快速檢測(cè)試紙條法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米種子的原理及步驟分析

馬 玢

（寧夏回族自治區(qū)種子工作站，寧夏 銀川 750001）

快速檢測(cè)試紙條法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米種子的原理及步驟分析

馬 玢

（寧夏回族自治區(qū)種子工作站，寧夏 銀川 750001）

為了確保玉米種子用種安全，嚴(yán)厲打擊非法生產(chǎn)經(jīng)營轉(zhuǎn)基因種子。通過快速檢測(cè)試紙條法對(duì)雜交玉米種子進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)，以期為實(shí)驗(yàn)室研究提供依據(jù)。

玉米種子；轉(zhuǎn)基因；快速檢測(cè)試紙

轉(zhuǎn)基因作為一種新的生物技術(shù)手段，在給人類帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益的同時(shí),卻也存在潛在的環(huán)境和食用安全風(fēng)險(xiǎn)。由于轉(zhuǎn)基因玉米及其產(chǎn)品對(duì)人類健康和生態(tài)環(huán)境可能存在潛在的不利影響,在轉(zhuǎn)基因玉米及其產(chǎn)品研究、試驗(yàn)、生產(chǎn)等過程中,對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米及其產(chǎn)品的檢測(cè)是非常重要的。目前，對(duì)于轉(zhuǎn)基因玉米種子非法擴(kuò)散行為，我國的《種子法》《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》等出臺(tái)了相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種子安全監(jiān)管條例，堅(jiān)決打擊種種形式的轉(zhuǎn)基因玉米品種流入市場(chǎng)，確保玉米種子生產(chǎn)安全。在打擊非法生產(chǎn)經(jīng)營轉(zhuǎn)基因種子工作中，若能采用一種快速檢測(cè)轉(zhuǎn)基因成分的手段，在轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物實(shí)驗(yàn)室研究和試驗(yàn)、品種區(qū)域試驗(yàn)和審定、種子生產(chǎn)和銷售、產(chǎn)品加工等各重點(diǎn)環(huán)節(jié)加以監(jiān)管，就不會(huì)讓轉(zhuǎn)基因玉米種子流入市場(chǎng)。而快速檢測(cè)試紙條法能較好地對(duì)雜交玉米種子進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、快速、成本低、方便攜帶，適于快速檢測(cè)的需要。

1 快速檢測(cè)試紙組成

轉(zhuǎn)基因檢測(cè)試紙分別由襯板、樣品墊、吸收墊、結(jié)合墊、硝化纖維膜(NC膜)、檢測(cè)帶和控制帶等組成。其中樣品墊、結(jié)合墊、檢測(cè)帶和控制帶是快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)技術(shù)的核心部分。試紙條檢測(cè)時(shí)，樣品墊是直接與樣品溶液接觸的部分，有過濾樣品溶液中的非可溶性雜質(zhì)成分的作用；含標(biāo)記有免疫膠體金顆粒的金標(biāo)抗體位于結(jié)合墊中，與檢測(cè)樣品中的特定蛋白發(fā)生抗原—抗體特異性結(jié)合；含有與特定蛋白發(fā)生抗原—抗體特異性反應(yīng)的捕獲抗體位于檢測(cè)帶；含有與過量的金標(biāo)抗體發(fā)生抗原—抗體特異性反應(yīng)的捕獲抗體位于控制帶。

2 快速檢測(cè)原理

檢測(cè)前，將選取的樣品加水進(jìn)行研磨，溶解后獲取蛋白樣品溶液。檢測(cè)時(shí)，首先將樣品墊充分浸在已提取好的蛋白樣品溶液中，在毛細(xì)吸收作用下，樣品溶液由樣品墊沿NC膜向吸收墊流動(dòng)。樣品溶液中的特定蛋白在流經(jīng)結(jié)合墊時(shí)先與膠體金標(biāo)記的抗體發(fā)生抗原—抗體的特異性結(jié)合作用，再在流經(jīng)檢測(cè)帶時(shí)抗原—抗體復(fù)合物被固定在檢測(cè)帶上的捕獲抗體結(jié)合，最后聚集形成肉眼可見的金標(biāo)條帶，進(jìn)而顯示檢測(cè)結(jié)果為陽性。過量的金標(biāo)抗體仍會(huì)繼續(xù)流動(dòng)被固定在控制帶上的第二抗體結(jié)合聚集形成肉眼可見的條帶，進(jìn)而顯示檢測(cè)的結(jié)果有效。

3 快速檢測(cè)試紙的操作步驟

(1)檢測(cè)前，可選取待檢測(cè)玉米樣品的種子、葉子、籽苗等樣本進(jìn)行研磨，并用一定比例的純水進(jìn)行稀釋。

(2)將樣本混勻，靜置至分成上清液和沉淀兩層，取上清液作為檢測(cè)樣本。

(3)取出用于檢測(cè)的試紙條，將檢測(cè)的樣品端垂直向下插入準(zhǔn)備好的檢測(cè)樣本上清液中。

(4)檢測(cè)過程中，檢測(cè)的試紙條一直浸在檢測(cè)樣本上清液中，等待5～10 min，即可閱讀檢測(cè)結(jié)果。

4 快速檢測(cè)試紙的種類

4.1 BT Cry1Ab/Ac Test Kit

快速、定性檢測(cè)植物樣本中是否含有特異性抗蟲轉(zhuǎn)基因BT產(chǎn)物BT Cry1Ab/Ac蛋白。

BT是蘇云金芽孢桿菌在代謝過程中產(chǎn)生的一種殺蟲蛋白，作為生物農(nóng)藥廣泛使用在瓜果、蔬菜等農(nóng)作物上。通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)等方法將BT基因轉(zhuǎn)入棉花植株的細(xì)胞中后，棉花植株體內(nèi)可以合成BT殺蟲蛋白。棉鈴蟲等害蟲取食后，BT蛋白在昆蟲的堿性腸道中轉(zhuǎn)變?yōu)槎舅厥购οx的腸道細(xì)胞受到破壞，短時(shí)間內(nèi)使害蟲死亡。

4.2 CP4 EPSPS Test Kit

快速、定性檢測(cè)植物樣本中是否含有特異性抗草甘膦除草劑轉(zhuǎn)基因CP4 EPSPS蛋白。

草甘膦是滅生性莖葉處理除草劑，用其處理植物以后，植物體內(nèi)含有這類氨基酸的蛋白質(zhì)合成會(huì)受阻，進(jìn)而影響一系列代謝過程，導(dǎo)致植物死亡。EPSPS是除草劑草甘膦的靶標(biāo)酶。

4.3 BAR Test Kit

快速、定性檢測(cè)植物樣本中是否含有特異性抗草丁膦除草劑轉(zhuǎn)基因PAT蛋白。 草丁膦又稱草銨膦，是廣譜滅生性的有機(jī)磷類除草劑，能抑制植物的光合作用，導(dǎo)致植物死亡。BAR基因是抗除草劑基因，其編碼表達(dá)的產(chǎn)物PAT蛋白，能使草丁膦對(duì)植物無毒性作用。

5 快速檢測(cè)試紙的優(yōu)越性

目前，PCR檢測(cè)法是國內(nèi)外檢測(cè)玉米種子是否含有轉(zhuǎn)基因成分最常用的方法，所需要的儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，檢測(cè)周期較長，檢測(cè)費(fèi)用高，地點(diǎn)局限在檢測(cè)機(jī)構(gòu)。轉(zhuǎn)基因快速檢測(cè)試紙條法具有成本低、靈敏度高、特異性強(qiáng)、通用性廣和反應(yīng)速度快、耐儲(chǔ)存、易攜帶等多方面的優(yōu)勢(shì)，可以滿足農(nóng)作物在種植、加工及貿(mào)易中的監(jiān)控需要。其與傳統(tǒng)PCR方法相比，縮短了工作時(shí)間，提高了工作效率。

1005-2690（2017）10-0136-02

S513

A

2017-09-25）