70 ± 0.47) mm時開始平游攝食。

蒙古鲌；池塘養殖；人工催產；胚胎發育

蒙古鲌(Erythrocultermongolicus)屬鯉形目、鯉科、鲌亞科、鲌屬，遍布于我國各水系中。分布于鏡泊湖的蒙古鲌是黑龍江流域重要的經濟魚類之一，俗稱紅尾[1]。在20世紀80年代，鏡泊湖蒙古鲌的年產量很高，達到1.5×105kg，占漁獲量的45.9%～56.1%。然而，近年來由于環境破壞和過度捕撈等人為因素，其野生資源量急劇下降已接近枯竭[2]。至2000年，年產量降至5×104kg，從2001年至今，平均年產量僅約2.5×104kg。目前，鏡泊湖蒙古鲌被評為綠色無公害食品，并獲得農產品地理保護標志認證產品，具有很高的市場認可度。

國內學者對長江流域蒙古鲌的研究較多，主要開展了人工繁殖[3]、營養需求[4]、苗種培育[5]、生長特性等[6]研究。而對黑龍江流域的蒙古鲌報道卻較少，主要集中在資源調查[1-2]、人工繁殖[7-8]和遺傳分化[9]等方面，池塘養殖蒙古鲌的人工繁殖和胚胎發育等方面的研究尚未見報道。本研究通過鏡泊湖蒙古鲌人工繁殖催產藥物用量的摸索，以及胚胎發育的系統觀察，旨在為鏡泊湖蒙古鲌的人工增殖及產業化養殖提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

于2008年6月從鏡泊湖捕撈野生蒙古鲌親魚，在黑龍江水產研究所松浦試驗場經人工催產、孵化獲得子一代，池塘中投喂鯉魚顆粒餌料飼養，經4年培育至性成熟親魚，體長為27.4～36.5 cm，體質量為270～415 g。催產藥物為促黃體素釋放激素類似物A2、絨毛膜促性腺激素和地歐酮。

1.2 人工繁殖

2014年6 月水溫穩定在23 ℃以上時，進行人工繁殖試驗。選擇生殖孔突出，腹部膨大柔軟的雌魚和輕壓腹部有精液流出的雄魚各20尾。參考魚類人工催產藥物用量的相關文獻[3,8,10-14]，設置4種劑量催產藥物組合進行人工催產試驗：A組合，200 IU/kg 絨毛膜促性腺激素+2 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+1 mg/kg地歐酮；B組合，300 IU/kg絨毛膜促性腺激素+3 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+1.5 mg/kg 地歐酮；C組合，400 IU/kg絨毛膜促性腺激素+4 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+ 2 mg/kg 地歐酮；D組合，500 IU/kg絨毛膜促性腺激素+5 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+ 2.5 mg/kg地歐酮。催產藥物采用胸鰭基部腹腔一次注射，雄魚注射劑量減半。將催產后的親魚以雌雄1∶1的比例置于4個產卵網箱中(2 m×1 m×1 m)，每個網箱5組親魚。自然產卵，收集魚卵后在孵化桶中流水孵化，分別統計各組的催產率和受精率。

催產率/%=產卵的雌魚數/催產的雌魚數×100%

受精率/%=受精卵數/取樣卵數×100%

(n=200)

1.3 胚胎發育觀察

為準確確定胚胎發育時間及獲得潔凈的受精卵，用人工干法授精。受精卵孵化期間，每次在Motic解剖鏡下觀察50粒受精卵的胚胎發育特點，胚胎發育分期參照四大家魚的分類方法[15]，以50%以上受精卵發育到該期計算。發育積溫為某發育期平均水溫與此發育期所用時間的乘積。

2 結果與分析

2.1 蒙古鲌的人工繁殖

2013—2014年在哈爾濱地區進行的池塘養殖蒙古鲌的人工繁育試驗結果見表1。由表1可知，池塘中的蒙古鲌的適宜人工繁殖時間為6月上旬，水溫在23 ℃以上。

不同的催產藥物劑量對繁殖效果具有明顯的影響(表2)，同樣水溫條件下，200 IU/kg絨毛膜促性腺激素+2 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+1 mg/kg地歐酮試驗組在催產后20 h后未產卵，人工擠壓魚體腹部檢查發現雌魚卵子游離程度較差；300 IU/kg絨毛膜促性腺激素+3 g/kg促黃體釋放激素類似物A2+1.5 mg/kg地歐酮試驗組劑量雖然能夠使大多數親魚催產成功，但觀察發現大多數受精卵雖受精但停止發育；400 IU/kg絨毛膜促性腺激素+4 g/kg促黃體釋放激素類似物A2+2 mg/kg地歐酮試驗組與500 IU/kg絨毛膜促性腺激素+5 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+2.5 mg/kg地歐酮試驗組的催產率和受精率均很高，催產藥物的效應時間約為10 h，表明400 IU/kg絨毛膜促性腺激素+4 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+ 2 mg/kg 地歐酮可以滿足蒙古鲌的催產條件。

2.2 蒙古鲌的胚胎發育

蒙古鲌的卵呈圓球形，淡黃色，遇水后會產生較強的黏性。卵徑為 (1.10±0.03) mm，吸水膨脹后的卵徑為 (1.42±0.05) mm。在24～25 ℃的條件下，蒙古鲌的卵從受精至破膜整個發育過程歷時38 h，有效積溫為926.3 ℃·h。依據各階段的形態變化和發育特點，可將蒙古鲌胚胎發育經歷胚盤、卵裂、囊胚、原腸、神經胚和器官形6個主要發育階段，進一步細分為21個發育期，具體過程見表3和圖1。蒙古鲌胚盤期歷時30 min，需要積溫12 ℃·h，占總積溫的1.3%；卵裂期階段歷時160 min，需積溫60.2 ℃·h，占總積溫的6.52%；囊胚期歷時200 min需積溫79.2 ℃·h，占總積溫的8.58%；原腸期歷時3 h，需積溫73.8 ℃·h，占總積溫的8.0%；神經胚歷時150 min，需積溫60 ℃·h，占總積溫的6.50%；器官形成期耗時最長，歷時1570 min，需積溫634.2 ℃·h，占總積溫的68.67%。

2.3 蒙古鲌胚后發育觀察

水溫在25 ℃時，孵化發生在受精后的38 h。初孵仔魚長度為(4.32±0.31) mm，肌節43對，除眼球腹面內側出現一對黑色斑點外，身體透明無色，背鰭與尾鰭相連，在水體中做間歇性上下游動(圖1v)；出膜后2日齡仔魚隨著卵黃的逐漸吸收，卵黃囊變的狹長，頭部骨骼開始形成，眼球色素增多，可以觀察到3塊鰓板，胸鰭略向兩側隆起，鰾出現(圖1w)；出膜后3日齡仔魚，黑色素完全布滿整個眼球，卵黃囊呈窄條狀，下口位形成，胸鰭較明顯，腹部和頭背部出現點狀黑色素(圖1x)；4日齡仔魚的鰾膜出現黑色素，未分室，胸鰭呈扇狀；卵黃囊吸收完全，端口位形成，消化道發育完整，出現追食行為，由于鰭的分化，活動能力增強，可以在水中長時間平游，體長為(5.70±0.47) mm(圖1y)。

表1 2013-2014年鏡泊湖蒙古鲌人工繁殖情況

注：“-”表示人工繁殖未成功.

表2 不同激素劑量的催產效果

注：“-” 表示未受精.

表3 鏡泊湖蒙古鲌的胚胎發育時序

3 討 論

3.1 蒙古鲌的人工繁育

蒙古鲌在鏡泊湖有明顯的產卵洄游習性，產卵期一般為6月下旬至7月上中旬，水溫22～25 ℃[1]。本研究中池養蒙古鲌的繁殖時間比野生鏡泊湖蒙古鲌稍早一些，是由于池塘中的水溫比同期的鏡泊湖的水溫高。此外，本研究發現，蒙古鲌的催產率和受精率均隨催產藥物劑量的增加而提高，但最高劑量組受精率呈現略微的下降趨勢，與翹嘴紅鲌(E.ilishaeformis)[12]和泥鰍(Orientalweatherfish)[16]繁育中觀察到的結果相似，綜合性價考慮，建議使用400 IU/kg絨毛膜促性腺激素+4 g/kg促黃體素釋放激素類似物A2+ 2 mg/kg 地歐酮用量組合更適宜蒙古鲌的人工催產。

3.2 鏡泊湖蒙古鲌卵的特性

鏡泊湖蒙古鲌的卵遇水后會產生較強的黏性，吸水后的卵徑為1.42 mm，卵周隙約為0.3 mm，同大多淡水魚沉性卵卵徑(1～1.5 cm)相近[10]，與黑尾近紅鲌(Ancherythroculternigrocauda)[11]、海南紅鲌(E.reeurviceps)[13]及太湖翹嘴紅鲌[15]較接近，但同興凱湖翹嘴鲌(Culteralburnus)[14]差異較大。興凱湖翹嘴鲌的受精卵為非黏性、半浮性，吸水后卵徑約達4.7 mm，卵周隙約3.6 mm (表4)。王偉[18]對鲌亞科魚類系統發生的研究表明翹嘴鲌同海南紅鲌的親緣關系比蒙古鲌更近，此外屬于同種但不同地理種群的興凱湖翹嘴鲌與太湖翹嘴紅鲌之間的卵差異同樣很大。可以看出，上述受精卵的差異同物種間的親緣關系并不一致，由此推測這些差異可能是不同地理種群或物種在長期演化過程中對不同生態、生境等差異的適應性導致。

圖1 蒙古鲌的胚胎發育a.受精卵；b. 胚盤隆起；c. 2細胞期；d. 4細胞期；e. 8細胞期；f. 16細胞期；g. 桑葚期；h. 囊胚早期；i. 囊胚中期；j. 囊胚晚期；k. 原腸早期；l. 原腸中期；m. 原腸晚期；n. 神經胚期；o. 胚孔封閉期；p. 眼基期；q. 眼囊期；r. 尾芽期；s. 晶體出現期；t. 心臟出現期；u. 出膜期；v. 1日齡仔魚；w. 2日齡仔魚；x. 3日齡仔魚；y. 4日齡仔魚.

3.3 鏡泊湖蒙古鲌的胚胎發育特點

魚類的胚胎發育具有種特異性，并同遺傳、生態、生境、親魚營養和健康狀況等因素密切相關[9,14-15]。觀察結果表明，蒙古鲌的胚胎發育的外部特征符合鲌亞科魚類胚胎發育的一般規律。在有效積溫方面，蒙古鲌整個胚胎發育需有效積溫923.6 ℃·h，與海南紅鲌的有效積溫924.9 ℃·h相近，高于興凱湖翹嘴鲌的有效積溫607.5 ℃·h和太湖翹嘴紅鲌的有效積溫619.8 ℃·h，低于黑尾近紅鲌的有效積溫1150.3 ℃·h(表4)。此外，雖然各發育時期所需積溫有所不同，但主要差異為器官形成期和出膜期之間的出膜過程(表4)。相對于海南紅鲌，興凱湖翹嘴鲌和太湖翹嘴紅鲌，蒙古鲌的出膜期積溫遠高于器官形成期，與黑尾近紅鲌相似。胚體出膜過程受卵膜厚度、胚體活力、水溫及孵化方式等多因素的影響，具體原因有待進一步研究。

表4 蒙古鲌與其他鲌的受精卵和發育積溫的對比

3.4 初孵仔魚的特征

鏡泊湖蒙古鲌初孵仔魚體長約4.32 mm，與同亞科鲌屬的興凱湖翹嘴鲌(4.17 mm)[14]、太湖翹嘴紅鲌(4.10 mm)[15]、海南紅鲌(4.4 mm)[13]及近紅鲌屬的黑尾近紅鲌(4.04 mm)[11]較為相近。鏡泊湖蒙古鲌初孵仔魚透明無色，僅在眼球腹面內側發現一對黑色眼點，此特征同翹嘴鲌[13]、達氏鲌(C.dabryi)[18]及黑尾近紅鲌[10]的仔魚一致，而同亞科舫屬的團頭魴(Megalobramaamblycephala)[19]的初孵仔魚身體前端分布有很多顆粒狀孵化腺細胞，三角魴(M.terminalis)[20]的初孵仔魚身體完全透明，僅在胸鰭原基發生期出現黑色素眼點。

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ArtificialPropagationandObservationofEmbryonicandPostembryonicDevelopmentinPond-farmedMongolianCulterErythrocultermongolicusCollectedfromJingpoLake

JIANG Haifeng, GENG Longwu, TONG Guangxiang, LI Chenyu, WANG Size, XU Wei

( Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Harbin 150070, China )

The artificial propagation was conducted, and embryonic and postembryonic development was observed in pond-farmed Mongolian culterErythrocultermongolicuscollected from Jingpo Lake. Results showed that Mongolian culter cultured in ponds was induced to spawn appropriately in early June at water temperature of 23—26 ℃ by injection of a hormone mixture of 400 IU/kg HCG+4 g/kg A2+2 mg/kg DOM with spawning success of over 80%. The mature Mongolian culter had sphere, yellowish, demersal and adhesive eggs with mean diameter of (1.10±0.03) mm and the eggs were changed to (1.42±0.05) mm in diameter after water absorbing. It took 38 hours that the fertilized eggs were hatched from fertilization with an accumulative temperatures of 926.3 ℃·h at water temperature of 23—25 ℃. LikeCulturegenus, the embryonic development of Mongolian culter was divided into 6 stages: fertilized egg, cleavage, blastula, gastrula, neurula and organogenesis, and subdivided into twenty one developmental phases. The newly hatched larvae had mean total length of (4.32±0.31) mm, and began initial feeding and floating-up swimming at total length of (5.70±0.47) mm.

Erythrocultermongolicus: pond culture; to be induced to spawn; embryonic development

10.16378/j.cnki.1003-1111.2016.02.006

Q959.4

A

1003-1111(2016)02-0130-06

2015-07-24；

2015-11-10.

中國水產科學研究院基本科研業務費資助項目 (2014A07XK04)

姜海峰 (1987-)，男，助理研究員，碩士; 研究方向：魚類遺傳育種. E-mail：haifeng-2008@163.com.通訊作者：徐偉(1970-)，男，研究員；研究方向：魚類遺傳育種. E-mail：xwsc23@163.com.