牛呼吸道綜合癥多重PCR檢測方法的建立

周玉龍，吳丹丹，周金玲，樸范澤

（黑龍江八一農墾大學動物科技學院，預防獸醫重點實驗室，大慶 163319）

牛呼吸道綜合癥多重PCR檢測方法的建立

周玉龍，吳丹丹，周金玲，樸范澤

（黑龍江八一農墾大學動物科技學院，預防獸醫重點實驗室，大慶 163319）

為了建立針對BRDC常見的主要病原牛黏膜病病毒（BVDV）、牛副流感病毒3型（BPIV-3）和牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）的一步法多重RTPCR，引入了新型的具有反轉錄酶和DNA聚合酶活性的rTth DNA聚合酶，通過對退火溫度和引物濃度的優化，敏感性和特異性的檢測，最終確定最佳退火溫度為54.5℃，最佳引物濃度為0.6 uM。對BPIV-3、BRSV和BVDV的最小檢測量分別為162、16和21個TCID50/0.1 mL。與牛傳染性鼻氣管炎病毒、冠狀病毒、腺病毒，以及多殺性巴氏桿菌、肺炎鏈球菌、化膿隱秘桿菌、溶血性曼氏桿菌等沒有交叉反應。建立起的mRT-PCR檢測方法可用于鼻腔分泌物的檢測，為進一步mRT-PCR試劑盒的組裝奠定了基礎。

牛呼吸道綜合癥；病毒；mRT-PCR

牛呼吸道綜合癥（bovine respiratory disease complex，BRDC）是多因素的，環境條件與多種病毒和細菌性病原的共同作用使牛產生嚴重的呼吸道疾病。應激因素像溫度、飼養密度、灰塵、濕度和長途運輸等[1-2]，能夠導致機體免疫力下降，繼而感染機會性病毒或者細菌性病原。國內外研究表明牛黏膜病病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus-3，BPIV3）和牛呼吸道合胞體病毒（bovine respiratory syncytial virus，BRSV）是與BRDC相關的常見病原，這些病毒常常作為BRDC的原發性病原。一般認為這些病毒能導致牛免疫系統抑制和破壞呼吸道上皮，使常見的機會性的二級病原更容易感染，像溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、昏睡嗜血桿菌、化膿隱秘桿菌和牛支原體等，從而導致臨床上呈現BRDC[3-4]。……