新型實驗大鼠尾靜脈穿刺用途四聯固定器的設計及其效用評價

鮑禮智，郭志福，沈 明，李 然，陳 挺，余云華，趙仙先，鄭 興

(第二軍醫大學附屬上海長海醫院心血管內科，上海 200433)

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技術方法

新型實驗大鼠尾靜脈穿刺用途四聯固定器的設計及其效用評價

鮑禮智，郭志福，沈 明，李 然，陳 挺，余云華，趙仙先，鄭 興

(第二軍醫大學附屬上海長海醫院心血管內科，上海 200433)

目的改進清醒大鼠固定技術，提高成組實驗大鼠尾靜脈穿刺效率。方法采用聚苯乙烯、聚氯乙烯材料自制四聯大鼠固定器。40只成年雄性SD大鼠(262±15 g)隨機分成A、B兩組，每組20只，A組使用自制四聯固定器，B組使用市售有機玻璃大鼠固定器。在清醒狀態下由單人操作行尾靜脈穿刺并注射生理鹽水200 μL，完成大鼠固定、尾靜脈水浴加溫、穿刺注射、壓迫止血的全過程。觀察并記錄穿刺時間、總操作時間、大鼠躁動次數等指標。結果A組一次穿刺成功率80%，穿刺時間(9.25±3.70)s，總操作時間(47.05±4.65)s，大鼠躁動次數(1.4±0.8)次；B組一次穿刺成功率85%，穿刺時間(9.95±4.38)s，總操作時間(122.45±7.71)s，大鼠躁動次數(2.5±1.2)次。結論自制四聯大鼠固定器結構簡單，使用方便，明顯縮短尾靜脈穿刺點操作時間，提高了大鼠配合度及穿刺操作效率，是一種安全有效的設計。

大鼠；尾靜脈穿刺；固定裝置；方法

在大鼠實驗中，尾靜脈穿刺采血或注射是常用的方法，具有損傷小、應激反應少、短期內可多次重復等優勢。為了減少對實驗數據的影響和方便實驗人員的操作，一般需要保持大鼠的清醒狀態并將其固定良好，將鼠尾引出后進行穿刺操作。目前市場上的大鼠固定器大多是有機玻璃或不銹鋼材質制成，單體結構，固定位點較多，每次實驗都要重復同樣的固定操作，增加了操作人員的勞動強度，也浪費了實驗時間。筆者根據大鼠自身習性，設計了一種簡單易操作的新型四聯固定裝置，通過應用這種裝置進行尾靜脈穿刺操作，可以滿足成組大鼠實驗中快速、批量、安全、妥當的尾靜脈穿刺要求，使操作步驟更加流暢。

1 材料和方法

1.1 大鼠固定裝置的設計

注：1：固定盒；2：納鼠筒；3：遮光蓋；4：加溫瓶；5：鼠尾引出槽；6：固定件；7：卡箍；8：EP管凹槽。

本實驗所涉及的大鼠固定裝置，由固定盒、四個周徑可調式納鼠筒、固定件和加溫瓶組成，固定盒采用聚丙乙烯泡沫材料，為上端開口的中空長方體結構(附帶遮光作用的蓋子)；納鼠筒為后端開口的中空結構，前段呈圓錐狀設有多個圓形通氣孔，后段呈圓柱狀。納鼠筒兩兩上下對齊，后端開口朝向一致地設置于固定盒內部，納鼠筒后端與固定盒側壁相抵、前端通過固定件可拆卸地固定在固定盒內部。固定盒的側壁、對應成對納鼠筒后端開口的中間位置設有鼠尾引出槽，僅將鼠尾暴露在固定盒外供實驗者操作，既保證了安全，又排除了干擾，提高了穿刺效率。加溫瓶設置于固定盒開有鼠尾引出槽的側壁的外側。固定盒開設鼠尾引出槽的側壁上沿設置有若干凹槽，可以用于放置1～2 mL體積的注射藥物容器，例如EP管。納鼠筒外側套有卡箍、通過卡箍的縮放調節納鼠筒的大小。固定件為兩根通過螺紋連接的內套管和外套管，內套管一端固定在納鼠筒的前端，外套管通過旋轉伸縮與固定盒側壁相抵。固定件還可以采用簡單的合適大小的聚苯乙烯材料方塊或壓縮彈簧(圖1)。

1.2 大鼠尾靜脈穿刺注射方法

1.2.1 實驗對象及分組

10～12周SPF級雄性成年SD大鼠40只，體重260±15 g，均購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司【SCXK(滬)2013-0016】。所有操作均在第二軍醫大學實驗動物中心小動物屏障實驗室進行【SYXK(滬)2012-0003】，并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。適應性飼養1周后，隨機分成A、B兩組，每組20只，A組使用上述自制四聯固定器，B組使用市售有機玻璃大鼠固定器(編號YXGDJ，購自上海元象醫療器械有限公司)(圖2)。1.2.2 穿刺及尾靜脈注射步驟

在大鼠清醒狀態下實驗人員單人操作，采用29G注射器(舒銳牌一次性使用無菌胰島素注射器，美國BD公司生產)行尾靜脈穿刺并注射生理鹽水200 uL，完成大鼠固定、尾靜脈45℃水浴加溫(30 s)、左側尾靜脈消毒穿刺注射、無菌紗布壓迫止血(60 s)的全過程。

1.2.3 觀察指標

穿刺時間：從針尖刺入皮膚到可見回血的時間；操作時間：從捕捉大鼠到放回鼠籠的時間；大鼠躁動次數：操作過程中大鼠出現尖叫、尾巴發生矢狀面位移大于2 cm或冠狀面軸向扭動大于90度的次數。1.4 統計學處理

圖2 市售單體大鼠固定器Fig.2 Saled single fixture made of organic glass

2 結果

穿刺時間：A組一次穿刺成功率80%，穿刺時間(9.25±3.70)s，總操作時間(47.05±4.65)s，大鼠躁動次數(1.4±0.8)次；B組一次穿刺成功率85%，穿刺時間(9.95±4.38)s，總操作時間(122.45±7.71)s，大鼠躁動次數(2.5±1.2)次。一次穿刺成功率和穿刺時間兩組間比較無顯著統計學差異(P>0.05)，躁動次數和總操作時間A組明顯低于B組，統計學差異顯著(P<0.01)。

3 討論

大鼠尾靜脈穿刺是動物實驗中靜脈注射給藥和采血的常用方法[1-3]。固定牢靠、配合良好、操作流暢是穿刺順利的基本條件。目前市售及文獻報道[4-7]的大鼠固定器多為單體結構，存在固定節點多、操作步驟繁瑣等不足，普遍重視固定牢靠而忽略實驗者的操作體驗。大鼠尾靜脈主要有3條，分別位于背側和左右兩側[8-9]，穿刺前水浴加溫有利于提高穿刺成功率，穿刺后局部壓迫有利于保護血管。本研究自制的四聯固定器，納鼠筒大小及松緊度通過卡箍來調節，采用圓形設計便于穿刺時根據選取的靜脈位置旋轉微調，避免操作中鼠尾擰扭，使大鼠的體位更舒適，更配合穿刺操作。四聯結構有利于集中進行鼠尾加溫、靜脈穿刺，穿刺結束可用無菌紗布覆蓋穿刺部位并卡壓在鼠尾引出槽中，起到壓迫止血、防止藥物回滲等作用，極大地縮短了操作時間，簡化了操作流程，同時利用大鼠群居優勢和喜暗特性，采用四聯結構和遮光設計，進一步提升了大鼠的配合度,從而更大程度減少固定及穿刺操作帶來的應激反應[10]。本實驗以尾靜脈注射為效用評價對象，同樣用于尾靜脈穿刺采血亦十分便捷，有文獻報道單次最多可采集到1.5 mL血液[3]。

總之，通過對總操作時間及大鼠配合度的比較，證實了自制尾靜脈穿刺用途四聯固定器的優化作用，有利于降低穿刺注射的操作強度，提高效率，在動物實驗操作中有較好的應用價值。

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A four combined holder for tail vein puncture in conscious rats: design, construction and feasibility testing

BAO Li-zhi, GUO Zhi-fu, SHEN Ming, LI Ran, CHEN Ting, YU Yun-hua, ZHAO Xian-xian, ZHENG Xing.

(Department of Cardiology, Changhai Hospital, Shanghai 200433,China)

Objective To improve fixation methods and tail vein puncture efficiency in conscious rats group． Methods A new four combined holder was designed and made of materials of polystyrene and Polyvinyl chloride.SD rats were randomly divided into A group and B group，twenty rats in each group．Rats in group A fixed by a self-made four combined holder,and rats in group B fixed by common fixture made of organic glass which was commercially available．Then the tail vein injection experiment was conducted respectively by one people． Results It took (9.25±3.70) seconds in group A and(9.95±4.38)seconds in group B to finish the experiment from puncture to see blood return in syringe，and took(47.05±4.65)seconds in group A and(122.45±7.71)seconds in group B to finish the experiment from capture to finish the injection. Futhermore,it was observed(1.4±0.8)times in group A and(2.5±1.2)times in group B with agitation. Conclusions The new four combined rat holder has simple structure, being easy to use, which could significantly shorten the tail vein puncture time and improve the efficiency of the cooperation degree of rats and puncture operation.

Rat；Tail vein puncture；Fixtures；Method

國家自然科學基金(81470517)。

鮑禮智(1980-)，男，博士生，研究方向：分子心臟病學研究。

郭志福(1978-)，男，副教授，研究方向：心血管活性多肽研究，E-mail： guozhifu@126.com；鄭興(1957-)，男，教授，研究方向：分子心臟病學研究，E-mail： zhengxing57530@163.com。

R-332

A

1671-7856(2016)11-0077-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2016.11.014

2016-07-10