白芍抗氧化成分的測(cè)定*

劉程程，廖莉玲

(1 貴陽(yáng)護(hù)理職業(yè)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550081；2 貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550001)

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分析測(cè)試

白芍抗氧化成分的測(cè)定*

劉程程1，廖莉玲2

(1 貴陽(yáng)護(hù)理職業(yè)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550081；2 貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550001)

測(cè)定白芍的主要抗氧化成分(總黃酮、多酚、多糖及維生素 A、E、C)的含量，為其開(kāi)發(fā)利用提供參考。采用紫外分光光度法和高效液相色譜測(cè)定白芍中乙醇提取液中總黃酮、多酚、多糖 及白芍干樣中維生素A，維生素C，維生素E的含量。白芍中黃酮含量為7.15 mg/g；多酚含量為15.63 mg/g；多糖含量為80.41 mg/g；維生素C含量為0.51 mg/100 g；未檢測(cè)出維生素A與維生素E的含量。

白芍；黃酮；多酚；多糖；維生素

芍藥屬于毛茛科芍藥屬多年生草本植物，《神農(nóng)本草經(jīng)》和《名醫(yī)別錄》中對(duì)芍藥的均有記載，認(rèn)為其具有治腹痛、除血痹等功效[1-2]。已有研究表明，白芍提取物具有抗氧化清除自由基的活性[3-4]，為進(jìn)一步研究白芍的抗氧化活性與其化學(xué)組成的相關(guān)性，本論文對(duì)白芍的主要抗氧化成分的含量進(jìn)行了測(cè)定，為白芍的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

白芍產(chǎn)自貴州施秉牛大場(chǎng)GAP藥材基地。

1.2 儀器及試劑

DK-98-1電子恒溫水浴鍋，天津泰斯特儀器有限公司；FZ102微型植物粉碎機(jī)，天津市泰斯勒公司；UV2300紫外分光光度計(jì)，上海天美科學(xué)儀器有限公司；QC10260C超聲波清洗器，天津市旗美科技有限公司；DG23B-DC(F)/DG23C-DC(F)美的微波爐，美的集團(tuán)；LC-20A島津高效液相色譜儀，日本；A200S電子天平，德國(guó)。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、維生素A標(biāo)準(zhǔn)品、維生素E標(biāo)準(zhǔn)品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方 法

2.1 樣品預(yù)處理

購(gòu)買藥材，晾干后，放入微型植物粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)篩，即得到相應(yīng)的粉末。放入干燥器中備用。

2.2 含量的測(cè)定

2.2.1 黃酮、多酚、多糖含量的制定[5]

黃酮：用分光光度法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定所選植物的總黃酮含量[6]；多酚：用分光光度法，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定所選植物的總多酚含量[7]；多糖：苯酚-硫酸法[8]；含量按下式計(jì)算：

式中：X——樣品中總黃酮含量，mg/gc——校準(zhǔn)曲線中黃酮的濃度，mg/mLV1——稀釋體積，mLV2——樣品溶液的體積，mLV3——取樣體積，mLM——樣品質(zhì)量，g

2.2.2 維生素A、E含量的制定

維生素A與E：液相色譜法[9]

Xi=Ei×Ai/AE

式中：Xi——試樣中待測(cè)組分i的含量Ei——試樣中標(biāo)準(zhǔn)組分i的含量Ai——試樣中待測(cè)組分i的峰值A(chǔ)E——試樣中標(biāo)準(zhǔn)組分i的峰值

2.2.3 維生素C含量的制定

維生素C：2,4-二硝基苯肼法[10]

式中：X——樣品中抗壞血酸含量，mg/100gC——樣品氧化液中抗壞血酸的濃度，mg/LV——稱取的勻漿用1%草酸溶液定容的體積，mLF——樣品氧化處理過(guò)程中的稀釋倍數(shù) m——稱取勻漿中含原試樣的質(zhì)量，g

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

2.3.1 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.2 mg/mL，分別準(zhǔn)確吸取蘆丁溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL置于6個(gè)25 mL容量瓶中，先加6 mL 95%乙醇溶液；再加1 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，靜置6 min；然后加入1 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6 min；最后加10 mL 4.3% NaOH溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，在波長(zhǎng)500 nm處測(cè)定吸光度，重復(fù)3次取平均值，作圖得到蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。用樣液代替蘆丁溶液，相同條件下顯色測(cè)吸光度，按線性回歸方程計(jì)算試樣中的總黃酮含量。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.2 多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

圖2 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

總酚含量的測(cè)定：配制沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.05 mg/mL，分別準(zhǔn)確吸取沒(méi)食子酸溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置于5個(gè)25 mL棕色容量瓶中，先加1 mL磷鉬鎢酸試劑；然后加15 mL 5%碳酸鈉溶液，搖勻，加水稀釋至刻度，靜置2 h，在波長(zhǎng)760 nm處測(cè)定吸光度，重復(fù)3次取平均值，作圖得到?jīng)]食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)。用樣液代替沒(méi)食子酸溶液，相同條件下顯色測(cè)吸光度，按線性回歸方程計(jì)算試樣中的總多酚含量。

2.3.3 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

多糖含量的測(cè)定：配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品1 mg/mL，精密量取葡萄糖溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL分別置于6個(gè)50 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，各精密吸取1.0 mL置塞試管中，加入1.0 mL 8%苯酚溶液，置水浴中加熱15 min，取出冷至室溫，在波長(zhǎng)490 nm處測(cè)定吸光度，重復(fù)3次取平均值，作圖得到葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)。用樣液代替葡萄糖溶液，相同條件下顯色測(cè)吸光度，按線性回歸方程計(jì)算試樣中的多糖含量。

圖3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.4 維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

取50 mL標(biāo)準(zhǔn)溶按2,4-二硝基苯肼法處理。以抗壞血酸濃度(μg/mL)為橫坐，吸光值為縱坐標(biāo)標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4)。用樣液代替抗壞血酸溶液，相同條件下顯色測(cè)吸光度，按線性回歸方程計(jì)算試樣中的維生素C含量。

圖4 維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線

從黃酮，多酚，多糖以及維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線可以看出，相關(guān)系數(shù)R2均在0.999以上，具有良好的線性關(guān)系。

2.4 液相圖譜

2.4.1 維生素A與E

液相色譜法[10]。工作條件見(jiàn)表1。

表1 液相色譜柱的工作條件

2.4.2 維生素A、E的液相譜圖

圖5 維生素A、E對(duì)照品色譜圖

3 結(jié)果與討論

3.1 白芍中抗氧化成分含量

白芍主要抗氧化成分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 白芍中抗氧化主要成分含量

3.2 討 論

實(shí)驗(yàn)選取白芍為研究對(duì)象，運(yùn)用紫外分光光度法和高效液相色譜法對(duì)白芍乙醇提取液的主要抗氧化成分(總黃酮、多酚、多糖、維生素A、維生素C、維生素E)的含量進(jìn)行測(cè)定。白芍中黃酮含量為7.15 mg/g；多酚含量為15.63 mg/g；多糖含量為80.41 mg/g；維生素C含量為0.51 mg/100 g；未檢測(cè)出維生素A與維生素E的含量。其中黃酮、多酚是植物中主要的抗氧化活性成分，而多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、降血糖等多種生理功效。維生素C作為一種電子供體，參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng)，具有多種生理功能，如抗氧化、促進(jìn)鐵的吸收等[11]。可以推斷白芍提取物的抗氧化活性與其含有一定量的黃酮、多酚、多糖、維生素C有關(guān)，白芍抗氧化活性部位及有效成分有待于進(jìn)一步研究。

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Determination of Contents of Main Antioxidant Compositions in Radix Paeoniae Alba*

LIUCheng-cheng,LIAOLi-ling

(1 Guiyang Nursing Vocational College, Guizhou Guiyang 550081; 2 School of Chemistry and Material Science, Guizhou Normal University, Guizhou Guiyang 550001, China)

The contents of the main antioxidant composition such as total flavone, polyphenol，polysaccharide and Vitamin A, C, E in Radix Paeoniae Alba were determined for its exploitation and utilization. UV and HPLC methods were used to determine the contents of the total flavone, polyphenol, polysaccharide in ethanol and Vitamin A, C, E of Radix Paeoniae Alba. The content of the total flavone was up to 7.15 mg/g, the content of polyphenol was up to 15.63 mg/g, the content of polysaccharide was up to 80.41 mg/g, the content of Vitamin C was up to 0.51 mg/100 g, Vitamin A and Vitamin E was not detected.

Radix Paeoniae Alba; the total flavone; polyphenol; polysaccharide; Vitamin

貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專項(xiàng)資舍項(xiàng)目(黔省專合字201021號(hào))。

劉程程(1984-)講師，碩士，從事分析化學(xué)研究。

廖莉玲，教授，碩士，從事天然產(chǎn)物方面的研究。

R284.2

A

1001-9677(2016)023-0081-03