李金花 曾 銳 李文濤 黃林芳
(1 中國醫學科學院北京協和醫學院藥用植物研究所,北京,100191; 2 西南民族大學藥學院,成都,610041)
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秦艽品質與氣候因子相關性分析
李金花1曾 銳2李文濤1黃林芳1
(1 中國醫學科學院北京協和醫學院藥用植物研究所,北京,100191; 2 西南民族大學藥學院,成都,610041)
目的:探討秦艽品質與氣候因子的相關性,為秦艽種植與栽培提供依據。方法:采用UPLC法測定秦艽主產區陜西、甘肅、寧夏3省20批次樣品中龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷4種有效成分的含量,同時收集產地的氣候因子,應用SPSS軟件對不同產地秦艽有效成分含量和氣候因子進行單因素方差分析、PCA分析,典型相關性分析,尋找和揭示影響秦艽品質的氣候因子。結果:20批樣品中龍膽苦苷和馬錢苷酸的總含量都高于藥典限度,其中陜西鳳縣的有效成分含量最高,品質較好;秦艽中龍膽苦苷的含量與溫度、氣壓呈極顯著正相關,與風速呈極顯著負相關;馬錢苷酸與年降水量呈極顯著正相關,與風速呈顯著正相關;獐牙菜苦苷與風速呈顯著正相關,與年降水量、溫度呈極顯著負相關;獐牙菜苷與氣候因子未表現出顯著相關性。結論:陜西產秦艽品質較好,優于甘肅和寧夏產的秦艽,其中陜西鳳縣產的秦艽質量最佳。秦艽的質量與氣候條件密切相關,溫度、氣壓和降水量是影響秦艽品質重要的氣候因子。在一定范圍內,溫度越高、氣壓越高、降水量越大,越有利于秦艽化學成分的積累,促進活性成分含量富集。該研究為不同產地秦艽品質變異及生態適應提供了實驗依據,對提高秦艽品質、進行適宜的生態區劃分和保障秦艽產業化發展具有重要指導意義。
秦艽;化學成分;氣候因子;質量評價
秦艽是我國常用大宗藥材,主產于青海、甘肅、陜西、山西、四川等地,陜西、甘肅為其道地產區,產量最高,品質最好[1]。秦艽主要活性成分為龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷[1],具有祛風濕、止痹痛、退虛熱的功效[2]。現代藥理研究發現,秦艽具有抗炎、鎮痛、保肝、抗氧化多種藥理作用[3],秦艽GentianamacrophyllaPall.為《中華人民共和國藥典》2015版收載秦艽的主要來源之一[2]。氣候因子與藥材的生長和品質有著密切聯系,氣候條件和栽培技術的不同,可造成藥材質量的差異[4-5]。溫度、光照、水分等氣候因子作為主要的氣候因子,單獨或相互作用影響著藥材品質[6]。目前對秦艽的研究,主要有化學資源調查、種質評價、成分測定、藥理研究,產地土壤的微量元素比較等[7-12]。李佳峰研究了秦艽及近緣種龍膽苦苷積累與環境因子相關性[13],其研究的化學成分單一,氣候因子對其他活性成分影響仍未知。因此,進一步研究生態因子與秦艽活性成分之間的聯系,對提高秦艽品質,確定最適宜的產區,實現秦艽的可持續發展具有重要意義。本研究測定了秦艽主產區陜西、甘肅、寧夏3省20個批次秦艽中龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷4種化學成分的含量,應用SPSS軟件典型相關分析和主成分析研究了4個化學成分含量與產地氣候因子之間的關系。探討了化學成分、生態因子值之間的聯系,為提高秦艽品質,建立秦艽規范化種植基地提供科學參考。
1.1 材料 本研究所用的秦艽樣品為陜西、甘肅和寧夏3個秦艽主產區的20個不同地區的栽培樣品,每個產地的樣品數在5株以上。采集后將同一個產地的樣品放在一起,用去離子水洗凈泥沙,自然風干。原植物由中國醫學科學院藥用植物研究所黃林芳博士鑒定為大葉秦艽(GentianamacrophyllaPall.)。見表1。
1.2 儀器與試劑 Acquity UPLC-PAD超高效液相色譜儀(美國Waters公司),包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、二極管陣列檢測器和Empower 2色譜工作站。MSA225 s型電子分析天平(德國Sartorius公司);KQ-500B超聲波儀(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);ELGA PURE-LABClassic-UVF純水儀(英國ELGA公司)。乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。對照品龍膽苦苷(批號MUST-11011401),馬錢甘酸(批號MUST-11042501),獐牙菜苦苷(批號MUST-11012401)和獐牙菜苷(批號MUST-11020802)均購于成都曼斯特生物科技有限公司,對照品純度>98%。

表1 秦艽樣品信息
1.3 秦艽有效成分的測定 樣品前處理:將干燥的秦艽藥材粉碎,過4號篩,精密稱取粉末1 g,置于具塞三角瓶中,加入甲醇25 mL,稱定重量,超聲(250 W,50 kHz)提取1 h,放冷,稱重,用甲醇補足損失的重量,混勻,過濾,取續濾液過濾(0.22 μm微孔濾膜),濾液作供試品溶液用于含量測定。
色譜條件:色譜柱為Waters Acquity18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),以乙腈-0.1%醋酸水為流動相進行梯度洗脫,洗脫程序為:0~4.6 min,5%~10%乙腈;4.6~15.6 min,10%~20%乙腈;15.6~16.6 min,25%~45%乙腈;16.6~18 min,45%~5%乙腈;18~23 min,5%乙腈;流速為0.35 mL/min,柱溫為30 ℃,進樣量2 μL,檢測波長254 nm。方法學考察結果顯示精密度、重現性、穩定性、回收率良好。
1.4 氣候因子獲取 利用ARCGIS系統對采樣點坐標轉換數據進行處理,形成空間數據文件,在“中國氣象科學數據共享服務網”提取生態屬性數據文件,氣候屬性值包括:年降水量,年平均氣壓,年平均氣溫,年相對濕度,年日照時數,7月最高溫度,7月平均溫度,1月最低溫度,1月平均溫度等氣候因子,對數據值歸納匯總(表2)。
1.5 數據分析 應用Microsoft Excel和SPSS軟件進行數據分析和圖表繪制。利用SPSS軟件對有效成分含量進行單因素方差分析,找出顯著差異性成分,接著對秦艽有效成分與氣候因子進行主成分分析(Principal Component Analysis,PCA),得到秦艽有效成分和環境因子分別在主成分分析中的聚類結果,明確各環境因子梯度間關系;最后應用SPSS提供的典型相關分析宏插件對秦艽有效成分含量與氣候因子進行典型相關性分析,得出相關系數。

表2 秦艽采集地氣候因子信息

表3 秦艽化學成分單因素方差分析
2.1 秦艽有效成分含量及指紋圖譜分析 應用UPLC對20批秦艽樣品中龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦甘、獐牙菜苷4種成分進行了含量測定,其中龍膽苦苷和馬錢苷酸化學成分為《中華人民共和國藥典》(2015年版一部)規定檢測的成分,且不得少于2.5%。測得20批樣品中秦艽樣品中龍膽苦苷和馬錢苷酸都遠大于藥典規定的最低量。含量測定結果如圖1和表3,不同產地秦艽中龍膽苦苷含量高低依次為:陜西隴縣>陜西鳳縣>陜西眉縣>陜西太白縣>甘肅華亭縣>寧夏隆德縣;不同產地秦艽中馬錢苷酸含量高低依次為:陜西太白縣>陜西鳳縣>陜西眉縣>甘肅華亭縣>寧夏隆德縣>陜西隴縣;不同產地秦艽中4種有效成分總含量高低依次為:陜西鳳縣>陜西太白縣>陜西隴縣>甘肅華亭縣>寧夏隆德縣>陜西太白縣。陜西鳳縣、隴縣、太白縣產秦艽有效成分的含量較高,其次是甘肅華亭縣、陜西眉縣產的秦艽,有效成分含量最低的是寧夏隆德縣產的秦艽。

圖1 不同產地秦艽中化學成分含量
利用SPSS軟件對不同產地化學成分含量做單因素方差分析(表3)。陜西鳳縣產的秦艽龍膽苦苷的含量顯著高于陜西太白、甘肅華亭和寧夏隆德產的含量(P<0.05);陜西鳳縣產的秦艽馬錢苷酸的含量顯著高于陜西太白縣的含量。陜西鳳縣、隴縣和眉縣沒有出現顯著差異。結合總含量,綜合比較得到陜西鳳縣和隴縣產的秦艽質量最佳。
不同產地秦艽4種化學成分含量PCA分析(圖2)可見,各產地秦艽均明顯分開,揭示不同產地間秦艽化學成分的差異性和各產地內秦艽化學成分的相似性。陜西太白縣產的秦艽分布在PCA右側,聚為一類;寧夏隆德產的秦艽分布在PCA的左下方,明顯聚為一類;而陜西隴縣、鳳縣、眉縣和甘肅華亭縣產的秦艽分布在PCA圖的左上側,可聚為一類;甘肅華亭縣產的秦艽位于PCA的中間。結合秦艽有效成分單因素方差分析,結果說明陜西鳳縣、隴縣和眉縣產的秦艽品質較好,可以與陜西太白、甘肅華亭和寧夏隆德樣品明顯區分開。

圖2 不同產地秦艽化學成分含量PCA分析
此外,本研究進行了秦艽指紋圖譜分析,建立了UPLC指紋圖譜共有模式,并對20批藥材進行了相似度比較。色譜圖采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統研究版(2004A)》軟件分析,選擇穩定性較好,吸收性強,特征明顯的色譜峰為共有峰,共標定龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷4個共有峰,然后進行多點校正,多點校正后采用中位數法產生對照指紋圖譜,并以此為標準對各批樣品進行整體相似度評價。UPLC指紋圖譜如圖3,相似度如表4。結果顯示:用于建立指紋圖譜的20個秦艽樣品整體相似度較高,平均相似度為0.984。

圖3 秦艽藥材UPLC指紋圖譜
2.2 秦艽采樣點氣候因子分析 為更加全面分析采樣點秦艽的氣候因子,以氣候因子數據對秦艽不同產地氣象站進行PCA分析,圖4發現不同產地氣象站可以分開,表明不同產地的氣候因子存在差異性。陜西鳳縣、隴縣和眉縣氣象站在PCA上分布較近,表明它們氣候因子較類似。

圖4 秦艽采樣點氣候因子PCA分析
2.3 秦艽有效成分含量與氣候因子相關性分析 利用SPSS軟件對不同產地氣候因子與秦艽活性成分含量的相關性進行分析,結果見表5。由表5可知,龍膽苦苷與年均氣壓、年均溫度、年均最低氣溫、年均最高氣溫、7月均溫、1月最低溫度、1月均溫呈極顯著正相關,與年均風速呈極顯著負相關;馬錢苷酸與年降水量、年均風速呈正相關;獐牙菜苦苷與年均風速呈正相關,與年降水量、年均氣壓、年均溫度、年均最低氣溫、年均最高氣溫、7月最高溫度、1月最低溫度、1月均溫呈顯著負相關;獐牙菜苷含量與氣候因子沒有表現出顯著相關性。總含量與年平降水量、年均氣壓、年均溫度、年均最低溫度、7月最高溫度、1月最低溫度、1月均溫呈正相關關系。綜合分析,可得出溫度、氣壓、降水量是影響秦艽有效成分累積的主要氣候因子。

表4 秦艽藥材相似度評價

表5 秦艽化學成分含量與氣候因子相關系數
生態環境是影響中藥材品質的重要因素之一,不同主產區藥材品質存在差異,因此對不同產地藥材品質比較和探究產生品質差異的原因至關重要[14-15]。本文應用UPLC法同時測定秦艽中龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷4個主成分含量,并采用單因素方差分析、相關性分析和主成分分析等方法,考察秦艽道地產區和主產區化學成分含量的差異性,尋找并揭示秦艽品質及與氣候因子的相關性,探究氣候因子對秦艽的作用規律。
3.1 秦艽化學成分地域差異性 本研究測定了陜西、甘肅、寧夏三省(區)20個批次秦艽樣品中龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷4個化學成分含量。膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷是秦艽的重要活性成分,其中龍膽苦苷和馬錢苷酸為《中華人民共和國藥典》2015版測定的指標,規定總量不得少于2.5%。本研究所測定的20批次樣品,均符合規定,且含量遠高于藥典要求。另外,隨著地域的不同,秦艽中化學成分含量表現出地域差異性。陜西產的秦艽化學成分含量最高、其次是甘肅,最后是寧夏,其中陜西鳳縣產的秦艽品質最佳,優于陜西隴縣、太白縣和甘肅華亭,這與文獻報道一致[16]。陜西、甘肅為秦艽的道地產區,本實驗測得秦艽中活性化學成分含量結果與陜西、甘肅為秦艽道地產區一致[17]。
3.2 秦艽化學成分與氣候因子相關性 根據不同產地秦艽化學成分和氣候因子主成分分析結果,化學成分和氣候因子的PCA分析結果一致,說明氣候因子對秦艽中化學成分的積累具有一定的作用。通過對不同產地氣候因子與秦艽活性成分含量的相關性進行分析,結果表明秦艽中龍膽苦苷的積累隨溫度、氣壓的升高而增加,這結果與之前文獻報道一致[13],但本研究中龍膽苦苷的積累與降水量未表現出顯著相關性,與文獻報道呈正相關不同,龍膽苦苷與降水量之間的相關性還需進一步研究。此外,本研究還發現秦艽中龍膽苦苷的積累與風速呈負相關;馬錢苷酸的積累與降水量,年均風速呈正相關。溫度、降水量、氣壓是影響秦艽化學成分含量的重要因素。在一定范圍內,溫度越高、氣壓越高、降水量越大,越有利于秦艽有效化學成分的積累,促進活性成分含量富集。
綜上所述,通過對秦艽主成分含量測定與氣候因子的相關性分析,溫度、降水量和氣壓是影響不同產區秦艽品質差異的主要氣候因素,為秦艽的保護、栽培及其資源可持續發展提供了重要依據。
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(2016-04-12收稿 責任編輯:洪志強)
世界中醫藥大會第二屆夏季峰會暨國際中醫藥界祭拜炎帝大典第二輪通知
2016年6月1日-3日中國·湖北隨州
由世界中醫藥學會聯合會主辦的世界中醫藥大會是全球中醫藥領域規模大、參與廣、層次高的學術盛會。至今已在中國、法國、加拿大、新加坡、中國澳門、澳大利亞、荷蘭、英國、馬來西亞、美國、俄羅斯、西班牙成功舉辦了十二屆。為進一步擴大世界中醫藥大會的學術影響力,世界中聯于2015年6月在中國揚州召開了首屆世界中醫藥大會夏季峰會暨‘一帶一路’中醫藥發展國際研討會,來自全球十余個國家和地區的1300余名代表參會。我會將于2016年6月1日-3日在中國隨州召開世界中醫藥大會第二屆夏季峰會暨國際中醫藥界祭拜炎帝大典。
大會將邀請來自世界各地的中醫藥相關專家、學者在大會上交流中醫藥理論研究、臨床經驗、科研成果以及新技術、新療法。大會同期還將召開世界中聯第三屆第八次理事會和第七次監事會會議、第九屆中醫藥服務貿易展覽會,世界中聯疽證專業委員會、中醫藥國際化品牌研究專業委員會成立大會暨第一屆學術年會和世界中聯沉香國際聯盟成立大會。同時,世界中聯內科專業委員會、中醫藥文化、腎病、體質研究、疼痛康復等專業委員會將于會議期間召開換屆和學術年會。真誠歡迎中醫藥界的各位專家同道參加此次盛會。現就大會有關事項通知如下:
一、會議地點:湖北省隨州市
二、會議主題:傳承文化,創新發展
三、大會組織結構
主辦:世界中醫藥學會聯合會;支持:國家中醫藥管理局、隨州市人民政府;承辦:健民藥業集團股份有限公司;協辦:世界中聯中醫藥文化專業委員會、腎病專業委員會、內科專業委員會、體質研究專業委員會、疼痛康復專業委員會、疽證專業委員會籌委會、中醫藥國際化品牌研究專業委員會籌委會、沉香國際聯盟籌委會等。
四、會議主要議題、征文內容
1.中醫藥臨床實踐進展與創新、臨床療效評價研究、名老中醫臨證經驗總結、中醫藥特色診療推廣與創新等;
2.中醫藥基礎理論研究、中醫內科學發展研究;
3.中醫外科學、瘡瘍學發展研究;
4.中醫外治方法研究;灸法、熱敏灸、針刺、推拿研究實踐;
5.中藥研究:中藥方劑學、臨床配伍研究、中藥應用及研究等;
6.中醫藥品牌建設推廣、國際標準化、信息化研究;
7.中醫藥文化傳承與發展研究等。
大會特刊:為了珍藏這一重要活動,將制作《世界中醫藥大會第二屆夏季峰會特刊》,收錄具備一定資質的機構和個人的相關宣傳資料。本次大會特刊將贈與參會人員及我會65個國家的248個會員團體、各國駐華使館、我國駐外使館及有關國際組織和相關機構收藏。歡迎報名申請,如有意向請發郵件至大會郵箱或直接聯系大會會務組,費用另行通知。
五、參會人員:相關國家、當地省市政府官員,各國中醫藥、傳統醫藥、中西醫結合、現代醫藥及相關領域從事醫療、教育、科研、管理、生產、貿易的專家學者和企業領導,世界中聯各國會員,各專業委員會成員。
六、會議安排
1.6月1日:全天報到(*報到時,在校研究生需出具學生證件),晚8點舉行各專業委員會成立和換屆大會預備會。
2.6月2日上午:大會開幕式;6月2日下午—3日上午:各專業委員會分會場學術會議;6月2日晚:舉行各分會場歡迎晚宴。
3.6月3日下午:會議結束
七、重要日期
2016年5月22日大會幻燈片(PPT)提交截止。
2016年5月29日網上報名交費截止。
大會網上報名入口:請登錄會議網站http://wccmss.medmeeting.org/2884?lang=cn在線填寫注冊并進行網上交費。交費方式:會議只接受在線支付和現場支付。
八、住宿酒店:神農大酒店、碧桂園鳳凰酒店、隨州賓館、曾都賓館、炎帝大酒店(備用)。
(注:尊敬的各位參會專家,酒店房間目前只接受網上注冊預訂,若專家單獨預定將不再享受優惠房價,住宿可能根據酒店實際有所調整,具體請以前臺交費入住時為準。)
九、會議地點:炎帝神農故里湖北省隨州市神農大酒店(主會場、理事會、文化、腎病、疽證、中醫藥國際化品牌建設、滿藥、沉香聯盟)及碧桂園鳳凰酒店(內科、疼痛康復、體質研究)。
大會會務組將在6月1日-3日會議期間,在隨州火車站、孝感北高鐵站、武漢機場、武漢高鐵站等站與酒店之間提供接送站服務,有需要接送專家請在網上報名時提交接送信息,逾期未提交者,大會將不提供接送服務。
十、大會聯系人信息:(一)學術部聯系人:鄒建華、關濤、焦云洞、李昕雪、劉香玉、宋曉斌;電話:010-58650042/0043,010-58650242,傳真:010-58650043;電子郵箱:wccm-ss@vip.163.com。(二)國際聯絡部聯系人:王晶、稅毅強、潘昡、楊柳;電話:010-58650240/0058/0243;電子郵箱:tcm_forum@vip.163.com。
Correlation Analysis between Quality of Gentiana macrophylla Pall.and Climatic Factors
Li Jinhua1,Zeng Rui2,Li Wentao1,Huang Linfang1
(1InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing100193,China; 2SouthwestUniversityforNationalities,CollegeofPharmacy,Chengdu610041,China)
Objective:To investigate the effects of ecological factors on the chemical constituents in the rhizome of Gentiana macrophylla Pall and provide the basis for nurture and cultivation of G.macrophylla Pall.Methods:A rapid ultra-high performance liquid chromatography(UPLC)method was developed for determination of four bioactive compounds including gentiopicrin,loganic acid,swertiamarin and sweroside in 20 batches of G.macrophylla Pall from Shaanxi,Gansu,Ningxia provinces.Parallel to this,climatic factors were collected,and the SPSS software was applied to analyze the effective components by the one-way analysis of variance,and the correlation analysis between the content and climatic factors was also conducted by principal component analysis(PCA).Finally,Pearson correlation analysis was performed to analyze effects of climatic factors on the chemical compositions.Results:The result showed the total content of gentiopicroside and loganic acid in 20 batches could reach or even higher than pharmacopoeia standard higher,and the content of samples from Feng county,Shaanxi was higher than other samples; Significant positive correlation exist between gentiopicroside and temperature,pressure,and significant negative correlation exist between gentiopicroside and wind speed; The content of loganic acid was positively related to precipitation,and negatively related to wind speed; The content of swertiamarin was positively related to wind speed,and negatively related to precipitation and temperature; There are not significant correlation exist between sweroside and climatic factors.Conclusion:The quality of G.macrophylla Pall from Shaanxi is better compared to Gansu and Ningxia,especially Feng county,Shaanxi.Climatic factors,such as temperature,pressure and precipitation have close relationship with the content of effective components.The content of effective components was positively related to temperature,pressure and precipitation.The results have critical meaning for the quality improvement,appropriate ecological division,and industrialized development promotion of G.macrophylla Pall.
Gentiana macrophylla Pall.;Chemical composition;Climatic factor;Quality evaluation
國家自然科學基金委面上項目——西洋參自然基金(編號:81274013):西洋參不同產地品質相關“地理特異基因群”的發掘,負責人:黃林芳;國家自然科學基金委面上項目——肉蓯蓉自然基金(編號:81473315):地理格局及生態驅動揭示肉蓯蓉品質生態型機理,負責人:黃林芳;國家自然科學基金委重點項目(編號:81130069):道地藥材形成的生物學實質,負責人:陳士林;四川省科技廳產業鏈項目(編號:2014SZ0131),負責人:曾銳;四川省科技廳基礎研究項目(編號:2015JY0009),負責人:曾銳
黃林芳,研究員,碩士生導師,主要研究方向:中藥資源與質量評價研究
R284.1
A
10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.011