從調(diào)節(jié)鈣離子通道探討中醫(yī)推拿治療頸性眩暈的研究

范志勇，賴瑞美，張競(jìng)之，吳 山，陳利國(guó)

從調(diào)節(jié)鈣離子通道探討中醫(yī)推拿治療頸性眩暈的研究

范志勇1，賴瑞美2，張競(jìng)之3，吳 山1，陳利國(guó)4

頸性眩暈是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，既往研究表明：推拿手法作為機(jī)械力刺激之一，治療頸性眩暈除固有生物力學(xué)效應(yīng)，關(guān)鍵機(jī)制在于發(fā)揮手法的神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)機(jī)制，通過(guò)調(diào)控血管內(nèi)皮功能是手法治療頸性眩暈的細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制的關(guān)鍵靶點(diǎn)，血管內(nèi)皮功能的調(diào)控收到多種因素干擾，其中鈣離子(Ca2+)通道在機(jī)械力介導(dǎo)的力-生化效應(yīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制起關(guān)鍵作用。從中醫(yī)學(xué)角度觀察推拿的活血化瘀，理筋整復(fù)效應(yīng)，改善頸椎病所致頭暈、頭痛癥狀，認(rèn)為其機(jī)制可能通過(guò)推拿力學(xué)刺激調(diào)節(jié)鈣離子通道，促進(jìn)血管內(nèi)皮功能的改善。

頸性眩暈；血管內(nèi)皮功能；鈣通道；中醫(yī)推拿

頸性眩暈指頸椎關(guān)節(jié)及相關(guān)軟組織(關(guān)節(jié)囊、韌帶、神經(jīng)、血管、肌肉等)影響椎基底動(dòng)脈顱外段導(dǎo)致供血不足而出現(xiàn)眩暈的一種綜合征，這類病癥與血管密切相關(guān)，頸性眩暈出現(xiàn)后常伴隨內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)等血管內(nèi)皮功能改變，出現(xiàn)血流動(dòng)力學(xué)變化導(dǎo)致循環(huán)機(jī)制障礙，因此如何盡早修復(fù)損傷血管內(nèi)皮功能成為提高臨床療效的新靶點(diǎn)，鈣離子(Ca2+)通道不僅可有效干預(yù)血管內(nèi)皮功能，而且作為介導(dǎo)力-生化效應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在介導(dǎo)如推拿等機(jī)械力刺激方面有重要意義。從目前研究看，推拿治療頸性眩暈產(chǎn)生活血化瘀研究集中在手法的生物力學(xué)效應(yīng)，多著眼于頸部軟組織、骨關(guān)節(jié)等宏觀層面，缺少細(xì)胞分子等微觀層面探討。本文分析Ca2+通道與血管內(nèi)皮功能、微觀瘀血、機(jī)械力刺激關(guān)系、推拿治療頸性眩暈的中西醫(yī)作用機(jī)制，為手法抗眩暈效應(yīng)的細(xì)胞力學(xué)機(jī)制提出新思路。

1 Ca2+通道與血管內(nèi)皮功能的聯(lián)系

1.1 Ca2+通道與血管內(nèi)皮功能Ca2+在細(xì)胞生命活動(dòng)中具有重要作用，Ca2+通道是一種跨越細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，嚴(yán)格控制Ca2+進(jìn)入細(xì)胞過(guò)程。Ca2+在機(jī)體內(nèi)保持穩(wěn)態(tài)，對(duì)維持機(jī)體功能有重要作用，幾乎所有類型細(xì)胞各種功能均不同程度地由Ca2+調(diào)控[1]，[Ca2+]i是細(xì)胞生理功能重要物質(zhì)基礎(chǔ)。血管內(nèi)皮細(xì)胞為覆蓋于血管內(nèi)膜表面的單層扁平或多角形細(xì)胞，具有多種生理功能：調(diào)節(jié)血管通透性和血管張力功能；信息傳遞和內(nèi)分泌功能；維持凝血功能平衡和血液流動(dòng)狀態(tài)；參與炎癥反應(yīng)等。生理情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的舒-縮血管因子(ET及NO)相互作用，處于動(dòng)態(tài)平衡，從而維持正常血管張力[2]。ET-1是判斷眩暈程度的敏感指標(biāo)，可能在頸性眩暈發(fā)病、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要的神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)作用[3]。Ca2+通道和血管內(nèi)皮細(xì)胞關(guān)系密切，ET-1通過(guò)激活Ca2+通道增加Ca2+內(nèi)流，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞收縮[4-5]。Ca2+內(nèi)流可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)和血小板衍生因子(PDGF)，以自分泌和旁分泌方式刺激血管生成[6]。內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒張因子如NO、前列環(huán)素(PGI2)、內(nèi)皮依賴性超極化因子(EDHF)，主要依賴于細(xì)胞[Ca2+]i升高，可見(jiàn)Ca2+調(diào)控對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能起重要作用[7]。

臨床發(fā)現(xiàn)Ca2+阻滯劑對(duì)血管內(nèi)皮有一定的保護(hù)作用，主要機(jī)制有[8]：調(diào)控受損血管內(nèi)皮的舒張功能，許多中藥具有Ca2+通道阻滯劑作用，如丹參酮、田七總皂甙、川芎嗪等，可通過(guò)阻斷Ca2+經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜上的Ca2+通道進(jìn)入細(xì)胞，“內(nèi)治之理即外治之理”，具有活血化瘀效應(yīng)的手法是否也具有治療、鈣通道阻滯劑(CCB)樣作用，目前尚無(wú)定論。

1.2 Ca2+通道與微觀血瘀證的相關(guān)性 陳利國(guó)等[9]發(fā)現(xiàn)，血瘀證與血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度密切相關(guān)，血瘀證血管內(nèi)Ca2+升高，當(dāng)胞內(nèi)Ca2+異常升高將引起鈣超載，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷和功能代謝障礙。運(yùn)用活血中藥復(fù)方對(duì)血瘀證動(dòng)物模型干預(yù)發(fā)現(xiàn)，所有中藥復(fù)方均具有Ca2+通道阻斷劑樣作用，可增加細(xì)胞外Ca2+濃度，益氣活血復(fù)方可降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+，具有血管內(nèi)皮保護(hù)作用，這可能是活血化瘀方藥治療血瘀證的間接作用機(jī)理之一[10]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷及功能改變是血瘀證形成的重要原因，血管內(nèi)皮功能障礙，有明顯的血瘀微觀分子生物學(xué)病理基礎(chǔ)改變[11-12]。頸性眩暈的發(fā)病基礎(chǔ)是椎基底動(dòng)脈顱外段病變，是微觀血瘀貫穿頸性眩暈的全程[13]，因此調(diào)控Ca2+通道調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能在防治頸性眩暈、血瘀證具有重要作用。

1.3 Ca2+通道介導(dǎo)機(jī)械力刺激中的作用 Ca2+是細(xì)胞內(nèi)最重要的第二信使之一，作為細(xì)胞信使傳遞胞外信號(hào)，是多種受體激動(dòng)后信息傳遞的中心環(huán)節(jié)[14]，可將胞外各種信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，引起細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、分泌等生物學(xué)效應(yīng)。介導(dǎo)機(jī)械力刺激并將力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為生化信號(hào)起關(guān)鍵作用，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化是響應(yīng)機(jī)械應(yīng)力的早期反應(yīng)[15]。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+微小變化可引起細(xì)胞的生理和生化變化，可通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子作用引起包括內(nèi)皮型一氧化氮合成酶基因等多種基因的表達(dá)[16-17]。細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化與許多血管反應(yīng)相偶聯(lián)。在機(jī)械力作用下，內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生多種生化及生理反應(yīng)，包括釋放血管舒張因子、基因表達(dá)、分泌生長(zhǎng)因子等，這些生理功能基于對(duì)機(jī)械力敏感的Ca2+內(nèi)流[18]。

林清等[19]運(yùn)用細(xì)胞力學(xué)加載箱模擬體外推拿滾法力學(xué)刺激發(fā)現(xiàn)推拿力學(xué)刺激改善Ca2+攝取和釋放功能、調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，是引發(fā)手法舒筋通絡(luò)生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制之一。覃開(kāi)蓉等[20]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)剪應(yīng)力和周向應(yīng)變聯(lián)合作用下血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自由Ca2+濃度變化規(guī)律分析機(jī)械力調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。早期響應(yīng)之一是內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，由此導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的生理和生化變化，如血管舒張物質(zhì)NO和PGI2釋放。馬惠昇通過(guò)細(xì)胞力學(xué)加載裝置模擬推拿力學(xué)刺激對(duì)體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)干預(yù)分析：手法能激活HUVEC的分泌功能，促進(jìn)內(nèi)源性血管舒張因子NO的合成和釋放，引起血管舒張，這是推拿實(shí)現(xiàn)行氣活血效應(yīng)的主要機(jī)制，而Ca2+拮抗劑能顯著抑制手法的這種促進(jìn)作用[21-22]。

2 中醫(yī)學(xué)對(duì)頸性眩暈的認(rèn)識(shí)與治療

2.1 傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)對(duì)頸性眩暈的認(rèn)識(shí) 頸性眩暈屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”范疇，由于風(fēng)、火、痰、虛、瘀引起清竅失養(yǎng)，以頭暈?zāi)垦！㈩^昏欲撲，甚者猝倒為主要臨床表現(xiàn)。《內(nèi)經(jīng)》提出“諸風(fēng)掉眩，皆屬于肝”；朱丹溪提出“無(wú)痰不作眩”；張景岳強(qiáng)調(diào)“無(wú)虛不能作眩”。血瘀致眩暈研究較多，明代楊仁齋《直指方》中首倡“瘀滯不行，皆能眩暈”；汪機(jī)《醫(yī)讀》中始載養(yǎng)血活血方劑：“瘀血停蓄，上沖作逆，亦作眩暈，擬挑紅四物湯”[23]；有學(xué)者[24]認(rèn)為：“無(wú)瘀不作眩”并不是說(shuō)眩暈皆由瘀引起，而是指瘀的因素具有廣泛性，不論風(fēng)、火、痰、虛皆能致瘀，瘀始終貫穿于眩暈的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，故“無(wú)瘀不作眩”。

2.2 中醫(yī)手法治療頸性眩暈的機(jī)制 中醫(yī)推拿手法如滾法、揉法、扳法等具有活血化瘀、舒筋通絡(luò)、滑利關(guān)節(jié)作用。治療頸性眩暈可起到立竿見(jiàn)影功效，除固有的生物力學(xué)效應(yīng)外，關(guān)鍵在于手法可通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能起效，王爭(zhēng)羊等[25]運(yùn)用手法對(duì)45例病人治療前后血漿ET發(fā)現(xiàn)：治療后ET-1水平顯著低于治療前(P<0.05)，ET-1水平可作為椎動(dòng)脈供血狀況是否改善的觀察指標(biāo)之一。陳軍[26]通過(guò)放松類手法如滾法、揉法調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能如ET、NO平衡達(dá)到治療目的。

范志勇等[27]認(rèn)為頸性眩暈存在血瘀狀態(tài)，這一過(guò)程伴隨血管內(nèi)皮功能損傷，手法調(diào)控血管內(nèi)皮功能治療頸性眩暈主要通過(guò)活血化瘀效應(yīng)獲得，這是手法治療本病的中醫(yī)理論基礎(chǔ)。由于Ca2+通道不僅與許多血管反應(yīng)相偶聯(lián)，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，起到活血化瘀功效，而且可介導(dǎo)推拿等機(jī)械力刺激誘發(fā)力-生化效應(yīng)，推測(cè)Ca2+通道在機(jī)體發(fā)作眩暈后激活血管內(nèi)皮功能ET、NO變化是關(guān)鍵一環(huán)。因此，提出中醫(yī)推拿治療頸性眩暈通過(guò)手法機(jī)械力刺激有效調(diào)節(jié)Ca2+通道從而起到活血化瘀效應(yīng)，引起血管內(nèi)皮功能變化，起到神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)而有效干預(yù)眩暈的假說(shuō)。

3 中醫(yī)推拿活血化瘀調(diào)節(jié)Ca2+通道治療頸性眩暈的研究思路

由于手法在操作時(shí)可能對(duì)血管內(nèi)皮產(chǎn)生剪切力、牽張力、壓力等多重力學(xué)刺激，基于以上假說(shuō)，在今后臨床研究中，可選取具有活血化瘀作用的推拿手法，如滾法、按壓、拔伸等，同時(shí)通過(guò)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株建立頸性眩暈病人的血清誘導(dǎo)細(xì)胞損傷模型，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定后，運(yùn)用細(xì)胞力學(xué)加載裝置模擬不同形式的體外推拿力學(xué)刺激，建立手法對(duì)受損細(xì)胞的力學(xué)加載模型，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)Ca2+通道及血管內(nèi)皮標(biāo)志性的NO、ET含量的變化，及對(duì)NO/ET比值的影響，分析手法是否通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞Ca2+濃度而影響Ca2+通道起到活血化瘀功效，從而揭示中醫(yī)推拿治療頸性眩暈的現(xiàn)代生物分子學(xué)機(jī)制。

[1] 齊若梅，廖福龍，王振綱.細(xì)胞內(nèi)鈣的調(diào)節(jié)機(jī)制與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2002，18(1)：16-19.

[2] 俞鵬，陳曉虎.血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及其與原發(fā)性高血壓的關(guān)系[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2006，19(19)：2272-2273.

[3] 梁保安，高延征，高坤，等.頸性眩暈患者手術(shù)治療前后ET-1的變化及意義[J].中國(guó)臨床研究，2014，27(4)：419.

[4] Schiffrin EL，Touyz RM.Multiple actions of angiotensin Ⅱ in hypertension：benefits of AT1 receptor blockade[J].J Am Coll Cordial，2003，42(5)：911-913.

[5] Thorin E，Webb DJ.Endothelium-derived endothelin-1[J].Pflugers Arch，2010，459(6)：951-958.

[6] 何建林，鄭仕中，陸茵，等.癌細(xì)胞中鈣離子通道的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28(7)：1027-1029.

[7] 魏文利，關(guān)永源，孫家鈞.血管平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞Ca2+內(nèi)流機(jī)制及其與Cl-通道的關(guān)系[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1999，15(3)：212-214.

[8] 張宇輝，黨愛(ài)民，吳海英.鈣通道阻滯劑的血管內(nèi)皮保護(hù)作用[J].中國(guó)新藥雜志，1999，8(2)：81.

[9] 陳利國(guó)，孫兆貴，王蕾，等.血瘀證與血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，25(1)：55-57.

[10] 駱歡歡.活血化瘀法對(duì)血瘀證模型大鼠血清游離鈣及血液流變學(xué)的影響[J].湖南中醫(yī)雜志，2006，22(6)：73-74.

[11] 范志勇，吳山，林應(yīng)強(qiáng)，等.基于微觀血瘀探討血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷在頸性眩暈中的發(fā)病機(jī)制[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37(3)：124-126.

[12] 劉清行，金惠銘.一氧化氮和內(nèi)皮素的相互作用及其在心血管病中的意義[J].微循環(huán)學(xué)雜志，1997，7(1)：421.

[13] 眭承志，劉志坤，陳少玫，等.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥血瘀病機(jī)的微觀分子生物學(xué)論證[J].中醫(yī)研究，2005，18(4)：19-21.

[14] 張杰，徐列明.中藥對(duì)鈣離子及其通道的調(diào)控作用研究概況[J].上海中醫(yī)藥雜志，2003，37(10)：54-55.

[15] 包志強(qiáng)，任明姬，李建福.干細(xì)胞應(yīng)力學(xué)效應(yīng)機(jī)制的研究與進(jìn)展[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15(1)：143-146.

[16] 盧建，余應(yīng)年，徐仁寶.受體信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)與疾病[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1999：329.

[17] Peake MA，Cooling LM，Magnay JL，et al.Selected contribution：regulatory pathways involved in mechanical induction of c-fos gene expression in bone cells[J].J Appl Physiol，2000，89(6)：2498-2507.

[18] 游云，楊洪軍.血管內(nèi)皮細(xì)胞瞬時(shí)感受器電位陽(yáng)離子通道研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物與臨床，2008，8(10)：760-763.

[19] 林清，張宏，趙謙，等.推拿滾法引發(fā)人骨骼肌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制探討[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，27(2)：81-83.

[20] 覃開(kāi)蓉，韓林，姚烽，等.剪應(yīng)力和周向應(yīng)變聯(lián)合作用下血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自由Ca2+響應(yīng)[J].上海生物醫(yī)學(xué)工程，2007，28(3)：135-136.

[21] 馬惠昇，張宏，嚴(yán)雋陶，等.推拿?儛法樣刺激對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(37)：6887-6890.

[22] 馬惠昇，張宏，嚴(yán)雋陶，等.基于細(xì)胞力學(xué)加載裝置的推拿滾法行氣活血作用機(jī)制研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26(2)：493.

[23] 蘭永龍.眩暈從瘀論治[J].中醫(yī)臨床研究，2011，14(3)：73-74.

[24] 邱鋒，陳根成.論“瘀”在眩暈發(fā)病中的致病作用[J].光明中醫(yī)，2011，26(6)：1222-1223.

[25] 王爭(zhēng)羊，段虹，羅曉陽(yáng)，等.手法脊柱整復(fù)對(duì)飛行員椎動(dòng)脈型頸椎病血漿內(nèi)皮素影響的觀察[J].人民軍醫(yī)，2014，57(4)：349.

[26] 陳軍，李靜.推拿對(duì)椎動(dòng)脈型頸椎病患者血液流變學(xué)及血清一氧化氮與血清內(nèi)皮素的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(8)：2028-2029.

[27] 范志勇，謝兵，查和萍，等.從血管內(nèi)皮功能探討手法治療椎動(dòng)脈型頸椎病的分子機(jī)制[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2012，12(20)：67-68.

(本文編輯薛妮)

2015年廣東省自然科學(xué)基金(No.2015A030313345)；2014年廣東省科技廳課題(No.2014A020221043)；2014年國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81373520)；2014年廣東省建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研立項(xiàng)(No.20141038)；2013年度廣東省佛山市科技局醫(yī)學(xué)類科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.201308177)

1.廣東省中醫(yī)院(廣州 510120)，E-mail：fzystrong@163.com；2.廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院；3.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院；4.暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院

引用信息：范志勇，賴瑞美，張競(jìng)之，等.從調(diào)節(jié)鈣離子通道探討中醫(yī)推拿治療頸性眩暈的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(8)：1014-1016.

R741 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.08.037

1672-1349(2017)08-1014-03

2016-08-22)