艾司奧美拉唑鈉有關物質的反相—HPLC法測定

摘 要：艾司奧美拉唑為一種質子泵抑制劑，在治療消化系統相關疾病方面取得良好的效果。艾司奧美拉唑鈉有關物質的檢測（包含7個已知雜質）采用高效液相色譜法測定，文章對該方法進行簡單的闡述。色譜柱為Agilent Eclipse C18柱（100×4.6mm，3um），乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：10：10；流動相B：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：1：19，流速為0.9ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，進樣量20μL。結論：該方法準確可靠，簡便，靈敏，專屬性強，重復性好，可用于艾司奧美拉唑鈉原料藥的有關物質測定。

關鍵詞：艾司奧美拉唑鈉；HPLC；有關物質測定

艾司奧美拉唑鈉的中文名是5-甲氧基-2-（（S）-（（4-甲氧基-3，5-二甲基-2-吡啶基）甲基）亞磺酰基-1H-苯并咪唑鈉。艾司奧美拉唑是奧美拉唑單一的S異構體。其口服后肝臟代謝率較低，血藥濃度和生物利用度比奧美拉唑或R-異構體高[1]。艾司奧美拉唑為第一個上市的光學純質子泵抑制劑[2]，應用于臨床的10多年間，以其良好的療效和較低的不良反應發生率低，得到臨床的廣泛應用和人們越來越多的關注。艾司奧美拉唑鈉的有關物質檢測已有文獻報道[3-4]，但文中主要對含量測定及4個已知雜質進行了方法學驗證。文章詳細研究了7個已知雜質的有關物質HPLC測定方法，對測定方法進行相關的分析方法學研究。結果表明，該方法操作簡單，靈敏度高，專屬性強，重復性好，可以很好的控制艾司奧美拉唑鈉的質量。

1 色譜條件

流動相A：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=20：10：70；流動相B：乙腈：磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：水=80：10：10；磷酸鹽緩沖液（pH7.6）：每1L中含磷酸二氫鈉0.0052mol和磷酸氫二鈉0.032mol的溶液。

檢測波長：λ=280nm；柱溫：25℃；樣品室溫度：6℃；流速：0.9ml/min；進樣量：20ul，色譜柱：Agilent Eclipse C18，100×4.6mm，

3um。

2 溶液配制

2.1 系統適用性溶液

分別稱取雜質A、雜質B、雜質Cg、雜質D、雜質E約、雜質G、雜質H各約1mg，置同一50ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度。稱取艾司奧美拉唑鈉2mg至10ml容量瓶，移取上述系統適用性儲備液1ml至同一10ml量瓶中，用溶劑溶解稀釋至刻度，搖勻。

2.2 供試品溶液的配制

取艾司奧美拉唑鈉樣品20mg，精密稱定，置100ml的量瓶中，加入乙腈10ml使溶解，加磷酸鹽緩沖液（pH7.6）10ml，用水稀釋至刻度溶解，搖勻。

3 方法驗證

3.1 系統適用性實驗

取溶劑、系統適用性溶液20ul注入色譜儀，記錄色譜圖。結果如下：雜質H、雜質A、雜質E、雜質D、雜質B、艾司奧美拉唑、雜質G、雜質C依次出峰，相鄰峰之間的最小分離度為2.68，符合實驗要求。

3.2 選擇性

3.2.1 溶液配制。稱取雜質H、雜質A、雜質E、雜質D、雜質B、艾司奧美拉唑鈉、雜質G、雜質C各約20mg置100ml的量瓶中，加溶劑溶解、定容、搖勻，作為選擇性實驗溶液。移取上述選擇性溶液各1ml置100ml量瓶中，加溶劑定容、搖勻，作為1%混合溶液。取艾司奧美拉唑鈉樣品20mg，精密稱定，置100ml的量瓶中，移取除艾司奧美拉唑鈉外的選擇性溶液各1ml置該100ml量瓶中，加溶劑定容、搖勻，作為加樣混合溶液。

3.2.2 分析。依次進溶劑及3.2.1配制的溶液，記錄色譜圖。雜質H、雜質A、雜質E、雜質D、雜質B、艾司奧美拉唑鈉、雜質G、雜質C都有出峰，具有很好的分離效果，峰純度符合規定，各雜質不干擾結果測定。

3.3 精密度

3.3.1 系統精密度。取20ul的供試品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，連續進樣六次，主峰峰面積RSD為1.26%。

3.3.2 方法精密度。配制雜質H、雜質A、雜質E、雜質D、雜質B、雜質G、雜質C混合溶液（各雜質稱取20mg置同一100ml量瓶中），稱取艾司奧美拉唑鈉六份，每份20mg置100ml量瓶中，加1ml雜質混合溶液，加溶劑溶解并定容、搖勻。每份進兩針，計算各雜質的含量，總共12針每種雜質的含量RSD均<30%，符合實驗要求。

3.4 檢測限與定量限

以溶劑為空白，連續進樣三次，按信噪比10：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算定量限。按信噪比3：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算檢測。測得各樣品檢測限與定量限結果見表2。

3.5 線性

線性范圍確認：包括定量限、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%。各濃度點（定量限→0.5%）各取20ul，進樣3次。以濃度（ug/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，r應>0.999，所得回歸方程（n=5）及線性范圍見表2。結果顯示，各樣品溶液均有良好的線性關系。

3.6 準確度

稱取艾司奧美拉唑鈉約20mg16份置100ml量瓶中，配制成原始溶液、含各雜質定量限濃度溶液、含各雜質0.1%濃度溶液和含各雜質0.2%濃度溶液各三份，每份進樣1針。按定量測定方法，計算加入雜質的回收率，結果三份平均回收率均在95.0%～105.0%之間。

3.7 方法耐用性

為了研究不同的柱溫度、不同的流速、流動相中有機相比例改變，對檢測的影響。要求：分離度符合規定，雜質含量與未改條件之前的含量RSD≤30%。樣品溶液配制方法同“3.3.2方法精密度”。柱溫度改為25±2℃；流速改為0.9±0.2ml/min；有機相的比例修改條件為±5%。每次實驗均改變一個項目，其余條件不變。結果顯示，改變條件后各相鄰峰之間的分離度符合實驗要求，雜質含量與未改條件之前的含量RSD均≤30%，符合實驗要求。

3.8 溶液穩定性

配制供試品溶液，放置在高效液相色譜儀儀的進樣器中，樣品室溫度為6℃，分別與0、2、4、6、8h進樣。雜質A含量從0h0.01%、2h0.02%、4h0.03%、8h0.06%，增幅在4h時就達到了20%，其余雜質峰面積在8h才發生明顯變化，說明溶液2h內穩定，超過2h雜質A含量明顯增加，繼續檢測導致檢測結果不真實。表明檢測艾司奧美拉唑鈉有關物質時應臨時配制，現配現用。

4 結束語

綜上，選擇性、精密度、定量限、檢測限、線性范圍、回收率、方法耐用性均符合實驗要求。此外，在溶液穩性試驗中發現，艾司奧美拉唑鈉溶液放置超過2h將會造成雜質H的含量增加，說明其穩定性差。為確定穩定性狀況，需進行強降解實驗，并在穩定性考察時特別注意，進而給貯藏艾司奧美拉唑鈉提供依據，文章不對強降解實驗結果進行闡述。

參考文獻

[1]代小松，韓盛璽.埃索美拉唑——質子泵抑制劑的新成員[J].華西藥學雜志，2007，22（3）：356-357.

[2]顧維鈞，隋強，王小妹，等.埃索美拉唑合成路線圖解[J].中國醫藥工業雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals，2011，42（3）.

[3]胡曉，唐小海，謝永美.RP-HPLC法測定S-奧美拉唑鈉及其有關物質的含量[J].中國藥房，2009，20（22）：1744.

[4]李婷婷，鄭子棟.RP-HPLC法測定埃索美拉唑鈉的有關物質[J].藥物分析雜質，chin J Pharm Anal ，2013，33（4）.