牛糞發(fā)酵沼液中產(chǎn)甲烷菌的分離及分子鑒定

陳楠楠，葉麗麗，王華欣，祝婧，喬波，趙靜虎，劉通，岳山，周金玲，劉宇，朱戰(zhàn)波

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院，大慶 163319；2.黑龍江省獸醫(yī)科學研究所）

牛糞發(fā)酵沼液中產(chǎn)甲烷菌的分離及分子鑒定

陳楠楠1，2，葉麗麗1，王華欣1，祝婧1，喬波1，趙靜虎1，劉通1，岳山1，周金玲1，劉宇1，2，朱戰(zhàn)波1

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院，大慶 163319；2.黑龍江省獸醫(yī)科學研究所）

為了確定牛糞發(fā)酵沼液中疑似菌株的生物特性和種屬關(guān)系。采用Hungate滾管技術(shù)、厭氧培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢、PCR擴增技術(shù)和抗生素耐受性鑒定等方法進行分析。實驗結(jié)果表明，牛糞發(fā)酵沼液分離到了一株革蘭氏陽性菌，能夠利用CO2，最適生長溫度為37℃，單獨或成對存在。菌落呈灰白色，光滑，表面凸起。PCR擴增出1 200 bp的16S rDNA片段，測序結(jié)果表明，該分離菌為產(chǎn)甲烷短桿菌。

產(chǎn)甲烷菌；厭氧培養(yǎng)；沼氣

產(chǎn)甲烷菌（methanogen）是一類以產(chǎn)生大量甲烷氣體作為能量代謝的終產(chǎn)物的特殊原核微生物，廣泛存在于各種極端厭氧環(huán)境中，如反芻動物的瘤胃和沼氣反應(yīng)器等人為環(huán)境中[1]，沼氣發(fā)酵過程是一個由多種微生物聯(lián)合，交替作用的復雜生化過程[2]。沼氣發(fā)酵微生物種類繁多，分為不產(chǎn)甲烷群落和產(chǎn)甲烷群落[3]，并且，在沼氣發(fā)酵過程中，產(chǎn)甲烷菌是關(guān)鍵微生物[4]。人們在以往有關(guān)沼氣發(fā)酵微生物的研究中重點關(guān)注沼氣發(fā)酵三個階段及各階段中不同微生物的作用[5-6]，發(fā)現(xiàn)沼氣發(fā)酵限速步驟是產(chǎn)甲烷階段[7]，而其中起主導作用的是產(chǎn)甲烷菌。產(chǎn)甲烷菌作為自然界碳素循環(huán)中厭氧生物鏈的最后一個成員，分析沼氣發(fā)酵過程中產(chǎn)甲烷菌的變化，對于自然界中的其他許多循環(huán)具有不可估量的推動力[8]。……