三白通絡膠囊急性毒性與長期毒性試驗研究

摘要：目的 通過研究三白通絡膠囊的急性毒性與長期毒性反應，確定三白通絡膠囊的安全性，為臨床用藥提供科學依據，保證用藥安全。方法 以高劑量組100g/kg，中劑量組40g/kg，低劑量組10g/kg 給大鼠連續灌服12w，分別測量大鼠體重，三白通絡膠囊測定血液學和血液生化學指標，并作組織病理學檢查。結果 試驗結果表明，三白通絡膠囊各劑量組動物的觀測指標與空白對照組比較，均無顯著性差異。病理檢查各臟器組織均未見藥物中毒性病理形態學改變。停藥后也未見藥物延遲性毒性反應。結論 三白通絡膠囊無急性毒性，耐受量大，臨床用此藥將是安全的。

關鍵詞：三白通絡膠囊；急性毒性；長期毒性；耐受量

三白通絡膠囊為我院一中藥制劑，具疏風化痰，活血通絡之功效，用于風痰淤阻所致的口眼喎斜。周圍面神經麻痹見上述癥候者。為確保其安全性，為臨床用藥提供科學依據，我們進行了動物試驗。

1 材料與方法

1.1受試動物及藥物 健康瑞士小白鼠，沈陽中國醫科大學實驗動物部；健康Wistar大白鼠，中國醫科大學實驗動物部。受試藥物三白通絡膠囊（豐南區中醫醫院制劑室，冀藥制字Z20051609 批號150523）。

1.2方法

1.2.1小鼠急性毒性試驗 健康瑞士小白鼠100只，體重在18～22g，雌雄各半，鼠料塊正常飼養，給水及青菜，室溫22℃左右，試驗前禁水禁食12h備用。①為計算出半數致死劑量（LD50）對試驗小白鼠進行0%-100%致死量范圍的預試驗，取小白鼠70只，雌雄各半，隨機分為七組，1～7組每組10只。逐組依法酌情進行。首先第1組給以配制之50%三白通絡膠囊內容物水溶液0.4ml/10g體重，一次性灌胃給藥，觀察7d無不良反應無死亡時，再以同樣方法增大劑量，觀察100%直至600%三白通絡膠囊內容物水溶液，直至濃度不能再增加為止。②根據預實驗結果，采用最大耐受劑量（MTD）實驗法，取小白鼠40只，雌雄各半，隨機分成三組。第1組10只為對照組。第2組10只為給藥1組：給以600%三白通絡膠囊內容物水溶液0.4ml/10g體重，一次性灌胃給藥[1]。第3組20只為給藥2組，以同樣藥物濃度，同樣劑量在第1次給藥后4h再給藥1次。對照組以水代之，觀察7d，觀察小白鼠有無明顯毒性反應及死亡情況。

1.2.2小鼠長期毒性試驗 運用中國醫科大學實驗動物部培育的健康Wistar大白鼠，體重在90～110g，雌雄各半，共80只，按體重性別隨機分為四組，即對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組20只。以中國醫科大學實驗動物部生產之鼠類飼料塊和青菜飼養。正常飼養1w后進行試驗。劑量及給藥途徑：將其沖劑以溫開水溶解后經 灌胃給藥。低劑量組：1次/d，每次灌胃100%三白通絡膠囊劑（每1ml含1.0g生藥下同）2.0ml，即每日10g/kg，此量稍大于臨床成人等效量。中劑量組：1次/d，每次灌胃400%三白通絡膠囊劑2.0ml/只，即每日40g/kg。高劑量組：2次/d，每次灌胃400%三白通絡膠囊劑2.5ml/只，即每日100g/kg。對照組：1次/d，每次灌胃生理水2.0ml/只。各組均連續給藥12w。

1.3觀測指標 給藥后注意觀察大白鼠精神狀態、活動、食欲變化、飲水、大小便性狀及皮膚毛發等一般體征。每兩周測體重一次。實驗前和給藥后第6、12w末由尾靜脈取血進行行血細胞學和生化學檢查。實驗結束后各組取50%的大白鼠以乙醚全麻處死進行病理解剖學檢查。其余大白鼠停藥飼養觀察2w后各組再取其50%大白鼠以乙醚全麻處死，進行病理解剖學檢查。每次病理解剖首先注意各臟器肉眼變化，并將所有臟器以10%福爾馬林水溶液固定，再取材、脫水、浸臘等病理學常規制片，H、E染色，肝加蘇丹III脂肪染色，光學顯微鏡觀察。

2 結果

2.1小鼠急性毒性試驗 由表1和表2可以看出，配制成最大濃度為100%直至600%的三白通絡膠囊內容物水溶液，對小鼠進行一次性灌胃，未測出其半數致死量，說明本制劑無急性毒性作用。使用最大濃度對小鼠做進一步觀察，觀察7d小鼠無不良反應，無1例死亡。其最大耐受量為臨床患者用藥量的280倍。

2.2大鼠長期毒性試驗

2.2.1對大鼠一般指標的影響 給藥后各給藥組和對照組動物由于食欲好，體重逐漸增加，且各組間無顯著性差異，見表3。

2.2.2對大鼠血常規指標的影響 以三白通絡膠囊內容物混懸液，高、中、低不同劑量連續灌胃給藥12w，樣品各組雌性、雄性大鼠的血紅蛋白、紅細胞、血小板、白細胞總數及其分類與對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），表明該樣品對大鼠的血常規指標無明顯影響，見表4。

2.2.3對大鼠血液生化指標的影響 以三白通絡膠囊內容物混懸液，高、中、低不同劑量連續灌胃給藥12w，樣品各組雌性、雄性大鼠的血清總蛋白、血清白蛋白、血清球蛋白、谷丙轉氨酶、尿素氮與對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），表明該樣品對大鼠的血液生化指標無明顯影響，見表5。

2.2.4對大鼠出血時間的影響 出血時間的測定：利用斷尾出血法測之，每次以溫水40～50℃水浴鼠尾2～3min，擦干后剪之，首次距尾末端0.5cm處剪之，以后每次距末端0.2～0.3cm 剪之。結果用藥后各組大鼠出血時間縮短，見表6。

2.2.5對大鼠凝血時間的影響 凝血時間測定：利用斷尾取血時，首先將尾部以40～50℃溫水浴之。然后切斷尾末端以毛細玻璃管吸之。然后定時折斷毛細玻璃管以觀察有無血纖維絲出現，計算凝血時間。結果各給藥組凝血時間明顯縮短，見表7。

2.2.6對大鼠臟器的影響 對大鼠的臟器進行病理解剖學檢查。

2.2.6.1肉眼觀察 給藥各組和對照組大白鼠發育正常、營養良好、毛色光澤好、皮膚呈淺粉紅色，口腔、鼻腔、肛門和外陰部無出血或異常分泌物。皮下脂肪層較厚。胸腔、腹腔、心包腔無積液，漿膜光滑，無粘連。心、肺、肝、脾、胰、腎、消化道、胸腺和腎上腺、卵巢、子宮、睪丸和大腦等均未見異狀。延期觀察各組動物亦無異常發現。

2.2.6.2鏡下觀察 對各組所有動物之心、肝、腎、肺、脾、腦、內分泌腺等均制片觀查，觀查結果如下：①心：給藥組和對照組心肌纖維精細均勻、橫紋清楚、排列整齊。胞核內脂褐素未見增多，亦未見變性、壞死或炎性反應。間質無充血或炎性細胞浸潤。心內膜和心外膜亦無異常變化。②肺：給藥各組和對照組肺泡大小較均勻一致，肺泡壁薄，內無充血或炎性細胞浸潤。肺泡腔無炎性細胞滲出，亦未見水腫液。支氣管周圍未見明顯炎性反應。③肝：給藥組和對照組肝組織結構完整，肝細胞大小均勻一致，肝素排列整齊，未見肝細胞變性或壞死，亦無炎性細胞浸潤。肝竇清楚，竇內皮細胞無明顯增生或肥大。匯管區小膽管和纖維組織未見增生，亦無炎性細胞浸潤。肝蘇丹III染色陰性。④脾：包膜光滑，脾組織無明顯增生，脾竇輕度擴張充血。⑤胰：腺體及胰島未見病變。⑥胃、腸：腸、胃各層結構清晰，無變性壞死樣改變。⑦腎：各給藥組和對照組雙腎皮質與髓質分界清楚，腎小球大小一致，分布均勻。腎小球內未見增生、充血或炎性細胞浸潤。腎曲管上皮無變性或壞死，未見管型。間質內無充血或炎性細胞浸潤。⑧內分泌腺：各組之胸腺、腎上腺、睪丸和卵巢均未見異常。⑨大腦：腦皮質和髓質結構清楚。腦內神經細胞未見變性或壞死，膠質細胞無明顯增生，亦未見腦組織軟化現象。

此外，對子宮組織學檢查亦無異常改變。

實驗結束次日，各組取50%大白鼠用乙醚全麻處死，進行病理解剖觀察。2w后再取各組余下大白鼠的50%，亦用乙醚全麻處死，進行病理解剖觀察。4w后將各組余下的大白鼠用乙醚全麻處死，進行病理解剖觀察。各次解剖之大白鼠主要臟器均以10%福爾馬林水溶液固定，取材，病理常規制片檢查。首次處死大白鼠各臟器未中毒病變。各延長期處死的大白鼠無論大小劑量組的心、肺、肝、脾、胃、腦、消化管和內分泌腺均未見中毒性改變。

結果可見，對照組及個給藥組動物各臟器組織均未見藥物中毒性病理心態學改變。

3 結論

急性毒性試驗中并未測出LD50，最大耐受試驗標兵，在7d的觀察期內，小鼠近視、排便、活動正常，未見任何中毒表現，無小鼠死亡。

長期毒性試驗，三白通絡膠囊內容物經水溶解制成溶液，按低、中、高不同劑量連續給大白鼠灌胃12w，給藥各組和對照組在生長發育方面無明顯差異，對血液細胞學和血液生化學無明顯影響。對心、肝、腎、腦和內分泌腺及其他臟器亦無明顯中毒反應。因而在100g/kg劑量下無毒、安全，此劑量已相當于人臨床劑量的58倍。

參考文獻：

[1]佟繼銘，華正祥.健骨沖劑對大鼠長期毒性研究[J].承德醫學院學報 1997，014（003）：184.編輯/倪冰冰