P53、PCNA在皮膚腫瘤中的表達及其相關性研究

王文鑫　朱海軍

【摘要】 目的 探討P53、增殖細胞核抗原（PCNA）與皮膚基底上皮瘤及皮膚鱗狀細胞癌細胞分化、異常增殖及腫瘤發生發展的相關性。方法 114例皮膚基底細胞上皮瘤和鱗狀細胞癌組織標本， 用免疫組化的方法觀察不同病理分級的皮膚基底上皮瘤及皮膚鱗狀細胞癌中P53和PCNA的表達， 分析P53、PCNA在皮膚基底上皮瘤及皮膚鱗狀細胞癌Broders不同病理分級間的關系以及P53、PCNA的相關性。結果 ①皮膚基底細胞瘤中， 各型P53、PCNA蛋白的表達有顯著差異， 其中硬斑病樣型表達明顯高于實體型、色素型、淺表型以及腺樣型（P<0.05）；②P53、PCNA在皮膚鱗狀細胞癌組織Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級間比較， 差異有統計學意義（P<0.05）；③在皮膚基底細胞上皮瘤與皮膚鱗狀細胞癌中， P53和PCNA表達均呈正相關。結論 P53、PCNA的高表達在皮膚基底上皮瘤及皮膚鱗狀細胞癌發生與發展中均起到重要作用。

【關鍵詞】 皮膚基底上皮瘤；皮膚鱗狀細胞癌；P53；增殖細胞核抗原

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.29.024

P53基因是一個抑癌基因， 參與細胞周期、細胞生長、細胞凋亡、DNA損傷和修復的調控， 在基因調控網絡中具有中樞地位[1]。PCNA又稱為周期蛋白， 是伴隨細胞增殖而表達的一種核內蛋白， 在細胞核內陽性表達的高低與細胞的增殖活性密切相關[2]。內蒙古地區紫外線較強， 農牧民長期戶外工作， 皮膚基底細胞上皮瘤及鱗狀細胞癌發病率高[3]。本文用免疫組化的方法觀察不同病理分級的兩種皮膚腫瘤中P53和PCNA的表達， 以探討P53、PCNA與皮膚腫瘤細胞分化、異常增殖及腫瘤發生發展的相關性， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2005年1月～2014年12月本院皮膚科和病理科接受手術切除病例的皮膚基底細胞上皮瘤和鱗狀細胞癌組織標本， 共150例。經重新切片后蘇木精-伊紅染色， 請病理科醫師共同閱片后篩選出病歷資料完整、病理診斷明確的114例， 其中基底細胞上皮癌72例， 鱗狀細胞癌42例。患者中， 男59例， 女55例；年齡53～78歲， 平均年齡（65.21±

6.78）歲， 病程6個月～4年， 平均病程（1.34±0.22）年。暴露部位（頭面部及雙手）87例， 非暴露部位（軀干、四肢及臀部、外陰）27例。按Broders病理分級法將鱗狀細胞癌分為：Ⅰ級

21例， Ⅱ級17例， Ⅲ級4例?；准毎掀ち觯簩嶓w型34例， 色素型15例， 淺表型13例， 腺樣型8例， 硬斑病樣型2例。

1. 2 方法

1. 2. 1 主要試劑 P53、PCNA及S-P免疫組化試劑盒均購于福建邁新生物技術開發公司。

1. 2. 2 試驗方法 采用免疫組化SP法， 所有實驗步驟均符合要求， 且均嚴格按照試劑盒說明書的要求嚴格操作， 用磷酸緩沖鹽溶液（PBS液）代替一抗作為陰性對照， 用購買的陽性切片作為陽性對照。

1. 2. 3 結果判斷標準 由一位病理科醫師及兩位皮膚科病理醫師共同判定。參照Ozdemir的評分標準：①P53與PCNA按照顯示顏色的強弱， 并以多數細胞的顏色顯示結果為準：無色標記為0分， 淺黃色標記為1分， 深黃色標記為2分， 棕黃色標記為3分。②低倍鏡下， 選擇細胞分布比較均勻的視野， 高倍鏡下， 用病理彩色圖像分析系統進行圖像分析， 每張切片在×40高倍鏡下隨機選擇5個視野， 每個視野中計數100個細胞， 計數陽性細胞數所占的百分比均值：<25%為1分， 25%～50%為2分， >50%為3分。③每張切片著色強度得分與陽性細胞百分比得分相乘為其最后得分：0～1分為（-）， 2～3分為（﹢）， 4～6分為（++）， ≥7分為（+++）。

1. 3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件處理數據。計數資料以率（%）表示， 采用 χ2 檢驗。兩變量對比使用Spearman等級相關進行研究分析。P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2. 1 皮膚基底細胞瘤中P53、PCNA蛋白的表達 P53蛋白陽性表達為胞核內的顆粒顯示為淡黃或棕褐顏色。實驗結果表明， 在皮膚基底細胞瘤中各型表達陽性率比較差異有統計學意義（P<0.05）。其中硬斑病樣型表達明顯高于實體型、色素型、淺表型以及腺樣型（χ2=19.903， P<0.05）， 表明腫瘤浸潤性越強， P53表達越強。PCNA蛋白陽性表達為胞核內出現淡黃至棕褐色顆粒著色。結果顯示， 在皮膚基底細胞瘤中各型表達陽性率具有顯著差異， 其中硬斑病樣型表達明顯高于實體型、色素型、淺表型以及腺樣型（χ2=18.367， P<0.05）， 表明腫瘤浸潤性越強， PCNA表達越強。

2. 2 皮膚鱗狀細胞癌中P53、PCNA蛋白的表達 P53蛋白陽性表達為胞核內出現淡黃至棕褐色顆粒著色。結果顯示， P53在皮膚鱗狀細胞癌組織Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級間比較， 差異有統計學意義（χ2=24.176， P<0.05）， 腫瘤分化越低， P53表達越強。PCNA蛋白陽性表達為胞核內出現淡黃至棕褐色顆粒著色。結果顯示， PCNA在皮膚鱗狀細胞癌組織Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級間比較， 差異有統計學意義（χ2=25.987， P<0.05）， 腫瘤分化越低， PCNA表達越強。

2. 3 P53和PCNA表達的相關性 在皮膚基底細胞上皮瘤中， P53陽性且PCNA陽性者11例， P53陽性且PCNA陰性者20例， P53陰性且PCNA陽性者28例， P53陰性且PCNA陰性者13例， 提示P53和PCNA表達呈正相關（r=0.326， P<0.05）。在皮膚鱗狀細胞癌中， P53陽性且PCNA陽性者32例， P53陽性且PCNA陰性者3例， P53陰性且PCNA陽性者2例， P53陰性且PCNA陰性者5例， 提示P53和PCNA表達呈正相關（r=0.597， P<0.05）。

3 討論

近幾年醫學界研究發現， 皮膚惡性腫瘤具有比較復雜的形成因素， 多項研究均證明該疾病與多種癌基因相關， 其形成與發展， 目前發現其與多種癌基因強表達和抑癌基因低表達或失表達有非常密切的聯系。所以， 建立一種有效的預測預后措施非常重要， 有助于提高臨床治療效果與臨床生物學指標， 目前已成為腫瘤研究方法的一個新熱點。P53基因是一個抑癌基因， 若P53基因突變， 則能夠促使細胞生長和分化的調節失控， 進而導致細胞癌變。P53蛋白表達與P53基因存在相關性， 因此一般認為組織化學檢測的P53蛋白代表突變后的產物[4， 5]。PCNA是DNA復制時所必需的調節蛋白， 它的陽性程度可直接反應出細胞增殖活躍程度， 它的這一生理功能被目前正被廣泛應用于惡性腫瘤及一些增生性疾病的研究中。

通過本次研究發現P53、PCNA的陽性表達率在皮膚基底上皮瘤的不同病理類型中是不同的， 侵襲性皮膚基底上皮瘤（硬斑病樣型）中的表達明顯強于非侵襲性皮膚基底上皮瘤（實體型、色素型、淺表型、腺樣型）。P53、PCNA在皮膚鱗狀細胞癌各級中的陽性表達有顯著性差異， 分級越高表達強度也越高。本研究還表明P53上生者PCNA表達顯著增高， 提示P53基因上升與細胞增殖密切相關， 為增進腫瘤進展的一個重要原因。兩者的檢測對評估皮膚腫瘤的惡性程度、指導治療、判斷預后具有重要意義。

綜上所述， P53、PCNA的高表達在皮膚基底上皮瘤及皮膚鱗狀細胞癌發生與發展中均起到重要作用。

參考文獻

[1] Levine AJ， Finlay CA， Hinds PW. P53 is a tumor suppressor gene. Cell， 2004， 116（S2）：S67-S70.

[2] 劉厚君， 林能興， 吳艷， 等. 細胞周期相關蛋白和增殖細胞核抗原蛋白在Bowen病皮損中的表達. 中國皮膚性病學雜志， 2007， 21（6）：327-329.

[3] 王文鑫， 王曉彥， 張瑞. 皮膚基底細胞癌55例臨床與病理分析. 中國皮膚性病學雜志， 2009， 23（11）：733-734.

[4] Gorji H， Shahbazi N， Habibollahi P， et al. The glutathione-S-transferase P1 polymorphisms correlates with changes in expression of TP53 tumor suppressor in cutaneous basal cell carcinoma. Journal of Dermatological Science， 2009， 56（3）：208-210.

[5] 方木平， 葉文正， 王珊珊， 等. 皮膚鱗狀細胞癌中PCNA和PTEN的表達與臨床病理特征的關系. 中國美容醫學， 2012， 21（6）：936-938.

[收稿日期：2016-8-19]