子癇前期患者血清和胎盤組織中Apelin表達(dá)水平的研究

劉紅 張麗麗 李玲 王玉艷 溫立波

子癇前期患者血清和胎盤組織中Apelin表達(dá)水平的研究

劉紅 張麗麗 李玲 王玉艷 溫立波

目的 探討Apelin與子癇前期(PE)發(fā)病的相關(guān)性。方法 40例重度PE患者, 按發(fā)病孕周分為早發(fā)型PE組(<34周)與晚發(fā)型PE組(≥34周), 各20例。同時選擇同期40例正常孕婦作為對照組, 包括早期對照組(<34周)與晚期對照組(≥34周), 各20例。收集各組的血清和胎盤組織標(biāo)本,分別采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)、免疫組化法檢測血清、胎盤組織中Apelin的表達(dá)。結(jié)果 早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血壓明顯高于同期對照組孕婦(P<0.05), 但早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血壓比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血清Apelin明顯高于同期對照組(P<0.05), 但早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血清Apelin比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。早發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比為(6.1±1.7)%, 晚發(fā)型PE組患者為(5.8±1.4)%。早期對照組孕婦無胎盤標(biāo)本, 晚期對照組孕婦為(4.2±1.5)%。晚發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比明顯高于同期對照組(P<0.05), 與早發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。PE患者血清Apelin水平與胎盤組織Apelin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.614, P<0.05)。結(jié)論 Apelin可能參與PE的發(fā)病, 且Apelin在血中與胎盤組織中的表達(dá)有著一致性。

Apelin；子癇前期；血清；胎盤組織

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月～2017年1月在阜新市第二人民醫(yī)院(婦產(chǎn)醫(yī)院)住院分娩的40例PE患者, 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合樂杰主編的第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》中有關(guān)PE及分類的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；②單胎妊娠；③無抽煙、飲酒, 飲食與生活習(xí)慣無特殊；④符合倫理道德。排除原發(fā)性高血壓、糖尿病及其他妊娠并發(fā)癥和內(nèi)外科合并癥, 排除胎膜早破。按發(fā)病孕周將患者分為早發(fā)型PE組(<34周)與晚發(fā)型PE組(≥34周), 各 20例。早發(fā)型PE組平均年齡(25.9±4.0)歲,平均孕周(32.2±1.5)周, 平均體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(25.3±1.2)kg/m2；晚發(fā)型PE組平均年齡(26.6±3.3)歲, 平均孕周(26.6±2.1)周,平均BMI(25.6±1.7)kg/m2。同時選擇同期40例正常孕婦作為對照組, 包括早期對照組與晚期對照組, 各20例。早期對照組平均年齡(26.5±3.5)歲, 平均孕周(32.1±1.5)周, 平均BMI(25.1±1.3)kg/m2；晚期對照組平均年齡(25.9±4.0)歲,平均孕周(36.6±1.5)周, 平均BMI(25.7±1.8)kg/m2。各組年齡、孕周、BMI等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。所有孕婦及家屬均對本研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有孕婦均抽取清晨空腹肘靜脈血4 ml,離心處理獲得血清, 凍存待測。剖宮產(chǎn)及順產(chǎn)時, 胎盤娩出后,從胎盤中央距臍帶約2～3 cm處, 自母體面剪取2 cm×1 cm×1 cm, 避開鈣化及機(jī)化部分。經(jīng)生理鹽水沖洗去除多余血液后, 用2%甲醛溶液固定24 h, 常規(guī)石蠟包埋。

1.2.2 檢測方法 血清Apelin應(yīng)用ELISA檢測, 按試劑盒(美國PhoenixPharm)說明書操作。胎盤組織Apelin應(yīng)用免疫組化法檢測, 將胎盤石蠟切片脫蠟至水, 蒸餾水沖洗, 置于抗原修復(fù)液浸泡, 煮沸15 min, 然后用磷酸緩沖液 (PBS)浸泡5 min, 加入羊血清孵育20 min(37℃), 然后加入1∶100兔抗人AT1抗體在濕盒4℃過夜。PBS沖洗3次, 加入二抗孵育30 min, 再次PBS沖洗, 再次加入辣根酶標(biāo)記聯(lián)霉卵白素工作液孵育, 最后再用PBS沖洗即進(jìn)行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片等處理。

1.2.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)［5］顯微鏡下觀察免疫組化反應(yīng)的定位、分布面積。Apelin主要表達(dá)于胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞, 絨毛間質(zhì)中有散在細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。鏡下觀察到在清晰的陽性細(xì)胞中, 細(xì)胞漿內(nèi)有棕色顆粒沉著, 且染色明顯高于背景即為陽性結(jié)果。對所有胎盤切片的陽性表達(dá)情況進(jìn)行形態(tài)學(xué)量化分析, 低倍鏡下觀察切片陽性表達(dá)的大體情況；高倍鏡下, 每個切片隨機(jī)取10個視野, 記錄每個視野陽性面積所占的百分比, 計算平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗；相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析(Pearson相關(guān))。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組孕婦血壓比較 早發(fā)型PE組患者血壓為(171.3±11.3)、(118.3±4.2)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)；晚發(fā)型 PE 組患者為(176.6±9.2)、(106.6±6.1)mm Hg；早期對照組孕婦為(109.8±6.7)、(77.3±7.7)mm Hg；晚期對照組孕婦為(112.3±5.2)、(75.6±8.2)mm Hg。早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血壓明顯高于同期對照組孕婦(P<0.05), 但早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血壓比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 各組血清Apelin水平比較 早發(fā)型PE組患者的血清Apelin為(87.1±5.2)ng/L, 晚發(fā)型PE組患者為(90.2±7.7)ng/L。早期對照組孕婦為(48.5±5.6)ng/L, 晚期對照組孕婦為(51.1±3.9)ng/L, 早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血清Apelin明顯高于同期對照組(P<0.05), 但早發(fā)型PE組與晚發(fā)型PE組患者的血清Apelin比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 各組胎盤組織Apelin表達(dá)比較 早發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比為(6.1±1.7)%, 晚發(fā)型PE組患者為(5.8±1.4)%。早期對照組孕婦無胎盤標(biāo)本, 晚期對照組孕婦為(4.2±1.5)%。晚發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比明顯高于同期對照組(P<0.05), 與早發(fā)型PE組患者胎盤組織Apelin表達(dá)陽性面積占比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 相關(guān)性分析 PE患者血清Apelin水平與胎盤組織Apelin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.614, P=0.034<0.05)。

3 討論

Apelin是血管緊張素Ⅱ1型受體相關(guān)蛋白(associatedprotein,APJ)的天然配體, 也是一種血管活性多肽［6］, 它廣泛分布于機(jī)體各種組織, 參與多種生理、病理過程的調(diào)節(jié)。利用熒光定量PCR技術(shù)可檢測出Apelin及其受體APJ在人類胎盤的絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有較高的表達(dá), 提示其對人類胎盤血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)及維持具有一定作用［7］。

Apelin與PE的關(guān)系目前并不明確, 可能為：①Apelin可通過結(jié)合APJ受體激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶(NOS), 使大量NO釋放, 從而有效地擴(kuò)張血管、降低血壓。而NO作為一種舒血管因子, 與PE的發(fā)病密切相關(guān), 動物實驗發(fā)現(xiàn)抑制NO生成將引發(fā)PE樣改變, 因而推測Apelin可能是通過調(diào)節(jié)血管收舒功能及心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)來維持正常妊娠過程, 一旦表達(dá)異常, 將引起PE的病理生理改變;②血管內(nèi)皮細(xì)胞可分泌Apelin, 而血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷學(xué)說是PE的發(fā)病機(jī)制之一,PE患者存在不同程度的血管內(nèi)皮損傷, 所以會影響Apelin的分泌;③脂肪細(xì)胞同樣可分泌Apelin, 研究表明, Apelin與肥胖癥和糖尿病有關(guān), 而肥胖、胰島素抵抗參與PE的發(fā)病,故提示Apelin作為一種脂肪細(xì)胞因子, 在PE的發(fā)病中起到一定作用。

呂敬媛等［8］研究顯示, PE患者血清中Apelin水平明顯高于對照組, 且重度PE患者高于輕度PE患者。本研究與上述研究結(jié)果接近, 重度PE患者的血清與胎盤組織中Apelin的表達(dá)明顯高于正常孕婦, 且Apelin的表達(dá)與發(fā)病孕周無關(guān)。相關(guān)性分析顯示PE患者血清Apelin水平與胎盤組織Apelin表達(dá)呈正相關(guān), 考慮為PE患者存在管內(nèi)皮損傷, Apelin 通過激活 PKC 使肌球蛋白輕鏈激酶磷酸化, 進(jìn)而導(dǎo)致血管平滑肌收縮。Apelin 通過 PI3K/Akt信號途徑而使 ERK1/2 磷酸化, 刺激細(xì)胞周期蛋白 cyclin D1 等的表達(dá)使血管平滑肌細(xì)胞從 G0/G1 期向 S 期轉(zhuǎn)變, 從而促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移［9］。血管內(nèi)皮損傷情況下, 血管通透性改變, 從而使Apelin進(jìn)入血中, 最終表現(xiàn)為血清Apelin水平升高。此外在血管組織表達(dá)的 Apelin 還介導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷, 由于胚胎被認(rèn)為是半同種異體移植物, 一旦使母體-胎兒間免疫失衡, 則可能引起一系列反應(yīng), 導(dǎo)致子癇前期發(fā)生［10］。

以上提示Apelin的異常表達(dá)與PE發(fā)病有關(guān), 但究竟呈何種表達(dá)水平仍值得進(jìn)一步研究。此外, 本研究對象僅為重度PE患者, 雖然證明了Apelin在PE的發(fā)病中有一定作用, 并與發(fā)病孕周無關(guān), 但缺少輕度PE患者作為對照, 所以Apelin 能否作為子癇前期預(yù)防, 以及作為子癇前期治療的靶點還需要擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

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［4］ Rath G, Aggarwal R, Jawanjal P, et al.HIF-1 Alpha and Placental Growth Factor in Pregnancies Complicated With Preeclampsia: A Qualitative and Quantitative Analysis.Journal of Clinical Laboratory Analysis, 2016, 30(1):75-83.

［5］米春梅, 王丹, 高舟.氧化低密度脂蛋白 (ox-LDL)、白細(xì)胞介素(IL)-22在子癇前期患者血清及胎盤中的表達(dá).生殖與避孕,2016, 36(7):602-607.

［6］戴薇, 許吟, 馬星衛(wèi), 等.小劑量低分子肝素聯(lián)合硫酸鎂治療重度子癇前期對血清和胎盤中病情相關(guān)分子的調(diào)節(jié)作用.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 26(18):30-33.

［7］李萍, 柴靜波, 姬白嫣.子癇前期患者HLA-G水平在胎盤組織、血清中表達(dá)的臨床價值分析.陜西醫(yī)學(xué)雜志, 2015(12):1641-1642.

［8］ 呂敬媛, 張園彤.Apelin與ADMA在子癇前期患者血清中的表達(dá).黑龍江醫(yī)藥科學(xué), 2016, 39(1):104-106..

［9］ 于興隆, 葛志明.Apelin-Apelin受體信號系統(tǒng)在心血管系統(tǒng)中的作用研究進(jìn)展.中華老年心腦血管病雜志, 2010, 12(7):661-662.

［10］ 江燕萍, 孟錦繡, 游可理, 等.子癇前期胎盤組織中Apelin/APJ的表達(dá)及其臨床意義.實用婦產(chǎn)科雜志, 2013, 29(1):36-38.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.21.033

123000 阜新市第二人民醫(yī)院(婦產(chǎn)醫(yī)院)

子癇前期(preeclampsia, PE)是妊娠期常見的特發(fā)性疾病,目前其發(fā)病機(jī)理尚不完全明確, 可能與胎盤缺血缺氧、氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮損傷、代謝綜合征、免疫調(diào)節(jié)紊亂及遺傳因素有關(guān)［1］。Apelin是從牛胃提取物中分離出的一種生物活性肽, 研究發(fā)現(xiàn), 它對心血管、神經(jīng)、肺、腎等多個系統(tǒng)及體液、肥胖的調(diào)節(jié)有重要影響［2］。既往有研究提示［3］, Apelin可能參與妊娠期高血壓病和PE的發(fā)病過程, 但相關(guān)研究較少。本研究分析了PE孕婦血清和胎盤組織中Apelin的表達(dá),探討Apelin在PE發(fā)病機(jī)制中的作用, 以期為PE的診治提供參考。

2017-09-22］