富血小板纖維蛋白的研究進(jìn)展

辛酉鳳，陳 冰，趙 金*

（1內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；2．內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000）

富血小板纖維蛋白的研究進(jìn)展

辛酉鳳1，陳 冰2，趙 金*2

（1內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；2．內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000）

富血小板纖維蛋白（platelet-rich fibrin，PRF）屬于新一代血小板濃縮物，由自體血液離心而成，離心過程不需使用任何外源性添加物，很好地避免了過敏反應(yīng)、免疫排斥、交叉感染、倫理道德等問題，而且制作過程簡便，成本低廉，目前已應(yīng)用于口腔頜面部外科、整形外科、運(yùn)動醫(yī)學(xué)、耳外科和泌尿外科中。PRF在加速軟、硬組織愈合中發(fā)揮重要的作用已被國內(nèi)外廣大學(xué)者所認(rèn)可。本文就富血小板纖維蛋白的研究進(jìn)展作一綜述。

富血小板纖維蛋白；A-PRF；S-PRF；i-PRF

1 富血小板纖維蛋白種類及制備方法

PRF，即廣為人知的Choukroun’s PRF，是Choukroun于2001年在法國制備的繼富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）之后的第二代血小板濃縮物。傳統(tǒng)的PRF制備方法為：采集 10 ml 健康人（無傳染病、無血液系統(tǒng)疾病、無惡性腫瘤等疾病，未服用阿司匹林及其他任何影響血小板功能的藥物，且女性志愿者不在月經(jīng)期）靜脈血至不含抗凝劑的玻璃試管內(nèi)（李龍等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明玻璃離心管制備的 PRF，其持續(xù)一周釋放的VEGF 含量高于塑料離心管制備的PRF）[1]，由于不添加任何抗凝劑，采集出的靜脈血應(yīng)立即以 3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心 10 min。制備PRF的標(biāo)準(zhǔn)裝置為產(chǎn)自法國尼斯的PC-02臺式離心機(jī)和一套專門用于制備PRF的器械。離心后試管內(nèi)的血液自然地分為三部分，不含細(xì)胞的血漿在最上層，即貧血小板血漿（plateletpoor plasma，PPP），最底層為紅細(xì)胞層，中間層即為富血小板纖維蛋白PRF （platelet-rich fibrin）。以組織鑷將PRF取出，并以眼科剪剪去其下部的紅細(xì)胞層，PRF 凝膠有大量的血小板和白細(xì)胞聚集在紅細(xì)胞層和凝膠的交界處，因此在制取凝膠時底部應(yīng)該留有少許的紅細(xì)胞層，以防止血小板和白細(xì)胞丟失。[2]除去PRF凝膠中的血清，我們即可得到PRF薄膜。也有學(xué)者以2700 r/min的轉(zhuǎn)速離心12 min的方法得到的PRF，這種PRF由于富含白細(xì)胞，也稱為L-PRF（leukocyte-PRF）。有實(shí)驗(yàn)證明不同的離心速度沒有對PRF三維立體結(jié)構(gòu)造成影響，但是3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min制備的PRF可釋放更多的生長因子[3]。這種制備方法也是目前國內(nèi)外最常用 PRF 的制備方法。有實(shí)驗(yàn)證明，制備出的PRF保存于 4℃的條件下能釋放出更多的生長因子。

Shahram Ghanaati等提出了兩種新的PRF制備方法，并將其命名為S-PRF和A-PRF。

（1）S-PRF：將9ml血加入內(nèi)有玻璃涂層的無菌的真空塑料管，以2700 r/min的轉(zhuǎn)速離心12 min得到。

（2）A-PRF：將10 mL血加入無菌的真空塑料管，以1500 r/min的轉(zhuǎn)速離心 14min得到。也有學(xué)者以1300 r/min的轉(zhuǎn)速離心14 min得到A-PRF。并以1300 r/min的轉(zhuǎn)速離心更短的時間（8 min）得到A-PRF+。并且證明了低轉(zhuǎn)速下獲得的A-PRF和A-PRF+在促進(jìn)組織生長方面比PRF更有效。

1.2 Xuzhu Wang等人于2017年第一次提出i-PRF（Injectable Platelet-Rich Fibrin）的概念。這是一種最新種類的PRF，這種PRF是以更低的速度700r/min，離心 3 min得到的。他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了與第一代血小板濃縮物PRP相比，i-PRF 顯著的動員更多的細(xì)胞進(jìn)行遷移。此外，i-PRF組中的膠原1含量與對比組相比是最多的。

2 富血小板纖維蛋白的結(jié)構(gòu)特性、組成成分及其發(fā)揮作用的機(jī)制

Choukroun等認(rèn)為PRF纖維基質(zhì)的生物學(xué)作用是由富血小板纖維蛋白的三維立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與 PRF 內(nèi)結(jié)合的生長因子共同決定的。

（1）富血小板纖維蛋白的結(jié)構(gòu)特性

實(shí)驗(yàn)證明PRF的顯微結(jié)構(gòu)主要是纖維蛋白構(gòu)成的三維立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，與周圍的纖維蛋白網(wǎng)相比，中間的均較為疏松。血小板在聚集時采用血小板集合物的形式沿著纖維蛋白束進(jìn)行[2]。PRF的纖維蛋白能將血小板和生長因子以化學(xué)鍵結(jié)合起來，而后緩慢釋放，從而延長生長因子的作用時間。在Doham DM等的研究中認(rèn)為在制備過程中的緩慢的聚合過程產(chǎn)生的纖維蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)似乎與人類天然纖維蛋白的結(jié)構(gòu)非常相似，可對高效的細(xì)胞移動增殖等活動進(jìn)行誘導(dǎo)。這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)擁有松散的組織、大孔隙的網(wǎng)狀和良好的纖維彈性，能夠使物質(zhì)所需的氧氣與相關(guān)營養(yǎng)成分在這種特殊結(jié)構(gòu)的周圍進(jìn)行更好地?cái)U(kuò)散，從而加速組織的愈合過程。PRF纖維蛋白的生物學(xué)作用：纖維蛋白能刺激生長因子的基因表達(dá)，使內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合到纖維蛋白、纖連蛋白和玻連蛋白上，為各種細(xì)胞的附著、遷移與分化提供場所[4]。纖維蛋白的作用可概括為：①纖維蛋白是血管化的天然誘導(dǎo)物。②纖維蛋白結(jié)構(gòu)是免疫反應(yīng)的天然支持。③纖維蛋白引導(dǎo)創(chuàng)面的組織愈合并影響上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的新陳代謝。

（2）富血小板纖維蛋白的組成成分

根據(jù)PRF的制備方法和血液的成分我們可以得知：PRF中含有血液中除血漿和紅細(xì)胞外的所有成分，即血小板、纖維蛋白、白細(xì)胞、生長因子（如血小板源性生長因子，轉(zhuǎn)移性生長因子-β1，轉(zhuǎn)移性生長因子-β2，類胰島素生長因子，表皮生長因子和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子等）等。

①血小板的作用：正如富血小板纖維蛋白的名字所示，血小板是PRF 的主要成分。血小板內(nèi)的а-顆粒被凝血酶、膠原等激活后釋放多種血小板源性生長因子，這些生長因子一方面促進(jìn)細(xì)胞的分化，血管增生和成骨細(xì)胞的增殖，同時抑制破骨細(xì)胞的功能。與重組生長因子不同，這些生長因子之間的比例是天然的，它們之間具有協(xié)同效應(yīng)并與其他促進(jìn)細(xì)胞活性的因子相互作用相互影響，共同維持著組織環(huán)境的平衡，對創(chuàng)傷愈合，特別是骨缺損的修復(fù)、再生起著重要的作用。

②纖維蛋白的作用：如上所述，PRF的纖維蛋白疏松多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使得生長因子及氧氣得以輕松的彌散至細(xì)胞周圍，促進(jìn)細(xì)胞分化，加速組織愈合過程。

③白細(xì)胞的作用：PRF中幾乎包含了血液中所有的白細(xì)胞。因此很容易推論富血小板纖維蛋白具有更高效的抗感染作用。有臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PRF 能減少手術(shù)創(chuàng)傷后的疼痛和水腫，減少甚至避免發(fā)生感染。

④細(xì)胞因子的作用：存在于PRF中的各種細(xì)胞因子在修復(fù)軟組織的過程中發(fā)揮著相應(yīng)的作用，且互相促進(jìn)、互相協(xié)作，最終使具有強(qiáng)大功能的修復(fù)調(diào)節(jié)系統(tǒng)得以形成。其能使成脂細(xì)胞的增殖與分化加快，有利于軟組織的快速愈合，還能使周圍組織的炎癥反應(yīng)得到減少，加快創(chuàng)口愈合并使生長因子的作用時間有所延長。

3 富血小板纖維蛋白的發(fā)展前景

PRF是第二代自體血小板濃縮物，其優(yōu)點(diǎn)有：很好地避免了過敏反應(yīng)、免疫排斥、交叉感染、倫理道德等問題。與第一代血小板濃縮物PRP相比，PRF的制備過程極為簡單，無需添加任何抗凝劑和凝膠劑，成本低廉。PRF的制備方法已經(jīng)十分成熟，法國尼斯公司已開發(fā)出一套專門用于制備PRF的器械，為標(biāo)準(zhǔn)化制備PRF提供了方便。由于PRF的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和組成成分，PRF可作為自體生物填充材料，廣泛的應(yīng)用于與組織修復(fù)、創(chuàng)面愈合等相關(guān)臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，為廣大患者帶來福音。

[1]李 龍,趙建輝,劉 斌,等.富血小板纖維蛋白體外釋放VEGF影響因素的探討[J].中國美容醫(yī)學(xué),2012(03):427-430.

[2]孫英華,王稚英.富血小板纖維蛋白凝膠和膜顯微與超微結(jié)構(gòu)研究[J].中國醫(yī)學(xué)工程,2011(07):65-67.

[3]程亞楠,徐 普,毛秋華,等.離心速度對富血小板纖維蛋白生物學(xué)特性的影響[J].現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志,2016(04):204-207.

[4]朱衛(wèi)麗,薛小萍,劉衍春.富血小板纖維蛋白在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國輸血雜志,2016(05):545-548.

本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-6681.2017.09.48.02

趙 金