替加環素聯合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性研究*

單靖嵐，鄭貴星，鄧穗燕，黃 俊

（1．廣州醫科大學附屬第一醫院，廣東 廣州 520000； 2．廣州醫科大學附屬第三醫院，廣東 廣州 520000；

3．廣州醫科大學基礎醫學院，廣東 廣州 520000）

替加環素聯合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動桿菌的體外抗菌活性研究*

單靖嵐1，鄭貴星1，鄧穗燕2，黃 俊3

（1．廣州醫科大學附屬第一醫院，廣東 廣州 520000； 2．廣州醫科大學附屬第三醫院，廣東 廣州 520000；

3．廣州醫科大學基礎醫學院，廣東 廣州 520000）

目的 探討替加環素（tigecyclin）聯合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌的效果，探索多藥聯合應用對多重耐藥鮑曼不動桿菌的臨床用藥新途徑。方法 收集臨床分離的40株多重耐藥鮑曼不動桿菌，采用微量肉湯稀釋法、棋盤法分別檢測替加環素、亞胺培南單獨及聯合使用的最低抑菌濃度（MIC），計算藥物聯合使用抑菌濃度（FIC）指數，利用FIC指數判定替加環素和亞胺培南聯用時對多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌的效果。結果 替加環素聯合亞胺培南能顯著降低各自的MIC值，其中表現為協同作用的菌株占70．00%，表現為相加作用的菌株占25．00%，發生無關作用的占5．00%，無拮抗作用發生。結論 替加環素聯合亞胺培南可對多重耐藥鮑曼不動桿菌的感染進行治療。

替加環素；亞胺培南；多重耐藥；鮑曼不動桿菌

鮑曼不動桿菌為醫院內獲得性感染的常見病原菌，尤其是免疫缺陷和在重癥監護室（ICU）的患者，而大量使用廣譜抗菌藥物、糖皮質激素、免疫抑制劑及鮑曼不動桿菌有著強大的體外長期生存能力及易繁殖播散等特點是導致這一現象發生的主要原因[1－3]。研究表明，鮑曼不動桿菌感染患者病死率較高[4]，其原因有待探究。大量研究顯示，鮑曼不動桿菌有強大的克隆傳播及獲得耐藥性能力，且多重耐藥、廣泛耐藥及全耐藥鮑曼不動桿菌出現了世界性流行現象[5]。替加環素為新開發的新一類靜脈用抗菌藥物，是半合成四環素類藥物米諾環素的衍生物[6－7]。亞胺培南為碳青霉烯類治療鮑曼不動桿菌的抗菌藥物[8－9]。本研究中用替加環素聯合亞胺培南對抗耐藥鮑曼不動桿菌進行體外抗菌試驗，以期為臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1．1 儀器、材料與試藥

1．1．1 儀器與試藥

Muller－Hinton肉湯（浙江杭州天和微生物試劑有限公司）；血瓊脂平板（江門市凱林貿易有限公司）。VITEK－2型細菌鑒定儀（法國生物梅里埃公司）。注射用替加環素（江蘇豪森藥業股份有限公司，國藥準字H20123394，規格為每支50 mg）；亞胺培南（山東新時代藥業有限公司，國藥準字H20090182）。

1．1．2 菌株來源

住院患者送檢的痰液、尿液、血液、膿液、腦脊液、胸腔積液、腹腔積液、咽拭子、膽汁、插管等標本中分離所得的40株多重耐藥鮑曼不動桿菌。所有菌株均經VITEK－2細菌鑒定儀鑒定。質控菌株為銅綠假單胞菌（ATCC27853）、大腸埃希菌（ATCC25922）均購自廣東省臨床檢驗中心。

1．2 方法

1．2．1 菌懸液配制

選取已經鑒定的多重耐藥鮑曼不動桿菌菌株，并將其接種在血瓊脂培養基上，放入（35±2）℃溫箱中培養16～18 h后取出，在血瓊脂培養基上挑取合適的菌落放于2 mL無菌生理鹽水中，然后利用比濁儀校正濁度為0．5麥氏濁度，再用無菌生理鹽水將0．5麥氏濁度的菌液稀釋至3×105cfu／mL。

1．2．2 抗菌藥物配制

用精密電子天平稱取替加環素與亞胺培南（組合比例為1∶1），用無菌生理鹽水和0．01 mol／L的磷酸鹽緩沖液配制成最終質量濃度均為2 048 μg／mL的溶液備用。

1．2．3 單藥最低抑菌濃度（MIC）測定

用微量肉湯倍比稀釋法檢測40株鮑曼不動桿菌對抗菌藥物替加環素和亞胺培南的MIC，試驗結果判斷標準參照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）標準。

無菌操作，將100 μL微量肉湯分別加入無菌96孔板中。將質量濃度為2048 μg／mL的亞胺培南藥液100μL按每橫排方式加入無菌96孔板中，每橫排的第1孔加入抗菌藥物原液100 μL，混勻，然后吸取100 μL至第2孔，混勻后再吸取100 μL至第3孔，如此連續倍比稀釋至第11孔，并從第11孔中吸取100 μL棄去，第12孔為不含藥物的生長對照。

根據抑菌濃度的需要，取質量濃度為2 048 μg／mL的替加環素原液100 μL加入700 μL的Muller－Hinton肉湯中，此時替加環素藥物質量濃度稀釋為256 μg／mL，按亞胺培南藥液的加入方法加入96孔板中。將濃度為3×105cfu／mL的菌懸液100 μL加入孔中，孔中菌的最終質量濃度為1．5×105cfu／mL。此時每橫排各孔的亞胺培南藥物質量濃度依次為512，256，128，64，32，16，8，4，2，1，0．5 μg／mL。每橫排各孔替加環素藥物質量濃度依次為 64，32，16，8，4，2，1，0．5，0．25，0．125，0．06 μg／mL。將完成上述操作的96孔板放入（35±2）℃溫箱中過夜，培養16～18 h觀察結果，觀察兩藥單獨應用時的MIC，并記錄。

1．2．4 聯合藥物敏感性試驗

根據替加環素與亞胺培南兩單藥微量肉湯稀釋法測定的MIC來決定棋盤稀釋法聯合抗菌試驗的藥物稀釋濃度。分別把替加環素與亞胺培南2種藥物倍比稀釋（配制藥物的方法及倍比稀釋方法同單藥試驗中的方法）按橫向及縱向分別加入96孔板中。本試驗橫向為亞胺培南的降梯度方向，共為12個濃度梯度；縱向為替加環素的降梯度方向，共8個濃度梯度。分別將2種抗菌藥物以50 μL體積兩兩組合加入96孔板中，最后將100 μL的3×105cfu／mL的菌液加入96孔板中。再次將操作完成的 96孔板放入（35±2）℃溫箱中過夜，孵育18～24 h，觀察兩藥聯合應用時各藥的MIC。

1．2．5 聯合抑菌指數（FIC）的確定

記錄組合中2種藥物單獨應用時的MIC及2種藥物聯用后的MIC，并計算出2種藥物聯用的FIC。FIC為聯用時各藥的MIC值分別除以單藥時MIC值的商的和。相互作用解釋：FIC≤0．5代表協同作用，0．5＜FIC≤1代表相加作用，1＜FIC≤2代表無關作用，FIC＞2代表拮抗作用[6]。

2 結果

2．1 藥物單用與聯合使用的MIC50和MIC90

結果見表1和表2。

表1 單用抗菌藥對多重耐藥鮑曼不動桿菌的MIC（μg／mL）

表2 聯合使用抗菌藥物對多重耐藥鮑曼不動桿菌的MIC（μg／mL）

2．2 聯合用藥的FIC分布

替加環素和亞胺培南聯合使用，表現為協同作用的菌株占70%，表現為相加作用的占25%，表現為無關作用的占5%，無拮抗作用發生，詳見表3。

表3 替加環素和亞胺培南聯合使用的FIC分布（n＝40）

3 討論

鮑曼不動桿菌是造成醫院感染的常見病原菌。近年來，其耐藥性日益嚴重且感染增多，已引起臨床醫生和微生物研究人員的重點關注。鮑曼不動桿菌主要會導致呼吸道感染，但也可引發泌尿系感染、敗血癥及繼發性腦膜炎等。鮑曼不動桿菌在醫院的環境中分布很廣且可長期存活，嚴重威脅了危重患者和冠心病重癥監護室(CCU)及綜合性重癥監護室(ICU)患者的生命健康。據報道，鮑曼不動桿菌在無活性惰性物質表面可存活超過5個月[10]。在其長期的進化過程中，不動桿菌屬能形成一系列自身特有的耐藥基因，如碳青霉烯酶基因，而這些基因能過度表達來應對抗菌藥物的治療；在分子水平上，其擁有從外界捕獲耐藥基因的能力，并能整合人自己的基因組，使之得到表達能力，從而獲得新的耐藥性。隨著醫療技術的發展，廣譜抗菌藥物、糖皮質激素及免疫抑制劑的大量使用，使該菌的耐藥情況更加嚴重。此外，鮑曼不動桿菌還有易克隆及傳播的特點。正是由于以上原因及其快速獲得和耐藥性的能力，導致鮑曼不動桿菌感染不斷出現[11－12]。

《2012中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識》中提出，對于鮑曼不動桿菌感染的治療應采用兩藥聯合甚至是3種藥物聯合的方案。其中提出以替加環素為基礎，聯合舒巴坦或含舒巴坦的復合制劑、碳青霉烯類抗菌藥物、氨基苷類抗菌藥物、喹諾酮類抗菌藥物、多黏菌素E[13]。而碳青霉烯類抗菌藥物被推薦用于初治鮑曼不動桿菌感染患者，但2010年中國細菌耐藥性監測(CHINET)顯示，使用碳青霉烯類抗菌藥物致院內鮑曼不動桿菌感染率接近60%[14]，故此類抗菌藥物治療鮑曼不動桿菌感染時要權衡利弊。抗菌藥物單獨使用對多重耐藥菌株感染治療時易誘導病原菌產生耐藥性，且其作用有限[15]，故聯合用藥治療成為臨床上解決多重耐藥細菌感染較有效的途徑之一。

本研究中利用替加環素聯合亞胺培南，測定聯合用藥后對40株多重耐藥鮑曼不動桿菌MIC的影響。結果顯示，替加環素和亞胺培南聯合使用，表現為協同作用的菌株占70．00%，相加作用的菌株占25．00%，無關作用占5．00%，無拮抗作用發生。

綜上所述，替加環素聯合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動桿菌多表現為協同或相加作用，有良好的抗菌活性。本研究為臨床應用替加環素聯合亞胺培南治療多重耐藥鮑曼不動桿菌感染提供了試驗依據。

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In VitroActivityofTigecyclineCombined with Imipenem againstM ultidrug－Resistant Acinetobacter Baumann

Shan Jinglan1，Zheng Guixing1，Deng Suiyan2，Huang Jun3
（1．First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000； 2．Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000；3．Guangzhou Medical University Primary Hospital，Guangzhou，Guangdong，China 520000）

Objective To investigate the in vitro activity of tigecycline combined with imipenem against multi drug－resistant Acinetobacter baumann，and to explore the new way of clinical medicine administration against multi drug－resistant Acinetobacter baumann．M ethods Agar dilution method and checkerboard method were used for the MIC testing of tigecycline combined with imipenem against 40 multi drug－resistant Acinetobacter baumannii strains，and MIC value was used to calculate the fractional inhibitory concentration（FIC）index．Results The MIC of tigecycline and imipenem were reduced significantly when using by tigecycline combined with imipenem．The FIC results showed that the main interaction was synergism （70．00%）and additivity（25．00%），with only 5．00% of inefficiency．No antagonism was observed．Conclusion Tigecycline combined with imipenem can be used to treat the infection of multi drug－resistant Acinetobacter baumann．

tigecycline；imipenem；multi drug－resistant；acinetobacter baumann

R969．3；R945；R978．1

A

1006－4931(2016)10－0012－03

單靖嵐（1983－），女，大學本科，檢驗師，研究方向為醫院感染，（電話）020－83062961；黃俊（1976－），男，教授，博士研究生，研究方向為感染免疫學，本文通訊作者，（電話）020－37103216（電子信箱）hj165＠sina．com。

2015－09－10；

2015－12－20)

*廣東省醫學科學技術研究項目，項目編號：A2015436。