高效液相色譜法分析綠谷隆的含量

摘 要：綠谷隆純品為白色結晶固體，以甲醇+水為流動相，以Spherisorb C18為填充物的不銹鋼柱對綠谷隆進行高效液相色譜分離，采用紫外檢測器的高效液相色譜外標法進行檢測。該方法的相對平均偏差為0.30%，變異系數為0.44%，平均回收率99.3-100.4%。結果表明，綠谷隆的濃度在1.34mg/50mL～8.03mg/50mL之間具有良好的線性范圍，相關系數R2=0.9994。該方法簡便、快速，具有較高的精密度和準確度，是一種較好的優化方案可以作為綠谷隆產品的質量分析。

關鍵詞：綠谷隆；反相高效液相色譜；外標法

1 概述

綠谷隆純品為白色結晶固體，是一種用于防除禾谷類及玉米田中雜草的除草劑，目前國內尚無綠谷隆的國家標準和行業標準，根據綠谷隆的物化性質和實際生產的需要，我們選擇高效液相色譜法進行定量分析，該方法具有較高的精密度和準確度，且快速、準確，可作為綠谷隆的產品檢驗分析方法。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

島津LC-20AT具紫外可變波長檢測器，色譜工作站，綠谷隆標準品≥98%，甲醇HPLC，新蒸二次蒸餾水，色譜柱：150mm×4.6mm×5μm，C18不銹鋼柱，進樣針：100μL。

2.2 液相色譜操作條件

流動相：甲醇+水=70+30（V/V），柱溫：（25±5）℃，檢測波長：254nm。流速： 1.0ml/min。保留時間：綠谷隆約：7.1min，綠谷隆標準品分離見圖1，樣品分離見圖2。

2.3 測定步驟與計算

2.3.1 測定步驟

（1）標準溶液的的配制。準確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆標準品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（2）樣品溶液的配制。準確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆樣品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（3）測定。在上述色譜條件下，待儀器穩定后，連續注入綠谷隆標準溶液于色譜柱內，待相鄰兩針的綠谷隆標樣峰面積變化小于1.0%時，按下列順序進行色譜分析：標樣溶液、樣品溶液、樣品溶液、標樣溶液。

2.3.2 計算

將測得兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中綠谷隆的峰面積分別進行平均，試樣中綠谷隆質量百分含量X按下式計算：

式中：r1-標樣中綠谷隆的峰面積；r2-試樣中綠谷隆的峰面積；m1-標樣的質量，g；m2-樣品的質量，g；P-標樣中綠谷隆的質量百分含量%；

允許誤差：兩次平行測定結果之差小于0.5%，取其平均值作為樣品中綠谷隆的百分含量。

2.4 結果與討論

2.4.1 色譜條件的確定

（1）分離方法及檢測器的選擇。經過反復實驗證明，綠谷隆在HPLC反相C18柱上分離效果和峰形良好，保留時間短，因此選用反相HPLC法分析。紫外檢測器是高效液相色譜儀中應用最廣泛的檢測器，它靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，對流速和溫度均不敏感，根據綠谷隆的結構特點，通過實驗證明，綠谷隆在紫外區內有很大吸收，因此紫外檢測器可以作為分析綠谷隆的首選檢測器。

（2）溶劑的選擇。反相色譜法：固定相（填料）為非極性，流動相為極性。對應的色譜柱：烷基硅烷化鍵合硅膠填料，如C18（ODS）C8，C4，C3，苯基等。反相色譜中最常用的流動相及其洗脫強度：水<甲醇<乙腈<乙醇<丙醇。由于綠谷隆在水中的溶解度較小，在以上有機溶劑中的溶解度會增大，通過實驗：本試驗決定，選用甲醇作為溶劑。

（3）流動相配比的選擇。綠谷隆在流動相甲醇+水=80+20（V/V）時，保留時間過短，分離效果較差，在流動相甲醇+水=70+30時，峰形對稱，分離效果良好，保留時間適中，且綠谷隆在甲醇中都有很好的溶解度，因此確定流動相甲醇+水=70+30為流動相操作條件。

（4）波長的選擇。通過對綠谷隆吸收曲線的測定，綠谷隆在波長254nm和220nm處，都有很強的響應；在波長220nm處，吸收太強，峰高太高，超出檢測器線性范圍，若減少稱樣量或進樣量，會影響結果的精密度和準確度；在254nm處，樣品的稱樣量和峰高的比例適中，所以最后選擇254nm作為綠谷隆的測定最佳波長。

2.4.2 方法的線性范圍

準確稱取不同質量的綠谷隆標準品配成不同濃度的溶液，在2.2色譜操作條件下測定，線性回歸方程為：Y=06X+7E+58477，相關系數R2=0.9994。

2.4.3 精密度的測定

用同一樣品在規定色譜條件下進行多次測定，其結果如表1所示：

表1 精密度測定結果數據表

2.4.4 回收率的實驗

用綠谷隆標樣加入到已知含量的綠谷隆的樣品中，在規定的色譜條件下測定其回收加入率。結果如表2所示：

由23可知綠谷隆的回收率在98.8-100.4之間，說明方法的準確度較好。

3 結束語

利用反相高效液相色譜的外標法測定了綠谷隆的含量。該方法簡便、快速，具有較高的精密度和準確度，是一種較好的優化方案，可以作為綠谷隆產品的質量分析。

參考文獻

[1]杭州大學.分析化學手冊（第二分冊）化學分析[M].北京：化學工業出版社，2001.

[2]分析化學手冊（第六分冊）液相色譜分析[M].北京：化學工業出版社，2001.

[3]陳立仁，蔣生祥，等.高效液相色譜基礎與實踐[M].北京：科學出版社，2001.