血必凈注射液輔助治療對(duì)膿毒癥患者病情及微小高遷移率族蛋白B1、微小RNA-223表達(dá)的影響

劉紅新，孟 艦，武小娟，魏會(huì)會(huì)，劉 娜，劉 艷

膿毒癥是一種因感染導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征的常見危急重癥，多由嚴(yán)重?zé)齻⑿菘恕⒏腥尽⑼饪剖中g(shù)等引起，具有病情變化快、預(yù)后差等特點(diǎn)[1]。膿毒癥機(jī)制復(fù)雜，重癥者可致凝血功能障礙、多器官功能障礙、循環(huán)障礙等，若未及時(shí)治療可造成患者死亡，調(diào)查顯示膿毒癥發(fā)病率逐年上升，病死率為30%～50%[2]。臨床治療膿毒癥多以“病因治療”為原則，控制炎癥反應(yīng)、保護(hù)器官功能是救治關(guān)鍵，但有研究顯示，僅給予上述對(duì)癥支持、抗感染治療較難獲得理想效果[3]。病理狀態(tài)下細(xì)菌易位進(jìn)入血液大量繁殖是膿毒癥發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)，后可進(jìn)一步激活全身炎癥反應(yīng)[4]。微小RNA-223(miR-223)、高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是體內(nèi)調(diào)控炎癥反應(yīng)激活的重要途徑，miR-223能靶向抑制核因子κB抑制因子(IκB)并削弱其對(duì)核因子κB(NF-κB)的抑制作用，進(jìn)而活化NF-κB、啟動(dòng)HMGB1表達(dá)并介導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)[5]。血必凈注射液是近年研制成功的具有抗菌、抗毒素、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞作用的中藥注射液，有利于膿毒癥的病情控制[6]。本研究旨在分析血必凈注射液輔助治療對(duì)膿毒癥患者病情轉(zhuǎn)歸及外周血HMGB1、miR-223表達(dá)的影響，旨在明確其具體作用機(jī)制，為臨床治療提供有力依據(jù)。

1 資料與方法

1.1納入及排除標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：符合膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；預(yù)計(jì)生存期>7 d；急性生理學(xué)和慢性健康狀況評(píng)分系統(tǒng)Ⅱ(acute physiology and chronic health condition score system Ⅱ score, APACHEⅡ)評(píng)分>12分；年齡30～70歲，性別不限；無藥物過敏史；臨床資料完整者。②排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤、急性腦卒中、自身免疫性疾病及嚴(yán)重軀體疾病者；妊娠及哺乳期婦女；有抗感染治療史者；有精神病史者；臨床資料欠缺者。

1.2臨床資料 選取我院2019年1—10月收治的符合上述納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的膿毒癥68例。男39例，女29例；年齡32～64(44.23±6.05)歲；基礎(chǔ)疾病：糖尿病17例，高血壓病32例；病程12～48(30.4±5.2)h；病因：肺部感染43例，腹腔感染12例，燒傷13例。按照治療方法不同分為觀察組和對(duì)照組，每組34例。2組性別、年齡、基礎(chǔ)疾病等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 2組膿毒癥患者一般資料比較

1.3治療方法 對(duì)照組給予常規(guī)治療：積極控制原發(fā)病、抗感染、維持水電解質(zhì)平衡、營(yíng)養(yǎng)支持，并根據(jù)病情給予護(hù)肝、營(yíng)養(yǎng)心肌等[7]。觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合血必凈注射液(天津紅日藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z20040033)100 ml加入0.9%氯化鈉注射液100 ml靜脈滴注，2/d。2組均治療5 d。

1.4觀察指標(biāo)及方法

1.4.1病情指標(biāo)檢測(cè)：分別于治療前及治療后1 d 比較2組APACHEⅡ評(píng)分、全身感染相關(guān)器官功能衰竭評(píng)分(sepsis-related organ fai lureassessment，SOFA)。APACHEⅡ評(píng)分包括急性生理學(xué)評(píng)分、年齡評(píng)分、慢性健康狀況3個(gè)維度，滿分71分，得分越高表示病情越重[8]。SOFA評(píng)分包括呼吸、凝血、肝臟、循環(huán)、神經(jīng)、腎臟6個(gè)維度，滿分24分，得分越高表示病情越重[9]。

1.4.2炎性因子、HMGB1和miR-223檢測(cè)：分別于治療前及治療后1 d采集2組空腹靜脈血20 ml，2000 r/min、離心5 min取血清待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)、內(nèi)毒素含量及HMGB1水平。采用mirVanamiRNA試劑盒提取血細(xì)胞RNA并純化，使用PrimeScript RT reagent Kit行逆轉(zhuǎn)錄并測(cè)定miR-223表達(dá)水平。上述試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.4.3不良反應(yīng)：觀察并記錄2組治療期間不良反應(yīng)發(fā)生情況。

2 結(jié)果

2.1病情指標(biāo)比較 2組治療前APACHEⅡ、SOFA評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與治療前比較，2組治療后APACHEⅡ、SOFA評(píng)分均降低，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.01)。見表2。

表2 2組膿毒癥患者治療前后APACHEⅡ和SOFA評(píng)分比較分)

2.2血清炎性因子比較 2組治療前CRP、PCT、內(nèi)毒素水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與治療前比較，2組治療后CRP、PCT、內(nèi)毒素水平均降低，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.01)。見表3。

表3 2組膿毒癥患者治療前后血清炎性因子水平比較

2.3血清HMGB1及miR-223表達(dá)比較 2組治療前血清HMGB1及miR-223表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與治療前比較，2組治療后血清HMGB1及miR-223表達(dá)均降低，且觀察組低于對(duì)照組(P<0.01)。見表4。

表4 2組膿毒癥患者治療前后血清HMGB1及miR-223表達(dá)比較

2.4不良反應(yīng)比較 2組治療過程中均未發(fā)生明顯不良反應(yīng)。

3 討論

膿毒癥是由感染所引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征，重癥感染、大面積燒傷、重大外科術(shù)后菌群移位發(fā)生菌血癥是其發(fā)生的基礎(chǔ)[10-12]；多伴有水電解質(zhì)紊亂、彌散性血管內(nèi)凝血等癥狀，隨著病情發(fā)展可危及患者生命健康。血必凈注射液是近年被用于膿毒癥治療的中藥注射液，具有抗菌、抗毒素、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞作用，有利于控制膿毒癥病情，輔助應(yīng)用價(jià)值高[13]。血必凈注射液以血府逐瘀湯為基礎(chǔ)，主要成分包括赤芍、丹參、紅花、當(dāng)歸、川芎，可起到清熱解毒、扶正固本、活血化瘀的作用[14]。現(xiàn)代藥理研究顯示，血必凈注射液不僅能抑制內(nèi)源性炎性因子分泌、減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，還能改善機(jī)體內(nèi)微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，有利于保護(hù)和修復(fù)機(jī)體損傷的器官[15]。黃彩英等[16]報(bào)道，血必靜注射液輔助治療膿毒癥效果顯著。本研究結(jié)果顯示，2組治療后APACHEⅡ、SOFA評(píng)分均降低，且觀察組低于對(duì)照組。提示血必凈注射液輔助治療能顯著改善膿毒癥病情及預(yù)后，與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相符[15-16]。

全身炎癥反應(yīng)的放大激活是膿毒癥病情變化的核心環(huán)節(jié)。CRP是肝細(xì)胞在促炎因子刺激下合成和分泌的急性時(shí)相蛋白，能反映機(jī)體炎癥反應(yīng)程度[17]；PCT是無活性的降鈣素前體，正常情況下極少釋放入血，細(xì)菌感染后能刺激全身多個(gè)實(shí)質(zhì)臟器細(xì)胞分泌PCT[18]；內(nèi)毒素可在細(xì)菌裂解過程中大量釋放，具有極強(qiáng)的促炎活性[19]。本研究結(jié)果顯示，2組治療后CRP、PCT、內(nèi)毒素均降低，且觀察組低于對(duì)照組。提示血必凈注射液輔治能顯著抑制膿毒癥患者炎性因子釋放、有利于減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)程度。

HMGB1具有促炎活性，能激活多種炎性細(xì)胞及促進(jìn)炎性因子釋放[20]。Alpkvist等[21]指出，膿毒癥大鼠miR-223高表達(dá)且能增強(qiáng)NF-κB活性，進(jìn)而激活體內(nèi)炎癥反應(yīng)。馬斌等[22]研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1作為炎癥介質(zhì)與膿毒癥密切相關(guān)，能促進(jìn)炎性細(xì)胞活化，刺激中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌多種炎性因子，加速炎癥反應(yīng)進(jìn)程，參與機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)。還有研究發(fā)現(xiàn)，miR-223/HMGB1在炎癥反應(yīng)激活過程中發(fā)揮重要作用，膿毒癥大鼠miR-223高表達(dá)所致HMGB1表達(dá)增強(qiáng)介導(dǎo)了大鼠體內(nèi)炎性因子的級(jí)聯(lián)釋放[23]。miR-223能靶向抑制IκB并削弱IκB對(duì)NF-κB的抑制作用，進(jìn)而活化NF-κB、啟動(dòng)HMGB1表達(dá)并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[24]。本研究結(jié)果顯示，2組治療后血清HMGB1及miR-223表達(dá)均降低，且觀察組低于對(duì)照組。提示血必凈注射液輔助治療能夠增強(qiáng)膿毒癥患者體內(nèi)miR-223/HMGB1途徑抑制的程度，可能是通過抑制miR-223/HMGB1途徑，減少機(jī)體炎性因子分泌，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)程度來發(fā)揮治療作用的。本研究結(jié)果顯示2組治療期間并未產(chǎn)生明顯不良反應(yīng)，提示血必凈注射液治療膿毒癥安全性好。

綜上所述，血必凈注射液輔治可以有效改善膿毒癥病情、減少機(jī)體炎性因子及炎癥反應(yīng)程度，抑制miR-223/HMGB1途徑可能是其作用機(jī)制。