運脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群調整作用的臨床研究※

王 靜 梁山玉 楊 燕

(廣東省深圳市兒童醫院中醫科，廣東 深圳 518038)

運脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群調整作用的臨床研究※

王 靜 梁山玉 楊 燕1

(廣東省深圳市兒童醫院中醫科，廣東 深圳 518038)

目的 觀察運脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒腸道菌群的調整治療作用。方法 將60例脾虛型遷延性腹瀉患兒隨機分為2組，治療組30例予運脾止瀉湯治療，對照組30例予蒙脫石散治療，2組療程均為7 d。觀察2組治療前后糞便pH值、糞便涂片球桿比及腸道菌群數量變化。另選同期健康體檢小兒30例作為正常組。結果 治療前治療組和對照組患兒糞便pH值分布在6～8，治療組pH值≥7者占77%，對照組pH值≥7者占70%；正常組小兒糞便pH值分布在5～6.5，pH值≤5.5者占84%。治療前治療組和對照組患兒糞便pH值與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后治療組與對照組患兒糞便pH值比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后糞便pH值與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療前治療組和對照組患兒糞便涂片球桿比分布在2/8～8/2 ，治療組球菌≥40%者占90.0%，對照組球菌≥40%者占96.5%；正常組小兒糞便涂片球桿比分布在1/9～3/7。治療前治療組與對照組患兒糞便涂片球桿比與正常組小兒比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后治療組和對照組患兒糞便涂片球桿比比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后糞便涂片球桿比與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療組治療前除腸球菌，其余腸道菌群數量與正常組比較差異均有統計學意義(P<0.05)，對照組治療前腸道菌群數量與正常組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；治療后治療組和對照組腸道菌群數量比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后腸道菌群數量與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 運脾止瀉湯對脾虛型遷延性腹瀉患兒的腸道菌群失調具有調整治療作用。

辨證分型；腹瀉；中藥療法；慢性病

小兒腹瀉是多發生于2歲以下小兒的常見病，其中又以脾虛型遷延性腹瀉最為常見，是影響小兒生長發育的重要因素之一，也是臨床治療的難題。中醫藥治療脾虛型遷延性腹瀉歷史悠久，療效可靠。目前，兒科領域尚缺乏中藥對于脾虛型遷延性腹瀉在腸道微生態系統調整方面的研究[1-2]。2011-09—2012-08，我們應用運脾止瀉湯治療小兒脾虛型遷延性腹瀉30例，并與蒙脫石散治療30例對照，觀察對患兒腸道菌群的影響，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部60例均為廣東省深圳市兒童醫院中醫科門診患兒，隨機分為2組。治療組30例，男 16 例，女 14 例；其中3個月～1歲7例，1～2歲 12 例，2～3歲 11 例；平均身高(83.75±10.60) cm；平均體質量(11.24±2.14) kg；平均病程(14.1±3.2) d。對照組30例，男 17 例，女 13 例；3個月～1歲8例，1～2歲10例，2～3歲12例；平均身高(83.15±11.12) cm，平均體質量(11.3±2.31) kg；平均病程(15.0±2.9) d。同時選取廣東省深圳市兒童醫院保健科健康體檢小兒30例為正常組，男15例，女15例；其中3個月～1歲6例，1～2歲13例，2～3歲11例；平均身高(84.20±10.16) cm，平均體質量(11.54±2.23) kg。3組性別、年齡、身高、體質量比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 病例選擇

1.2.1 西醫診斷標準 參照《諸福棠實用兒科學》[3]中遷延性腹瀉的診斷標準。①臨床表現：大便性狀有改變，呈稀便、水樣便、黏液便或膿血便；大便次數比平時增多。②病程：2周～2個月。③實驗室檢查：食物不耐受實驗為陽性。

1.2.2 中醫診斷標準 參照《中藥新藥臨床研究指導原則(試行)》[4]辨證為脾虛型，表現為①主證：久泄不止，或反復發作，大便稀薄，或水樣，含奶瓣或不消化食物殘渣。②次證：神疲納呆，面色少華，舌質偏淡，苔薄膩，脈弱無力。

1.2.3 納入標準 ①符合上述中、西醫診斷標準及脾虛型中醫辨證標準。②年齡3個月～3歲，性別不限。③食物不耐受實驗為陽性。

1.2.4 排除標準 ①細菌性痢疾、輪狀病毒腸炎、霍亂、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、食餌性腹瀉。②合并有嚴重的肝、腎、心血管和血液系統等原發性疾病。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 予運脾止瀉湯。藥物組成：肉豆蔻9 g，丁香1 g，赤石脂9 g，茯苓9 g，黃連3 g，寒水石9 g，蓮子6 g。每日1劑，水煎2次， <1歲20 mL，1～3歲30 mL，早、中、晚3次口服。

1.3.2 對照組 予蒙脫石散[博福-益普生(天津)制藥有限公司，國藥準字H20000690]，<1歲3 g/d，1～2歲3～6 g/d，>2歲6～9 g/d，均分早、中、晚3次口服。

1.3.3 療程及其他 2組療程均為7 d，根據患兒病情可給予口服補液鹽或靜脈補液糾正脫水及退熱等對癥處理。

1.4 觀察指標及方法 采集2組患兒及正常組小兒新鮮的自然排出的大便1 g置于密閉的無菌便盒中，常溫下快速(最好10 min內)送檢。觀察其性狀、顏色，測pH值，涂片革蘭染色檢查球菌與桿菌所占比例，同時做細菌培養。

1.4.1 糞便pH值測定 pH試紙(上海化學試劑總廠試劑三廠)的測試范圍為5.5～9.0，取試紙1條浸入糞便中，30 s后取出與標準比色卡比較得出pH值。

1.4.2 糞便涂片 用無菌棉簽挑取新鮮糞便直接涂抹在潔凈的載玻片上，以30 °～40 °角勻速推片，面積約( 1～1.5) cm×2 cm，自然干燥后在酒精燈火焰上通過3次固定，革蘭染色，油鏡下計數1 000個細菌，計算球菌與桿菌的比例(簡稱球桿比)。

1.4.3 腸道菌群檢測 ①標本的稱量和稀釋：在稱取標本前，分別在9個滅菌離心管內加入0.9%氯化鈉注射液0.9 mL待用。用天平稱0.1 g糞便于離心管中，加入0.9%氯化鈉注射液0.9 mL，在振蕩器上混合均勻，將標本稀釋呈系列10-1、10-2、10-3……10-9，連同原液共10個稀釋度；②接種：取上述標本系列稀釋液0.01 mL分別接種于用于培養雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌、大腸桿菌和腸球菌的TPY、MRSA、KV、EMB、PZ選擇性培養基上，每種稀釋度接種3滴，計數時取其菌落的平均數；③培養：將TPY、MRSA、KV培養基放在厭氧罐中，放入厭氧產氣袋封閉，再置于37 ℃的孵育箱中培養48 h，將EMB、PZ培養基直接置于37 ℃的孵育箱中培養24 h；④菌落計數方法：確定目的菌后，采用平板活菌計數法[5]，按活菌計數公式計數，結果以每g糞便濕質量中菌落形成單位的對數值表示(1gCFU/g)。

2 結 果

2.1 治療組、對照組治療前后糞便pH值比較 見表1。

表1 治療組、對照組治療前后糞便pH值比較 例(%)

與正常組比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05

由表1 可見，治療前治療組和對照組患兒糞便pH值分布在6～8，治療組pH值≥7者占77%，對照組pH值≥7者占70%；正常組小兒糞便pH值分布在5～6.5，pH值≤5.5者占84%。治療前治療組和對照組患兒糞便pH值與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后治療組與對照組患兒糞便pH值比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后糞便pH值與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 治療組、對照組治療前后糞便涂片球桿比比較 見表2。

表2 治療組、對照組治療前后糞便涂片球桿比比較 例(%)

與正常組比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05

由表2可見，治療前治療組和對照組糞便涂片球桿比分布在2/8～8/2 ，治療組球菌≥40%者占90.0%，對照組球菌≥40%者占96.5%；正常組小兒糞便涂片球桿比分布在1/9～3/7。治療前治療組和對照組糞便涂片球桿比與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療后治療組和對照組糞便涂片球桿比比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后糞便涂片球桿比與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 治療組、對照組治療前后腸道菌群數量比較 見表3。

表3 治療組、對照組治療前后腸道菌群數量比較

腸道菌群治療組(n=30)治療前治療后對照組(n=30)治療前治療后正常組(n=30)腸球菌7.063±1.3585.721±0.778△6.153±0.958*6.136±0.8657.301±1.078乳酸桿菌7.588±1.319*10.080±1.270△7.316±1.145*8.295±1.14810.110±0.980雙歧桿菌7.444±1.377*9.732±1.704△7.054±1.275*7.908±1.37910.121±1.158類桿菌7.729±0.595*8.363±0.239△7.333±0.349*7.911±0.35610.948±1.258腸桿菌8.656±1.229*6.903±1.215△8.096±0.624*8.024±0.6295.928±0.858

與正常組比較，*P<0.05；與對照組治療后比較，△P<0.05

由表3可見，治療組治療前除腸球菌，其余腸道菌群數量與正常組比較差異均有統計學意義(P<0.05)，對照組治療前腸道菌群數量與正常組比較差異均有統計學意義(P<0.05)；治療后治療組和對照組腸道菌群數量比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組治療后腸道菌群數量與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討 論

遷延性腹瀉病因較復雜，與感染、食物過敏、乳糖不耐受、免疫功能低下及營養不良等相關。正常人體腸道內pH值多為5～6.5，腸道球桿比1/9～3/7，桿菌占明顯優勢。腹瀉遷延不愈，腸道內雙歧桿菌等有益的優勢菌減少，對乳糖的分解減弱，酸性產物減少，腸道內pH值上升，對有害菌的抑制作用下降，過路菌或條件致病菌如腸球菌、腸桿菌等異常繁殖，球桿比升高，導致腸道菌群失調[6]。蒙脫石散臨床適用于成人及兒童急、慢性腹瀉，對消化道黏膜具有很強的覆蓋保護能力，修復、提高黏膜屏障對攻擊因子的防御功能，具有平衡正常菌群和局部止痛作用。主要藥理為： ①覆蓋消化道黏膜，與黏液蛋白結合，增強黏液屏障，起到防止胃蛋白酶、膽鹽、溶血卵磷酯、非類固醇類抗炎藥、酒精及各種病毒、細菌及其毒素對消化道黏膜的侵害作用，可維護消化道的正常生理功能，同時還具有降低結腸過分敏感性的作用。②促進損傷的消化道黏膜上皮再生，修復損傷的細胞間橋，促使細胞緊密連接。③吸附消化道內氣體和各種攻擊因子，并使之失去致病作用，如輪狀病毒和致病性大腸桿菌、霍亂弧菌、金黃色葡萄球菌、幽門螺桿菌、空腸彎曲菌及其所產生的毒素。④平衡正常菌群，提高消化道免疫功能。⑤對消化道局部有止血作用(通過激活凝血因子Ⅶ和Ⅷ)。

小兒腹瀉屬中醫學泄瀉范疇，病位在脾胃，日久不愈者多有脾胃虛弱，不能腐熟水谷，水谷精微與糞便合污而下，表現為大便稀溏、次數增加、食欲不振、形體消瘦等一系列臨床表現。脾氣虛可導致或加重腸道菌群失衡[7-8]，故健運脾氣止瀉為治療小兒脾虛型遷延性腹瀉的關鍵治則。

運脾止瀉湯由已故全國著名中醫兒科專家王鵬飛教授針對脾虛瀉這一證型創立[9-10]。方中肉豆蔻溫中止瀉，赤石脂主澀，丁香降逆行氣，茯苓益氣健脾，黃連清熱燥濕，寒水石利水止渴，蓮子補脾止瀉。諸藥共用，標本兼治，共奏運脾止瀉之功。通過大鼠實驗觀察，運脾止瀉湯可以通過促進胃內蛋白質消化功能，促進小腸吸收功能，抑制胃腸運動，抑制腸黏膜分泌，修復小腸微絨毛等環節達到止瀉作用[11]。近年來有關中藥對腸道菌群作用的研究發現，健脾中藥對脾虛小鼠腸道菌群的失調具有一定的調節功能，對不同原因引起的動物胃腸道菌群失調具有調節和改善功能[12]。健脾益氣類中藥經現代藥理研究認為其中含有大量苷類和糖類物質及多種微量元素，這些苷類和糖類物質直接促進益生菌生長，恢復腸道正常菌群[13-14]。

本研究結果發現，治療前治療組、對照組的糞便常規檢查中，pH值全部≥6，腸道環境偏堿，球桿比則分布在3/7～8/2，有明顯球桿比倒置現象；同時進行的腸道菌群檢測中，腸桿菌、腸球菌等有害菌數量顯著增多，雙歧桿菌、乳酸桿菌、類桿菌等有益的優勢菌數量顯著減少；以上均與正常組比較差異有統計學意義(P<0.05)。這說明患有脾虛型遷延性腹瀉的患兒同時存在腸道菌群紊亂現象，脾虛證與腸道菌群紊亂密切相關。而治療后治療組患兒pH值、球桿比、腸道主要菌群種類及數量明顯改善，與正常組比較差異無統計學意義(P>0.05)，說明經中藥治療后患兒糞便pH值趨于正常，腸球菌、腸桿菌數量明顯減少，雙歧桿菌、類桿菌及乳酸桿菌明顯增多，接近同齡正常兒童的腸道內環境，球桿比基本恢復正常。對照組患兒治療前后腸道菌群數量無明顯改善，提示運脾止瀉湯療效優于西藥蒙脫石散。脾虛型遷延性腹瀉存在腸道菌群失衡，運脾止瀉湯對于改善患兒大便次數、性狀，改善和調節患者腸道菌群具有一定療效，但具體發生作用的藥物有效成分還有待深入研究。

[1] 穆艷順，劉花玲，劉萍.蒼苓止瀉口服液聯合蒙脫石散治療小兒腹瀉病的療效觀察[J].中國醫學創新，2014，11(2):96-98.

[2] 斯琴.治療小兒腹瀉體會[J].中國蒙醫藥，2014，9(1):80-81.

[3] 胡亞美，江載芳.諸福棠實用兒科學[M].7版.北京：人民衛生出版社，2002:1286-1299.

[4] 鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則(試行)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2002:272-276.

[5] 張艷，劉均娥，張晶，等.平板活菌計數法檢測糞便中的腸道菌群[J].首都醫科大學學報，2008，29(1)：85-86.

[6] 姜秀菊.腸道微生態失調的臨床及干預[J].中國微生態學雜志，2002，14(2)：107-108.

[7] 吳三明，張萬岱.脾虛泄瀉患者腸道微生態學的初步研究[J].中國中西醫結合脾胃雜志，1996，4(4)：203-204.

[8] 官惠群.自擬健脾止瀉湯治療小兒腹瀉療效分析[J].按摩與康復醫學，2014，5(7):129-130.

[9] 楊燕，閆慧敏.運脾止瀉顆粒治療小兒腹瀉的臨床療效觀察[J].中國中西醫結合雜志，2006，26(10)：899-902.

[10] 陳佑林.王鵬飛用藥經驗初探[J].中國中醫基礎醫學雜志，2009，15(2)：125-127.

[11] 郭健，李國彰，趙淑英，等.運脾止瀉顆粒抗腹瀉的機制研究[J].中國藥師，2009，12(7)：844-846.

[12] 任光友，張貴林，盧素琳，等.四君子湯對動物腸菌失調及正常胃腸功能的藥理研究[J].中成藥，2000，22(7):504-506.

[13] 馮興忠，張婭南，姜欣，等.加味補中益氣湯促進腸道益生菌生長的實驗研究[J].中國微生態學雜志，2008，20(2):159-160.

[14] 衛小平.益生菌在小兒頑固性腹瀉中的療效分析[J].中華全科醫學，2014，12(1):87-89.

(本文編輯：習 沙)

Adjustment effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea

WANGJing*,LIANGShanyu,YANGYan.

*DepartmentofTraditionalChineseMedicine,ShenzhenChildren'sHospitalinGuangdongProvince,Guangdong,Shenzhen518038

Objective To observe the adjustment and therapeutic effects of decoction for activating spleen and anti-diarrhea on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea. Methods 60 children with spleen-deficiency type protracted diarrhea were randomly divided into two groups. 30 cases in treatment were treated by decoction for activating spleen and anti-diarrhea, and 30 cases in control group were treated by montmorillonite powder, continuously treatment for 7 d. The feces pH, the proportion of cocci and bacilli of feces smear, and the intestinal microflora before and after treatment were observed in two groups. Another 30 healthy children were conducted as the normal group. Results The feces pH before treatment was distributed on 6 to 8 in two groups. The pH greater than or equal to 7 account for 77% and 70% of the treatment group and control group, respectively. The feces pH in normal group was distributed on 5 to 6.5, and the pH over than or equal to 5.5 account for 84%. The feces pH before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the feces pH after treatment between treatment and normal group (P>0.05). The proportion of cocci and bacilli of feces smear was distributed on 2/8 to 8/2 before treatment in treatment group and control group, and the coccus greater than or equal to 40% account for 90% and 96.5% in treatment and control group, respectively. The proportion of cocci and bacilli in normal group was distributed on 1/9 to 3/7. The proportion of cocci and bacilli before treatment in treatment and control group had significant difference with that in normal group (P<0.05). There were statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and control group (P<0.05). There were no statistical differences on the proportion of cocci and bacilli after treatment between treatment and normal group (P>0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between treatment and normal group (P<0.05), except the enterococcus. There were statistical differences on the number of intestinal flora before treatment between control and normal group (P<0.05). There were statistical differences on the number of intestinal flora after treatment between treatment and control group (P<0.05), and there were no statistical differences between treatment and normal group (P>0.05). Conclusion Decoction for activating spleen and anti-diarrhea has adjustment effects on intestinal flora in children with spleen-deficiency type protracted diarrhea.

Syndrome differentiation; Diarrhea; Traditional Chinese herbs therapy; Chronic disease

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.10.007

※ 項目來源：2011年深圳市科技計劃項目(醫療衛生類)(編號：201103145)

王靜(1976—)，女，副主任醫師，學士。從事中醫兒科臨床工作。

R442.2；R725.746.205；R289.6

A

1002-2619(2016)10-1474-05

2014-06-27)

1 首都醫科大學附屬北京兒童醫院中醫科，北京 100045