HPLC法測定乳制品中三聚氰胺的質量控制圖的應用

（無錫市產品質量監督檢驗中心，江蘇無錫214101）

HPLC法測定乳制品中三聚氰胺的質量控制圖的應用

倪崢飛，沈海麗，王琴

（無錫市產品質量監督檢驗中心，江蘇無錫214101）

對實驗室內測定乳制品中三聚氰胺的數據進行內部質量控制，保證檢測結果控制在一個合適的置信水平內。采用液相色譜儀結合固相萃取，通過分別對20個批次的乳制品樣品進行三聚氰胺加標回收率的測定，然后經過數理統計，做出乳制品中三聚氰胺的回收率質量控制圖。結果表明，三聚氰胺的受控限為88.9%～99.7%，警戒限為90.7%～97.9%。質量控制圖能直觀和有效地控制高效液相色譜測定乳制品中三聚氰胺的分析質量，保證分析結果的準確可靠。

質量控制圖；高效液相色譜；乳制品；三聚氰胺；

0 引言

三聚氰胺為白色粉末，無味，摻雜后不易被發現。三聚氰胺分子中含有大量氮元素，普通的全氮測定法測蛋白質含量時不能排除這類偽蛋白氮的干擾，因而一些不法廠商常常為了降低成本添加這種化工原料，來冒充食品中的蛋白質[1]。高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)[2-3]因其具有高效、快速、準確性好、成本相對較低等優點，被大部分乳品企業用于乳制品中三聚氰胺的出廠檢測。

目前，高效液相色譜法測定乳制品中三聚氰胺的質量控制，一般采用標準物質測定法和質控樣品測定法進行。筆者通過開展乳制品中三聚氰胺的加標回收測定，對相關數據進行數理統計，制作出乳制品中三聚氰胺測定的加標回收率質量控制圖，檢查測量系統的準確度，從而觀察和分析實驗數據的變化，為準確分析測定乳制品中三聚氰胺提供依據。

1 實驗

1.1儀器與試劑

Waters1525高液相色譜儀配2996二極管陣列檢測器，717Plus自動進樣器，Epower工作站，三聚氰胺（99.9%）。

1.2色譜條件

色譜柱為Welch Materials AQ-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm i.d.），柱溫為40℃，流速為1.5 mL/min，流動相為庚烷磺酸鈉（濃度為0.01 mol/L），檸檬酸（0.01 mol/L）-乙腈（90∶10，體積比），檢測波長為240 nm，柱溫為40℃，進樣量20 μL。

1.3方法

參照GB/T22388-2008[4]中方法。

（1）提取。準確稱取2.0 g液態奶樣品于50 mL的具塞塑料離心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超聲提取10 min，再振蕩提取10 min后，以不低于轉速4 000 r/min離心10 min。上清液經三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸定容至25 mL，移取5 mL濾液，加入5 mL水混勻后做待凈化液。

（2）凈化。將待凈化液轉移至固相萃取柱中。依次用3 mL水、3 mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6 mL氨化甲醇液溶液洗脫。洗脫液于50℃下氮氣吹至近干，準確加入1 mL流動相，在快速混勻器上混勻1 min，經0.45 μm的濾膜過濾，上機分析。

1.4加標回收率的測定

加標方法及加標量：根據實驗室內部質控要求，每10個樣品做一個加標回收實驗，三聚氰胺加標量為10 mg/kg。陰性樣品稱量完成后將標樣溶液加入，然后與樣品共同進行處理和檢測。

1.5數據的收集和整理

三聚氰胺回收率用于常規測定的質量監控，每測定10個樣品的同時檢測陰性樣品和加標樣品，計算回收率。筆者收集了20個組的數據，計算這20個組回收率數據的算術平均值(X)和標準差(S)。然后計算上、下控制限(X±3S)，上、下警戒限(X±2S)和上、下輔助限(X±S)，結果如表1所示。

2 結果與討論

2.1質量控制圖的繪制

質量控制圖的繪制是以數理統計學的正態分布理論為依據，應用算術平均值（X）和標準差（S）來描述，并基于作為判斷準則的小概率原理：測量系統處于受控狀態，分析數據總體呈正態分布，數據偏差大于3S的可能性只有0.27%，可以看成是小概率事件[5]。平均值定出了分布的中心，標準差表示了數據的展開情況，X為中心線（CL）向外設定3個區間，X±S為上、下輔助線區間（UAL，LAL），X±2S為上、下警告限（UWL，LWL），X±3S為上、下控制限（UCL，LCL）。對可疑值取舍后的表1進行質量控制圖指標的計算。

在EXCEL中錄入表1的數據，繪制三聚氰胺測定的加標回收均值-標準差控制圖(見圖1)。

圖1 乳制品中三聚氰胺加標回收均值-標準差控制圖

2.2質量控制圖的識別

由表1和圖1可以看出，加標回收率的受控范圍88.9%～99.7%。其中，有一個點(97.9%)恰好落在上警戒限上(97.9%)，3個點(97.5%，96.2%，96.6%)落在上警戒限與上輔助限范圍內，3個點(91.8%，91.3%，92.3%)落在下警戒限與下輔助限范圍內，其余的點落在上輔助限與下輔助限范圍內。各數據是隨機排列的，無下述等異常現象出現[6]：（1）連續9個點均在中心線的同一側；（2）6個點連續遞增或遞減；（3）14個點交替上升下降；（4）連續三點中，有2個點在區域（X±2S）～（X± 3S）或在同一側控制界限外；（5）連續5點中，有4個點在區域（X±S）～（X±2S）或落到該區域之外；（6）連續15點都在區域X～（X±S）中；（7）連續8點都落在區域X～（X±S）之外。因此可以判斷此圖可靠，所有監測過程處于控制狀態，表明該控制圖可以用于乳制品中三聚氰胺檢測的日常質量監控。

2.3質量控制圖的分析

質量控制圖的制作能夠及時直觀地展示分析過程是否受控，分析過程失控的原因，檢驗測量過程是否有明顯的系統偏差或偶然誤差，并能指出偏差的方向，最終決定測定值取舍的標準和依據。在日常測定中，如果加標樣品的結果位于中心線附近，上、下警告限之間的區域內，則表明測定過程處于控制狀態。如果加標樣品的結果超出上述區域，但仍在上、下控制限之間的區域內，則提示分析質量開始變劣，可能存在失控傾向，應進行初步檢查，并采取相應的校正措施。如果加標樣品的結果超出上、下控制限，說明分析過程可能出現系統誤差，應該立即停止分析測試工作，及時找出原因。

表1 乳制品中三聚氰胺加標回收率統計結果（n=20） %

在三聚氰胺檢測中，這些原因可能是：①樣品加標不均勻；②樣品提取時，有機溶劑易揮發造成的標物損失；③濾紙規格和性能的差異[7]；④固相萃取柱提取效率的差異[8]；⑤人員操作的熟練程度。針對這些原因，通常采取以下措施：①對操作過程的各個步驟進行復查，找出可能引入誤差的環節；②對可疑環節進行糾正，然后對同一樣品進行多次重復測定，觀察結果是否得到受控；③采用不同方法、不同人員、不同儀器進行檢測，比較所得的結果。

控制圖是要求在穩定狀態下繪制的，因此對于液相色譜分析，質量控制圖并不是無限制的使用[9]。當改變色譜柱和流動相、更換液相色譜儀時，儀器對于待測化合物的響應會發生變化，此時控制圖需要進行修正，修正中心線、控制限、警告限。

3 結論

結果表明，三聚氰胺加標回收率的受控范圍為88.9%～99.7%，警戒限為90.7%～97.9%。本研究所得的質量控制圖能直觀和有效地控制高效液相色譜測定乳制品中三聚氰胺的分析質量，保證分析結果的準確可靠。

為了能更好地實現內部質量控制，下一步可以制作不同的加標回收率質量控制圖，同時積累更多實驗數據，不斷校正和優化控制圖，這樣可以提高質量控制圖的精度，更真實地反映檢測體系的變化趨勢，有效地監控檢測系統。

[1]林祥梅,王建峰,賈廣樂,等.三聚氰胺的毒性研究[J].毒理學雜志, 2008,(3):216-218.

[2]汪輝,彭新凱,李文麗.等.高效液相色譜測定生鮮乳及乳制品中三聚氰胺的方法研究[J].食品科學,2009,29(10):531-535.

[3]丁濤,徐錦忠,李健忠,等.高效液相色譜-二極管陣列檢測法及高效液相色譜-電噴霧串聯質譜法測定植物源性蛋白中殘留的三聚氰胺[J].色譜,2008,26(1)：6-9.

[4]GB/T 22388-2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法[S].

[5]李耀文.質量控制圖在監視直讀光譜儀檢測數據穩定性中的應用[J].化學分析計量,2014,23(1):80-82.

[6]GB/T 4091-2001常規控制圖[S].

[7]王波不同規格濾紙對檢測乳制品中三聚氰胺回收率的影響[J].中國乳品工業,2015,43(4):59-61.

[8]劉江梅,姬瑩瑩,姜芳,等.三聚氰胺檢測用固相萃取柱的重復利用研究[J].安徽農業科學，2013,41(2):802-803,839.

[9]PIERRE MASSON.Quality control techniques for routine analysis with liquid chromatography in laboratories[J].Journal of Chromatogra?phy A,2007,1158:168-173.

Application of quality control chart to the detection of melamine in dairy prod?ucts by HPLC

NI Zheng-fei，SHEN Hai-li，WANG Qin
(Wuxi Test Center of Supervision&Inspection on Product Quality，Wuxi 214101，China)

The internal quality control in the laboratory detection of melamine in dairy products was conducted to ensure that the detection results could be within an appropriate confidence level.Recoveries of standard addition were tested for 20 batches of dairy samples while high performance liquid chromatography(HPLC)was applied in combination with solid-phase extraction,and then mathematical statistics were used to work out the quality control chart of melamine.It was indicated that the control limits of melamine were 88.9%～99.7%with the warning limits of 90.7%～97.9%.It revealed that the quality control chart could directly and effectively control the quality of the HPLC analy?sis in the detection of melamine in dairy products so as to ensure its results accurate and reliable．

quality control chart;HPLC；dairy products；melamine；

TS252.7

A

1001-2230（2016）09-0058-03

2016-03-29

倪崢飛（1984-），男，工程師，主要從事食品質量安全分析與研究。

王琴