shRNA沉默ADAM17基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞MCF-7增殖的影響

蔡 準(zhǔn)，陳國福，吳麗君，張雪鵬，孟祥潮

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤外科，河北 唐山 063000)

論 著 doi:10.11724/jdmu.2016.06.05

shRNA沉默ADAM17基因?qū)θ巳橄侔┘?xì)胞MCF-7增殖的影響

蔡 準(zhǔn)，陳國福，吳麗君，張雪鵬，孟祥潮

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤外科，河北 唐山 063000)

目的 利用shRNA干擾沉默人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的解聚素-金屬蛋白酶17(adisintegrin and metalloproteinases 17，ADAM17)基因，觀察其對細(xì)胞增殖的影響。方法 針對ADAM17基因設(shè)計合成具有特異性的ADAM17-shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞。實(shí)驗設(shè)對照組(空白PBS)、干擾組(轉(zhuǎn)染干擾無義序列ADAM17-shNC)、實(shí)驗組(轉(zhuǎn)染ADAM17-shRNA)，采用Realtime PCR檢測各組細(xì)胞ADAM17 mRNA的表達(dá)水平，四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測細(xì)胞的增殖活性，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化。結(jié)果 實(shí)驗組ADAM17 mRNA的相對表達(dá)量顯著低于對照組和干擾組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗組的MCF-7細(xì)胞增殖活性較其他兩組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗組的MCF-7細(xì)胞進(jìn)入S期(23.60±1.09)%和G2/M期(6.30±0.82)%的比例降低，絕大多數(shù)細(xì)胞停留在G0/G1期(65.17±1.35)%，細(xì)胞周期延緩，與對照組、干擾組相比較差異具有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)論 ADAM17-shRNA對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的ADAM17基因具有沉默作用，從而抑制MCF-7細(xì)胞的增殖活性，延緩細(xì)胞周期進(jìn)展。

解聚素-金屬蛋白酶17；短發(fā)夾RNA；乳腺癌；增殖

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。近年來，在全球范圍內(nèi)，每年新增乳腺癌患者約有138萬例，占女性癌癥病例的23%[1]。中國成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一[2]。解聚素-金屬蛋白酶17(adisintegrin and metalloproteinases 17，ADAM17)是解聚素-金屬蛋白酶家族的重要成員之一。具有解聚素和金屬蛋白酶的活性，ADAM17發(fā)揮蛋白剪切酶樣的作用，釋放或啟動大量結(jié)構(gòu)和功能不同的分子，在腫瘤細(xì)胞中參與多種生物學(xué)行為[3-4]。國內(nèi)外研究均表明ADAM17在多種惡性腫瘤中都有高表達(dá)，而在正常組織和細(xì)胞中卻表達(dá)量很少，參與腫瘤的發(fā)生、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的過程[5-7]。本研究利用ADAM17-shRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞MCF-7，觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力的變化，從而揭示ADAM17與乳腺癌細(xì)胞增殖的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 材 料