眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星血藥濃度變化規律的初步研究

王秋華， 李睿君， 蘇接瑜， 廖黎黎， 張馨文， 曾 蕓

(1.廣西大學動物科學技術學院 ， 廣西南寧530005 ; 2.南寧市馨宇蛇類養殖基地 ， 廣西南寧530225)

眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星血藥濃度變化規律的初步研究

王秋華1， 李睿君1， 蘇接瑜1， 廖黎黎1， 張馨文2， 曾 蕓1

(1.廣西大學動物科學技術學院 ， 廣西南寧530005 ; 2.南寧市馨宇蛇類養殖基地 ， 廣西南寧530225)

為了給臨床防治蛇病合理應用左氧氟沙星提供理論依據，本試驗采用微生物法測定眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后的血藥濃度變化。 結果顯示： 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后0.25 h可以檢測到藥物， 平均血藥濃度為0.78 μg/mL， 0.5 h為0.88 μg/mL， 1 h為0.81 μg/mL， 2 h之后血藥濃度逐漸下降， 24 h未能檢測到血液中含有藥物； 藥物代謝動力學主要參數為： 達峰時間Tmax為0.417±0.118， 峰濃度Cmax為0.902±0.049 μg/mL， 半衰期t1/2λ為13.812±1.864 h。試驗表明：眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星吸收快， 消除緩慢。建議蛇臨床應用鹽酸左氧氟沙星的方法為肌肉注射， 給藥劑量10 mg/kg， 給藥間隔時間48 h。

鹽酸左氧氟沙星 ； 眼鏡蛇 ； 血藥濃度

蛇類在我國有著長期的應用歷史，其在食用，藥用，生態平衡保護中有著廣泛的作用。隨著經濟社會的發展，我國對蛇類產品需求日益增加，而野生蛇類資源有限，因此人工養殖蛇類是解決目前對蛇類產品需求緊張的重要途徑。人工養殖實行高密度養殖模式導致蛇抗病能力降低，發病率增高，有報道認為，75%蛇病是由細菌感染引起的[1]，臨床抗菌藥不合理應用造成細菌耐藥性增加，導致蛇病越來越復雜，因此合理使用抗菌藥物是解決人工養殖蛇類細菌性疾病的有效措施。本研究在日常接診蛇病例工作基礎上，研究左氧氟沙星在眼鏡蛇體內血藥濃度變化規律，為臨床治療蛇病合理應用該藥提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 主要藥品及儀器 鹽酸左氧氟沙星粉由廣西獸藥制劑工程研究中心提供，含量90.7%；營養瓊脂培養基，購自北京陸橋生物技術有限責任公司；超凈工作臺(蘇凈安泰，AIRTECHA)；恒溫培養箱(天津市泰斯特儀器有限公司，WP25)。

1.2 菌種及實驗動物 彭氏變形桿菌由廣西大學動科院基礎獸醫實驗室提供，是實驗室臨床分離保存的蛇源性細菌；眼鏡蛇購自廣西南寧市馨宇蛇類養殖基地。

1.3 5%鹽酸左氧氟沙星溶液配制 精確稱取左氧氟沙星粉，加入注射用水，加熱溶解，冷卻至室溫，用氫氧化鈉調節pH值在5.0～6.0之間，定容，用0.65 μm濾膜精濾，100 ℃熱壓30 min，無菌分裝備用。

1.4 藥敏紙片制備 用無菌小鑷子取滅菌的空白濾紙片浸入相應濃度的藥液或血液樣品0.5 min，取出沿管壁輕輕去掉多余的液體，60 ℃烘干，備用。

1.5 含菌培養基制作 在超凈工作臺中，取經無菌檢查合格的普通營養瓊脂，用滅菌棉簽沾取一定量的彭氏變形桿菌懸液(1.5×109CFU/mL)，均勻涂布于營養瓊脂上，靜置，待培養基表面無泛光液體即可使用。

1.6 標準曲線的制作 精密稱取左氧氟沙星標準品適量，用0.1 mol/L鹽酸溶解后定容制成5 120 μg/mL的標準貯備液，再用0.1 mol/L鹽酸稀釋至濃度為0.125、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8 μg/mL的標準溶液。取滅菌空白濾紙片浸入上述各濃度標準溶液制備對應濃度藥敏紙片，將藥敏紙片平貼在含菌培養基上，每個濃度做3個重復，靜置10分鐘，于37 ℃恒溫倒置培養18～24 h，用游標卡尺測量藥敏紙片的抑菌圈直徑。以抑菌圈直徑平方為橫坐標，藥物濃度的對數值為縱坐標做標準曲線圖。

1.7 血液藥物濃度測定 取6條健康眼鏡蛇，給藥前1 d抽取血樣作為空白對照。按4 mg/kg體重劑量，肌肉注射5%鹽酸左氧氟沙星溶液，分別于給藥后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、9、12、24 h尾靜脈采血 0.1 mL，按1.4和1.6方法制作血液含藥紙片并測定。

1.8 數據處理 采用非房室模型統計矩理論并借助Windows Microsoft (R) Excel版本2007計算藥動學參數，同時以血藥濃度平均值和時間繪制藥時曲線。

2 結果

2.1 血液藥物濃度檢測結果 藥物在0.125～8 μg/mL濃度范圍內，抑菌圈直徑平方和濃度對數呈現良好的線性關系，線性方程為y=0.008 9x-1.773 1(R2=0.987)。眼鏡蛇單劑量肌肉注射鹽酸左氧氟沙星后，血藥濃度在0.5 h達到峰值 0.88±0.067 μg/mL。達到峰濃度后，其在體內的分布、消除分兩相，在0.5～3 h消除較快，3～12 h消除較緩慢，給藥后24 h在血液中檢測不出藥物。各時間點采集血液藥物濃度結果見表1，藥時曲線見圖1。

表1 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液后血藥濃度 (μg/mL，n=6)

注： ND 為not detectable，即檢測不到藥物

圖1 鹽酸左氧氟沙星藥時曲線圖

2.2 主要藥代動力學參數計算結果 眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液后，藥動學主要參數見表2。

表2 鹽酸左氧氟沙星主要藥代動力學參數 (n=6)

3 討論

3.1 抗生素測定方法種類很多，微生物檢定法作為國際通用、經典的抗生素測定方法，具有方便、經濟、容易操作的優點，有研究報道，抗生素微生物檢定法在藥代動力學分析及抗生素殘留檢測中可以取得較好效果[2-3]。本研究選用該方法的最主要原因是眼鏡蛇很難采血，一次采血量最多只有 0.2 mL。

3.2 本試驗中鹽酸左氧氟沙星在給藥后吸收迅速而良好，Tmax為0.417±0.118 h，Cmax為0.902±0.049 μg/mL。有文獻報道，狗口服4 mg/kg甲磺酸左氧氟沙星后，其Tmax為2.60 h，Cmax為1.73 mg/mL[4]；單峰駝肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax為1.51±0.61 h，Cmax為1.90±0.73 μg/mL[5]；泌乳山羊肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax為1.78±0.32 h，Cmax為3.16±0.46 μg/mL[6]。本研究中鹽酸左氧氟沙星在眼鏡蛇體內達峰時間快，血藥濃度較低，消除緩慢，消除半衰期為13.812±1.864 h，MRT為18.652±2.770 h，而在其他動物的消除比較快，都在10 h以內[7-11]。由此可見，左氧氟沙星在不同動物體內的代謝過程存在種屬差異。

3.3 氟喹諾酮類藥物是一種劑量依賴性殺菌藥，理想的殺菌濃度為0.1～10 μg/mL，一般認為Cmax/MIC≥10～12或AUC0～24 h/MIC≥100～125，其抗菌效果最好[12]，而且Cmax/MIC的值越高，細菌產生耐藥性的幾率越小[13]。V.K. Dumka建議左氧氟沙星治療牛的呼吸道、胃腸道、尿道和其他感染的用法為每12h給藥1次，劑量為3 mg/kg體重[8]。根據計算Cmax/MIC和AUC/MIC，預測有效的抑菌劑量，A.Goudah建議當MIC≤0.12 μg/mL，左氧氟沙星在治療單駝峰的細菌感染的臨床推薦劑量為 5 mg/kg 體重[5]。本試驗中眼鏡蛇肌肉注射鹽酸左氧氟沙星溶液的劑量是根據成人一次口服200 mg，按50 kg體重計算為4 mg/kg，如果按鹽酸左氧氟沙星對本課題組分離蛇源彭氏變形桿菌的MIC為0.16 μg/mL來計算，則血藥峰濃度需達到1.6～1.92 μg/mL，給藥劑量應為10 mg/kg體重左右。因此，在本試驗中，將5%鹽酸左氧氟沙星溶于蛇臨床的推薦劑量為10 mg/kg體重，肌肉注射，間隔 48 h 給藥1次。

[1] 閆振貴,王春璈.蛇病防治研究進展[J]. 動物科學與動物醫學，2000,17(2):49-51.

[2] 楊建鳴,張福華. 一種適用于微生物法測定抗生素血藥濃度的新標準曲線[J]. 中國藥學雜志, 1992, 9: 013.

[3] 李延華,王偉軍,張蘭威,等.微生物法檢測牛乳中β-內酰胺類抗生素殘留的對比研究[J].中國抗生素雜志,2009,34(1):63-S1.

[4] 任喬林,張宇. 甲碘酸左氧氟沙星的藥代動力學研究[J]. 中國抗生素雜志, 1999, 24(3): 205-207.

[5] Goudah A. Pharmacokinetics of levofloxacin in male camels (Camelus dromedarius)[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(3): 296-299.

[6] Goudah A,Abo‐El‐Sooud K. Pharmacokinetics, urinary excretion and milk penetration of levofloxacin in lactating goats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(1): 101-104.

[7] Giraud E,Baucheron S,Cloeckaert A. Resistance to fluoroquinolones in Salmonella: emerging mechanisms and resistance prevention strategies[J]. Microbes and Infection, 2006, 8(7): 1937-1944.

[8] Dumka V,Srivastava A. Disposition kinetics, urinary excretion and dosage regimen of levofloxacin formulation following single intravenous administration in crossbred calves[J]. Veterinary research communications, 2007, 31(7): 873-879.

[9] Destache C J,Pakiz C B,Larsen C,etal.Cerebrospinal fluid penetration and pharmacokinetics of levofloxacin in an experimental rabbit meningitis model[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2001, 47(5): 611-615.

[10] Albarellos G A,Ambros L,Landoni M. Pharmacokinetics of levofloxacin after single intravenous and repeat oral administration to cats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2005, 28(4): 363-369.

[11] Aboubakr M,Soliman A. Comparative Pharmacokinetics of Levofloxacin in Healthy and Renal Damaged Muscovy Ducks following Intravenous and Oral Administration[J]. Veterinary medicine international, 2014(1):390875.

[12] Hopkins K L,Davies R H,Threlfall E J. Mechanisms of quinolone resistance in Escherichia coli and Salmonella: recent developments[J]. International journal of antimicrobial agents, 2005, 25(5): 358-373.

[13] Gazew H,Abdouslam N,Hawkey P. Incidence of class 1 integrons in squatemary ammonium compound-polluted enviroment[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2005, 49(5): 1802-1807.

Stuy on Plasma Concentration ofLevofloxacin Hydrochloride in Cobrawith Intramuscular Injection

WANG Qiu-hua1, LI Rui-jun1, SU Jie-yu1, LIAO Li-li1, ZHANG Xin-wen2, ZENG Yun1

(College of Animal Science and Technology , Guangxi University , Nanning 530005 , China)

In the study,microbiological assay was conducted to detect plasma concentration of levofloxacin hydrochloride in cobra with intramuscular injection. The results showed that after administration,levofloxacin was detected and the average plasma concentration was 0.78 μg/mL at 0.25 hour, 0.88 μg/mL at 0.5 hour,and 0.81 μg/mL at 1 hour. Plasma concentration was decreased at 2 hour and could not be detected at 24 hour;TheTmaxwas 0.417±0.118, Cmaxwas 0.902±0.049 μg/mL,and t1/2λwas 13.812±1.864 h。 The experimental results indicated that drug absorption of levofloxacin hydrochloride was quikly and elimination was slowly in cobra.Data suggest that clinical application of levofloxacin hydrochloride in snakes is at a dosage of 10 mg/kg every 48 hours by intramuscular injection.

levofloxacin hydrochloride; cobra ; plasma concentration

ZENG Yun

2015-10-21

南寧科技局項目(20142085)

王秋華(1981-)，女，實驗師，碩士,主要從事獸醫藥理與毒理學研究工作，E-mail:345526457@qq.com

曾蕓，E-mail:yzeng323@163.com

.S859.79

A

0529-6005(2016)11-0110-03