淺析影響ELISA 實驗結果因素

朱曉明

（遼寧省葫蘆島市動物疫病預防控制中心125000）

淺析影響ELISA 實驗結果因素

朱曉明

（遼寧省葫蘆島市動物疫病預防控制中心125000）

ELISA是實驗室檢測抗體最常用的檢測方法，具有靈敏性高、特異性強等特點，不需要特殊儀器設備就可以完成檢測工作。目前大部分實驗室檢測都使用廠家生產的成品ELISA試劑盒，看似簡單的操作，其中存在著復雜的反應，很多因素都會影響ELISA的實驗結果。下面就對影響ELISA實驗結果的因素進行總結。

1 樣品

樣品是檢測的前提，樣品質量會直接影響實驗結果?？梢杂肊LISA來檢測的樣品很多，根據檢測項目不同可以是血清、全血、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣品，應避免溶血，溶血可能會增加非特異性顯色，導致結果出現誤差。血清樣品的反復凍融會使血清中的抗體效價下降，所以需要多次檢測的血清樣品，如在5d內檢測完，可4℃保存，如需長時間檢測，可進行分裝凍存。樣品如被細菌污染腐敗，可能會導致假陽性。

2 溫度和時間

抗原和抗體反應需要適宜的溫度和反應時間，溫度和時間是ELISA反應中最重要的條件。溫度控制主要在試劑盒使用前一定要提前半小時左右取出，恢復至工作溫度，恒溫箱要提前打開，設定到反應溫度，以保證反應速度。在溫度保證的前提下，時間的控制至關重要，尤其是底物顯色的時間控制，顯色時間不足或過長會導致實驗不成立，無法對檢測結果進行判斷。

3 人員操作

ELISA成品試劑盒為檢測工作提供了方便，按照說明書進行操作就可以完成實驗，但人為操作時候很多細節也會導致實驗誤差。

3.1 包被

一些ELISA反應板需要自行進行包被處理，沒有進行包被，或包被液使用與檢測項目不同都會使實驗失敗。包被時，未進行震蕩，孔底未被包被液全部覆蓋會導致檢測結果偏差。

3.2 反應液稀釋

稀釋液使用錯誤或稀釋比例不正確會導致實驗失敗或結果不準確。

3.3 洗板

人工洗板時，棄去洗滌液時方法不當，易使各孔液體相互流入，導致假陽性；洗滌液使用量和洗滌次數過少導致洗滌不徹底，洗板后未拍板或拍不干凈都會影響實驗結果。

3.4 其他

封板膜封閉不嚴或開啟時孔內液體蒸發、震出可導致各孔相互污染；操作時接觸到ELISA板底導致透光度改變，影響酶標儀測量結果；加樣時未注意移液器吸頭堵塞或漏氣導致加液量不準確；加不同試劑時未更換吸頭等。

4 設備

儀器設備是ELISA實驗的基礎，常用的相關儀器設備包括移液器、酶標儀、洗板機和恒溫箱等。所有設備都需要進行檢驗校準，保證準確性和精確度。移液器的使用要盡可能選擇所需加液量接近最大量程，并正確使用，減少實驗誤差；酶標儀要提前開機預熱，保證光源穩定；洗板機要檢查加液孔是否通暢，保證加液量；恒溫箱要提前開機，開、關門要快速，保證反應溫度。

5 試劑

試劑盒要根據要求進行保存，并保證在有效期內使用，使用前應平衡到室溫。新購入的試劑盒要進行校驗，檢查實驗是否成立，不同的試劑盒或不同批號的試劑不可混用。