全自動生化檢驗微量反應檢測技術研究與應用

唐敬強，姚思薇，劉麗梅

(樂昌市中醫院檢驗科，廣東 樂昌 512200)

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全自動生化檢驗微量反應檢測技術研究與應用

唐敬強，姚思薇，劉麗梅

(樂昌市中醫院檢驗科，廣東 樂昌 512200)

目的 在滿足儀器的最大性能基礎上，對全自動生化檢驗微量反應檢測技術的實際應用進行研究探討。方法 通過對最小樣本量、最小試劑量的設置，定標曲線數據對比，質控品回收測定，測定試劑比例改變后的實驗結果。收集樂昌市中醫院檢驗科保存的患者新鮮血清30份，進行比對分析，每份血清分裝兩份按要求保存，且在本實驗檢測線性范圍內。結果 CysC測定參數修改前后實驗結果對比差異無統計學意義(P>0.05)；擬合直線回歸方程及R2值，得到Y=1.008 3X+15.645，R2=0.986，R2>0.950，符合線性評價要求，參數改變前后的測定具有良好的一致性。結論 試劑比例的相近改變后，實驗結果的準確性與原來的對比不存在差異，實驗結果準確可靠，仍然能符合臨床需求。

全自動生化分析儀； 生化檢驗； 微量； 反應檢測

隨著醫療技術的不斷進步，臨床檢驗中全自動生化檢驗得到了廣泛應用，全自動生化分析儀的主要原理是根據光電比色來對受檢標本中某種特定的化學成分進行測量，具有準確性高、速度快、節省試劑等優勢。本研究在滿足儀器最大性能的前提下，選取30份新鮮血清，通過對最小樣本量、最小試劑量的設置，對全自動生化檢驗微量反應檢測技術的實際應用進行研究探討。

1 材料

1.1 儀器

全自動生化分析儀由邁瑞公司提供，型號為BS-420，性能介紹：BS-420恒速400/H，樣本量2～45 μL，0.1 μL遞增；第一試劑最小吸液量150～350 μL，1 μL遞增；第二、三、四試劑最小吸液量均為20～350 μL，1 μL遞增；反應杯5 mm×5 mm×30 mm(長×寬×高),光徑5 mm，反應杯容量750 μL；光學系統為靜態光纖傳光系統，全息凹面平場光柵后分光；分析原理為比色法和透射比濁法。分析方法：終點法，固定時間法，動力學法，支持雙試劑、雙波長。

1.2 實驗試劑

廣州科方生物試劑有限公司生產的胱氨酸蛋白酶抑制劑(CysC)，試劑盒R1試劑為40 mL、R2試劑10 mL(試劑盒要求R1試劑設置為200 μL，R2試劑50 μL)。生產批號：150807，有效期1年。

1.3 實驗標本

收集樂昌市中醫院檢驗科保存的患者新鮮血清30份，具有高、中、低濃度，且在本實驗檢測線性范圍內，每份血清分裝兩份按要求保存。

2 方法與結果

2.1 檢測原理與檢測方法

本院檢驗科于2015年3月起采用邁瑞BS-420全自動生化儀進行檢測，以測定CysC為例，通過透射比濁法檢測。把R1試劑用量控制在滿足空白R0點吸光度最小反應體積160 μL，調整R2試劑為30 μL 與樣本為2 μL的檢驗項目，參數設計修改后進行實驗設計論證。采用膠乳增強比濁法，在反應體系中R1試劑為甘氨緩沖液，R2試劑為大小均一的聚苯乙烯膠乳顆粒懸液，表面包被抗人CysC特異性抗體，可與樣品中CysC結合產生凝集，并與CysC的含量成正比，在600 nm波長下測定吸光度的變化并計算其含量。試劑盒內試劑不匹配現象多見于試劑不足量或者儀器本來防止被稀釋而多吸一點，R1、R2試劑不匹配現象造成了嚴重的試劑浪費[1]。通過改變R1、R2試劑比例，參照NCCLS-EPA文件[2]，在保證質量的前提下[3]，修改檢驗參數前后用標準品校準儀器，每天測試30份標本2次，連續5 d，在2015年3—6月收集共300個實驗數據。

2.2 質控品回收率分析

本實驗原來的試劑比例R1:R2：樣本為200:50:3，更改后的試劑比例為160:30:2，是微量檢測范疇,比例與原來相近似，試劑R0點吸光度無太大的區別，因此定標曲線不存在太大差異。根據實驗要求，修改實驗參數后利用多點非線性規則進行定標，用多濃度的質控品進行實驗質控回收，每個濃度進行20次的測試，以求出其檢出均值，回收率在96%～106%，證明該方法有效可行。實驗結果見表1。

表1 質控品回收率情況 n=20

2.3 配對t檢驗

將收集到的實驗數據進行統計學處理，t=1.812，自由度為n-1=29,查t值表t0.05(29)=2.045，P>0.05，表明CysC測定參數修改前后實驗結果對比差異無統計學意義。

2.4 相關性分析

以CysC改變前的均值為X軸，改變后的為Y軸，將所有實驗結果用EXCEL2003軟件作散點圖，擬合直線回歸方程及R2值，得到Y=1.008 3X+15.645，R2=0.986，R2>0.950，符合線性評價要求[4-5]，參數改變前后的測定具有良好的一致性。

2.5 臨床可接受評價

參數改變前后的實驗數據偏倚均在醫學決定水平范圍內，證明預期偏倚較小，其修改參數后的實驗檢測性能仍符合臨床使用要求。

2.6 自動化生化檢驗微量反應經濟效益分析

以測定CysC為例，原來說明書設定樣本為3 μL，R1為200 μL，R2為50 μL，R1/R2=4/1。試劑盒理論上R1試劑為40 mL、R2試劑10 mL(試劑盒要求R1試劑設置為200 μL，R2試劑50 μL)，實際上R2試劑經常不足10 mL(多數在8.5 mL左右)，存在R1與R2試劑不匹配的情況，按原來試劑盒上的要求只有160人份左右。R2試劑不足就造成了R1試劑的浪費，此時每人份的試劑成本為20.77元。如果對檢驗項目參數設計進行修改，把R1試劑用量控制在滿足空白R0點吸光度最小反應體積160 μL，調整R2試劑為30 μL與樣本為2 μL的實驗設計，可達到250人份左右，試劑成本降為12.625元。以每天35人次，全年12 775人工作量進行評估，節約試劑成本104 052.00元，經濟效益相當可觀[6]。

3 討論

全自動生化檢驗微量反應檢測技術是一項具有廣泛應用前景的新技術，當前大部分醫療衛生單位的檢驗人員都是按照試劑盒內的說明書設定檢驗項目的實驗參數，與全自動生化檢驗儀器的最低檢測限仍有很大的調整空間。然而目前很多生化系列儀器的性能非常優秀，因此按照試劑盒上的參數進行設置，會形成不必要的試劑浪費?？s小實驗參數進行測試，對本研究的檢測性能重新評估就尤為重要。通過對最小樣本量、最小試劑量的設置，使實驗的線性不受太大影響，仍能滿足日常檢驗需求是今后生化檢驗的發展方向，可有效節約檢驗資源，提高經濟效益。

但在實際應用過程中?？砂l現，在雙試劑測試項目中當R2試劑用完后R1試劑仍有剩余的情況，而且這種情況隨著檢驗次數增加而顯著增加，這成為檢驗科急需解決的問題。在雙試劑測定過程中，R1試劑作為緩沖劑，其單次使用量較大，而R2試劑單次使用量小。R1、R2試劑混合過程中，物質構成比不變，反應成分不變，改變的是反應物濃度，不同反應物濃度并不會影響反應實質，只是影響物質反應時的檢測線性范圍，因此，在樣品使用量不變的情況下，適當增加物質反應濃度時，反應線性范圍則適當增加，而減低物質濃度時，可導致線性反應范圍變窄。若適當減少試劑用量，并不會影響檢測結果，只是使得線性范圍變窄，斜率輕微下降，靈敏度稍有降低，但對線性范圍的影響非常小。因此可按照上述方法調整原來試劑用量，從而減少R1試劑浪費情況。使用邁瑞公司BS-420全自動生化分析儀進行實驗時，修改檢驗項目參數設計，保持與原有相近的試劑比例，使實驗的線性不受太大影響，仍能較大程度地滿足日常檢驗需求。

此外，本研究所用的儀器保養完好，試劑性能穩定。本科經過長時間的工作實踐，對儀器的各項技術指標進行了多次的檢測，參數的設計與修改均符合儀器的性能與檢測范圍，實驗結果與之前對比不存在明顯差異，檢測結果仍能準確可靠。

[1] 羅萬義，王藝霓.改變不配套試劑比在全自動分析儀測定中的一致性分析[J].檢驗醫學與臨床，2013，10(7)：868-869.

[2] National Committee Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient samplesapproved guideline.EP9-A[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，1995.

[3] 葉應嫵，王毓三.中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程[M].2版.南京：東南大學出版社，1997：329-335.

[4] 馬斌榮.醫學統計學[M].4版.北京：人民衛生出版社，2005：36-38.

[5] 楊有業，張秀明.臨床檢驗方法學評價[M].北京：人民衛生出版社，2008：46-48.

[6] 孫志強.AUTOLAB-18全自動生化分析儀淀粉酶測定節省試劑的方法[J].現代檢驗醫學雜志，2011，26(4)：164.

(責任編輯：鐘榮梅)

2015-11-05

東昌市衛生局科技計劃項目(韶衛計局Y15136號)

R446.11+2

A

1009-8194(2016)03-0008-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.03.003