亞貢葉的化學成分分離與鑒定

白 珺，冉小庫，竇德強，曾 崢

(1 遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116000；2 珍奧集團股份有限公司，遼寧 大連 116000)

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亞貢葉的化學成分分離與鑒定

白 珺1，冉小庫1，竇德強1，曾 崢2

(1 遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116000；2 珍奧集團股份有限公司，遼寧 大連 116000)

對亞貢葉中化學成分進行進一步分離研究，并對分離化合物進行結構鑒定和分析。通過采用ODS，硅膠柱色譜，凝膠柱色譜以及半制備色譜結合譜學數據鑒定的方法，對亞貢葉乙醇提取物進行分離。通過譜學鑒定，分離得到4個單體化合物，并將其分別確定為亞油酸乙酯(9E,12E)enyloctadeca-9,12-dienoate，ent-18-hydroxykautan-16-en-19-oic acid，Grandiflorolic acid和8β-methacryloxymelampolide-14-oic acid methyl ester。其中化合物亞油酸乙酯為首次從亞貢葉中分離得到。

亞貢葉；亞油酸乙酯；分離鑒定

亞貢Smallanthussonchifolius，又名Yacon，雅貢，又有別名雪蓮果、菊薯、雪蓮薯等。菊科屬植物，屬多年生草本[1]，是南美藥食兩用植物之一[2]。不僅在緩解二型糖尿病方面，特別適合糖尿病人及減肥者食用，而且在包括腸道功能紊亂在內的多種慢性疾病以及消化道和循環系統疾病、結腸癌等治療領域[3-5]都有著較為顯著的治療作用。亞貢原產地出于南美的安第斯地區，在諸多國家均得到了廣泛的研究與開發[6]，亞貢后也被引種到多國，包括日本、美國、新西蘭和歐洲等等。除此之外，亞貢同時也在我國的云南省、臺灣省、海南省、江蘇省、遼寧省等地有大量種植，并已被成功引種[2]，隨著成功引進，對亞貢的相關研究也越來越多。亞貢葉也具有廣泛的藥理活性，具備降血糖、抗菌、抗癌作用等臨床作用[7]，對亞貢葉中的化學成分進行分離并鑒定，可為廣泛利用及分析亞貢葉中的成分打下基礎。

1 儀器與材料

BRUKER-ARX-500核磁共振波譜儀，德國Bruker；ODS，日本富吉；890/5975C氣相色譜/質譜聯用儀，美國Agilent公司；HITACHI7100制備型高效液相色譜儀，日本；Agilent 1260高效液相色譜儀，美國安捷倫Agilent科技公司；色譜柱(YMC-PackODS-A，5 μm，10 mm×250 mm，日本)；柱色譜及TLC所用硅膠，青島海洋化工廠；FA-1004電子天平，上海精科天平廠；旋轉蒸發儀，予華儀器有限責任有限公司；DZF-6050真空干燥箱，上海一恒科技有限公司。

液相用甲醇(色譜純級別)，天津市大茂化學試劑廠；其它試劑為分析純級別；亞貢葉于2012年采于遼寧省大連市開發區德勝鎮，經遼寧中醫藥大學藥學院康廷國教授鑒定，為菊科植物亞貢Smallanthussonichifolius的葉。

2 提取與分離

將干燥的亞貢葉(5.0 kg)粉碎至粗粉，用10倍量95%乙醇浸泡2 h，在60 ℃水浴下進行回流提取，過濾提取液，將剩余藥渣再加入10倍量的95%乙醇提取，過濾，將兩次濾液合并，用旋轉蒸發儀，回收乙醇，旋至近干，置于真空干燥箱中進行干燥。上述提取所得干燥浸膏，用甲醇溶解，拌樣采用100～200目硅膠，后進行分離，采用200～300目硅膠，梯度洗脫以二氯甲烷-甲醇作為洗脫劑，得到6個餾分，分別通過ODS和LH-20柱色譜以及半制備HPLC將餾分進行分離，最終從第1個餾分中分離得到化合物1，并將其波譜鑒定，從第3餾分中分離并鑒定得到化合物2和3，乙烷-甲醇洗脫，第2個餾分中分離并鑒定得到化合物4。

3 結構鑒定

3.1 化合物1

液體，無色油狀。C20H36O2，在13C-NMR中，共給出20個碳信號數據，通過δ173.9可提示結構中含有1個羰基，δ130.23,130.07,128.07,127.94提示結構中含有4個烯碳原子，δ60.18,14.05提示機構中可能含有一個OCH2CH3，δ14.26提示結構中還含有另一個甲基。δ34.41，34.36,31.54，29.6,29.36,29.17,29.12,29.04,27.21,25.65,24.99,22.58則為剩余長脂肪鏈烴信號，經查閱文獻[8]發現，化合物碳譜數據與亞油酸乙酯基本一致，因此初步判斷化合物為亞油酸乙酯。信號歸屬如下：δ：173.9(C-1),130.23(C-9)，130.07(C-10),128.07(C-12),127.94(C-13)，60.18(C-1′)，14.05(C-2′)，22.58(C-17)，14.26(C-18)，δ24.99-34.41(C-2～C-8，C-11，C-14～C-16)。GC-MS，給出分子離子峰[M]+308.3，離子碎片峰279.3,263.3,245.2,220.2,195.2,178.2,150.1,123.1,95.1,67.1,41，數據庫給出結果為亞油酸乙酯，結合碳譜數據最終確定化合物為亞油酸乙酯，結構如圖1所示。

圖1 化合物1結構

Fig.1 Structure of compound 1

3.2 化合物2

白色無定型粉粉末無色針晶ent-18-hydroxykauran-16-en-19-oic acid，13C-NMR共給出20個碳信號，δ179.8(19-C)為羰基碳信號，δ156.8(16-C)，δ103.7(17-C)為末端雙鍵碳特征信號。δ70.1(18-C)為連氧碳特征信號，推測為ent-kaurane類化合物。將化合物光譜數據與文獻[9]對比發現二者基本完全一致，因此鑒定該化合物為已知化合物ent-18-hydroxy-kauran-16-en-19-oic acid。其NMR數據歸屬如下：13C-NMR(CD3OD)：179.8(19-C)，156.9(16-C)，103.7(17-C)，70.8(18-C),56.6(5-C),52.3(9-C),50.8(4-C),50.1(15-C),49.4(8-C),45.2(13-C),42.2(3-C),41.7(7-C),40.8(1-C),40.5(10-C),34.2(14-C),33.1(12-C),22.8(6-C),19.8(11-C),19.5(2-C),16.5(20-C)。結構如圖2所示。

圖2 化合物2結構

3.3 化合物3

無定型粉末，白色，13C-NMR數據中共給出20個碳信號，δ183.7(19-C)為羰基碳信號，160.3(16-C)，106.3(17-C)為末端雙鍵碳特征信號。82.8(15-C)為連氧碳特征信號，推測為ent-kaurane類化合物。將化合物光譜數據與文獻[10]對比發現二者基本完全一致，因此鑒定該化合物為已知化合物ent-15β-hydroxy-kaur-16-en-19-oic acid(Grandiflorolic acid)。其NMR數據歸屬如下：13C-NMR(CDCl3)：183.7(19-C)，160.3(16-C)，108.3(17-C)，82.8(15-C),57.1(5-C),53.4(9-C),47.8(8-C),43.8(4-C),42.4(13-C),40.8(1-C),39.9(10-C),37.9(3-C),36.3(7-C),35.3(14-C),32.6(12-C),29.0(18-C),21.0(6-C),19.1(2-C),18.3(11-C),15.9(20-C)。結構如圖3所示。

圖3 化合物3結構

3.4 化合物4

白色粉末，C20H24O6，13C-NMR共給出3個羰基信號，化學位移值分別為169.54,167.43,166.08，給出8個烯碳信號，化學位移值分別為142.37,137.7,135.85,135.45,131.2,126.14,126.02,120.49，提示結構中含有4個雙鍵，化學位移75.78,67.34,52.04，提示可能存在3個連氧碳信號，52.04證實可能含有一個甲氧基，由上述低場區信號推測該結構可能為倍半萜內酯類化合物，剩余高場碳信號為結構中其它甲基，亞甲基，次甲基信號化學位移值分別為49.78,37.15,30.24,25.69,18.29,17.02。經文獻[11]檢索，發現碳譜數據與化合物8β-methacryloxymelampolide-14-oic acid methyl ester基本相同，因此確定化合物結構為8β-methacryloxymelampolide-14-oic acid methyl ester，信號歸屬如下：142.37(1-C),25.69(C-2),37.15(C-3),137.7(C-4),126.02(C-5),75.78(C-6),49.78(C-7),67.34(C-8),30.24(C-9),131.2(C-10),135.45(C-11),169.54(C-12),120.49(C-13),167.43(C-14),17.02(C-15),166.08(C-1′),135.85(C-2′),18.29(C-4′),52.04(C-COOMe)。結構如圖4所示。

圖4 化合物4結構

4 討 論

采用回流提取法對亞貢葉化學成分進行了提取分離以及鑒定，乙醇作為提取溶媒，可以提取亞貢葉中的大部分小分子化學成分，為闡明亞貢葉的藥效物質基礎奠定了基礎。通過硅膠柱色譜，以不同比例和溶劑組成的流動相進行反復的柱層析，最終確定以二氯甲烷-甲醇為流動相，通過分離將亞貢葉醇提物按照極性大小分為不同部位，繼而采用反相ODS柱色譜以不同濃度甲醇-水為洗脫劑繼續進行洗脫劑洗脫，采用LH-20柱色譜，聯合半制備高效液相色譜儀等分離手段聯合應用，分離得到了單體化合物，并通過采用化學和13C-NMR、GC-MS等波譜技術，對分離得到的化合物進行了結構解析。本研究對亞貢葉的化學成分進行了進一步的了解，也為后期亞貢葉的研究奠定基礎。

5 結 論

采用硅膠柱色譜，ODS與凝膠柱色譜以及半制備色譜對亞貢葉乙醇提取物進行分離和純化得到4個化合物，通過13C-NMR、GC-MS等譜學數據與文獻進行對照分析，確定這些化合物分別是亞油酸乙酯(9E,12E)enyloctadeca-9,12-dienoate，ent-18-hydroxykautan-16-en-19-oic acid，Grandiflorolic acid。其中化合物1為首次從該植物中分離得到。

[2] 金文聞,余龍江,孟思進,等.亞貢的植物學及其藥理作用研究概況[J].中草藥,2006,37(4):633-636.

[3] 金文聞,余龍江,孟思進,等.亞貢植物學及藥理作用研究概況[J].中草藥,2006,37(4)： 633-636.

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[9] 項崢,竇德強.亞貢葉的研究與開發[A].全國中藥和天然藥物學術研討會[C],2011.

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[11]Lin F, Hasegawa M, Kodama O. Purification and Identification of Antimicrobial Sesquiterpene Lactones from Yacon (Smallanthussonchifolius) Leaves(Organic Chemistry)[J]. Bioscience Biotechnology & Biochemistry, 2003, 67(10):2154-2159.

Isolation and Identification on the Chemical Components of Yacon Leaves

BAIJun1,RANXiao-ku1,DOUDe-qiang1,ZENGZheng2

(1Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Liaoning Dalian 116000; 2 Zhenao Group Co., Ltd., Liaoning Dalian 116000, China)

To research the chemical fractions from yacon leaves extract, separation and purify methods was applied to the extract of yacon leaves. Slica gel column, ODS, sephadex column chromatography and semi manufactured by high performance liquid chromatography were used to the research. Four compounds were obtained and identified as (9E,12E)enyloctadeca-9,12-dienoate(1),ent-18-hydroxykautan-16-en-19-oic acid(2), Grandiflorolic acid(3) and 8β-methacryloxymelampolide-14-oic acid methyl ester(4).Compound 1 was isolated from yacon leaves as the first time.

Smallanthussonchifolius; (9E,12E)enyloctadeca-9,12-dienoate; isolation and identification

R284.1

A

1001-9677(2016)023-0110-03