蕪菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵團農二師第五中學，新疆 喀什 844200）

蕪菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵團農二師第五中學，新疆 喀什 844200）

對不同來源的蕪菁中提取氯原酸進行討論，提出采用高效液相色譜法進行氯原酸含量的測定。建立Agilent HC-C18色譜柱（4.6×250mm,5-μm）,柱溫30℃，流動相為甲醇70%～0.5%H2PO330%，檢測波長327 nm，流速1.0 mL/min。結果證明，該方法簡便易行、處理方便、重復性好，線性關系良好，且測定數據穩定。本法可作為蕪菁中氯原酸的定量分析方法。

氯原酸；蕪菁；提取；高效液相色譜；含量測定

蕪菁為十字花科，又名大頭菜、蔓青、圓根、臺采、扁蘿卜等。維吾爾等少數民族稱蕪菁為恰瑪古（Qamagur）。蕪菁的肉質形狀有扁圓、圓、圓柱形，皮色有白色、紫紅色，肉色有白色、淡金黃色[1]。蕪菁在新疆南部種植非常廣泛，一年四季都能吃到蕪菁，開春下種，4—5月可食嫩葉和根莖，而主要食用季節為冬季至來年3月，肉質含有大量的VA，VB，VB1，VC及多種糖類、氨基酸、尼克酸、蛋白質、脂肪、纖維素、鐵、鈣、磷等礦物質[1-2]。同時，蕪菁還是維吾爾醫生常用藥物，具有清熱除濕、潤肺解毒、清肝明目、消食下氣、止咳止渴、補腎生精等功能，常用于治療性功能減退等癥[3]，主要含有黃酮類、苯丙素類及氯原酸等化學成分，這些也是氯原酸的主要來源。

氯原酸是由咖啡糅酸與奎尼酸（雞納酸）組成的縮酚酸，異名為咖啡糅酸，化學名稱為3-O-咖啡酰奎尼酸，分子式為C16H18O9，分子量345.30，是植物體在有氧呼吸過程中經莽草酸途徑產生的一種苯丙素類化合物，呈半水狀或微黃色針壯晶體[4]。綠原酸是一種具有廣泛活性和藥理活性的物質，具有抗菌、抗病毒、止血、增高白血球數、降血壓、保肝利膽、降血脂的功效，對急性咽喉炎、皮膚病有顯著療效，有清除自由基和興奮中樞神經系統等藥理作用[5]；對消化系統、血液系統和生殖系統疾病均有療效；對金葡萄球菌、溶血性鍵球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌有抑制作用[6]，因此，氯原酸在制劑上應用越來越廣泛。目前，有關氯原酸生物活性的研究已經深入到食品、保健品、醫藥等多個領域。

氯原酸是一種廣泛存在于中草藥、高等雙子葉植物的化學成分，含量較高的植物有杜仲、向日葵、金銀花、端木、可可樹、咖啡等。另外，水果、蔬菜、大豆、小麥、綠茶等食品中都有氯原酸類物質，盡管氯原酸在植物界廣泛存在，但含量較高的植物并不多見。高純度氯原酸價格昂貴，是目前國際公認的“植物黃金”[7]，因此，氯原酸提取受到國內外學者的普遍關注。所以，進一步研究和優化測定氯原酸含量的方法十分重要。

隨著科學技術的發展，國內外產生了很多測定方法。關于氯原酸的測定主要有紙層析-紫外分光光度法、薄層層析法、薄層掃描法、高效液相色譜法、毛細管電泳法等。其中高效液相色譜法是使用最為廣泛的方法。雖然關于用HPLC法分別或同時測定氯原酸的含量有較多報道，但是用HPLC法來測定蕪菁中氯原酸的含量還沒報道。新疆維吾爾藥食物蕪菁中氯原酸的測定成為食品分析的重要項目之一。為了提高測定效率，節省溶劑，評價和比較藥食物蕪菁中氯原酸的含量，試驗建立HPLC法測定氯原酸含量，用不同提取法比較不同產地蕪菁中氯原酸的含量，為新疆維吾爾藥食物蕪菁的全面分析、鑒定提供試驗依據。該法能快速測定，靈敏度高、選擇性好、方法簡便易行，是測定蕪菁中氯原酸的理想方法。

1 實驗部分

1.1 儀器和藥品

1.1.1 實驗儀器

北京LC981高效液相色譜儀器，包括P981高壓輸液泵、UV981可變波紫外可見分光檢測器、T98柱溫箱，101A-1型干燥箱（上海市實驗儀器總廠），FA2104N型電子天平 （上海民橋精密科學有限公司），FW100型高速粉碎機（北京市永光明區療儀器廠），KQ3200ED型數控超聲波清洗器（昆市超聲儀器有限公司）。

1.1.2 實驗藥品

氯原酸（分析純）對照品由上海晶純試劑有限公司提供，批號7572；甲醇（色譜純）；無水乙醇（分析純）、磷酸（分析純）。

1.1.3 樣品來源

蕪菁原料來源于喀什色滿和伽師縣等地。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液的制備

緊密稱取對照品氯原酸0.005 0 g，用甲醇溶解并定容至25 mL容量瓶中，配制成濃度為200 ug/mL的對照品溶液，備用。

1.2.2 樣品溶液的制備

將新鮮蕪菁切成片，在干燥箱中70℃干燥8 h，在超速粉碎機粉碎后，準確稱取蕪菁粉末2.000 0 g，置25 mL容量瓶中，加乙醇至定容，浸泡48 h，超聲波提取3次，每次15 min，用0.45 ug濾膜過濾，備用。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18色譜柱 （4.6×250 mm，5-μm）；流動相為甲醇-0.5%H2PO330%；柱溫30℃；檢測波長327 nm；流速1.0 mL/min；進樣量20 uL。按上述色譜條件下測定氯原酸，色譜圖見圖1和圖2。

圖1 對照品的色譜圖

圖2 樣品的色譜圖

2 結果與討論

2.1 樣品含量的測定

分別緊密稱取蕪菁樣品的葉、根、莖各2.000 0 g，按“1.2.2”所述方法制備樣品溶液注入高效液相色譜儀,測定氯原酸的峰面積，按外表法計算，測定結果見表1。

從表1可以看出，不同地區蕪菁中氯原酸的含量存在著一定的差異，葉子中所占氯原酸的含量比根莖中的較大，超聲后得到氯原酸效果好，且含量高。

表1 樣品測定結果（mg/g）

3 結論

本實驗以不同地區的蕪菁為原料，用高效液相色譜-紫外可見分光檢測器進行色譜分析，采用外表法測定氯原酸的含量。結果表明，不同地區蕪菁中氯原酸的含量存在著一定的差異，原因可能是由于土壤質量不同而造成的。

葉子中所占氯原酸的含量比根莖中的較大，超聲后得到氯原酸效果好，且含量高。原因是超聲波能擊碎細胞壁，使細胞內組分化，滲透至溶液中，從而達到充分分離，提取率高的目的。本實驗中采用的方法，操作簡單，處理方便，測定迅速，數據準確，結果可靠，適合于測定蕪菁中氯原酸的含量。

[1]謝英彪，顏培增，劉光隆.食物營養與食療寶典[M].北京:人民軍醫出版社，2007.

[2]方韜萬.蕪菁[J].食品與生活，2005(5):46.

[3]馬龍，鄧淑文，屈衛東.新疆蕪菁抗衰老作用的實驗研究[J].新疆醫科大學學報，1998,21(4):62.

[4]尉芹，馬稀漢，景謙平.杜仲葉中氯原酸提取工藝條件研究[J].林產化學與產業，2001，21(4):27～32.

[5]黃紹重.氯原酸的提取及應用[J].應用化工，2006，35(6):467.

[6]任鍵，劉曉蘭.葵花籽仁酶解體系中氯原酸的分離純化技術[J].中國油脂，2007,32(1):59.

[7]劉軍海，任惠蘭.氯原酸提取與純化分離方法研究進展[J].糧食與油脂，2007，(7):42.

1005-2690（2016）06-0116-02

：S631.3

：A

2016-04-25）