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霉菌毒素對畜禽的危害及其毒性降解研究進展

2017-01-17 06:19:15王加啟高亞男
中國飼料 2017年4期

張 煥, 王加啟, 高亞男, 鄭 楠*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所,動物營養(yǎng)學國家重點實驗室,北京海淀 100193;2.吉林大學食品科學與工程學院,吉林長春130022;3.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所,農(nóng)業(yè)部奶及奶制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(北京),北京海淀 100193)

科學實驗研究

霉菌毒素對畜禽的危害及其毒性降解研究進展

張 煥1,2, 王加啟1,3, 高亞男1,3, 鄭 楠1,3*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所,動物營養(yǎng)學國家重點實驗室,北京海淀 100193;2.吉林大學食品科學與工程學院,吉林長春130022;3.中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所,農(nóng)業(yè)部奶及奶制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(北京),北京海淀 100193)

霉菌毒素可影響細胞DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的合成,增加細胞內(nèi)活性氧含量,以產(chǎn)生氧化應(yīng)激狀態(tài),從而對細胞造成DNA損傷和氧化損傷。低濃度的霉菌毒素可影響畜禽的生產(chǎn)性能和免疫功能,損害動物的臟器,高濃度可直接導致動物死亡。不同霉菌毒素對動物的損傷不同,在動物飼養(yǎng)時添加適當物質(zhì)可以緩解霉菌毒素的毒性。因此本文詳細描述了霉菌毒素對畜禽的危害,并且從物理、化學、生物角度介紹了霉菌毒素的降解方法。

霉菌毒素;畜禽;毒性降解

霉菌毒素是由曲霉菌、青霉菌以及鐮刀菌等不同類型真菌產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物,自從1960年發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素后,霉菌毒素已被確定為影響動物和人類健康的重要毒素,產(chǎn)毒真菌廣泛存在于自然界中,可降低作物產(chǎn)量和食品質(zhì)量,從而帶來經(jīng)濟損失(Aiko等,2015)。在多種霉菌毒素中,黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性最強,已被國際癌癥研究機構(gòu)歸類為Ⅰ類致癌物,可以造成人和動物的急性和慢性中毒,引起腸胃、肝腎損傷,甚至可致突變、致癌和免疫抑制等 (Lakhani等,2012)。雖然自然條件下毒素無法預防,但可以采用多種方法解除霉菌毒素的毒性作用,如在玉米中添加氨,因此,開發(fā)多種可用于生產(chǎn)實踐的毒性降解方法尤為重要。世界衛(wèi)生組織、美國食品和藥物管理局和歐盟規(guī)定了某些主要霉菌毒素的安全限值,如黃曲霉毒素(AF)、赭曲霉毒素(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEA)等,確保消費者的安全。

1 霉菌毒素對畜禽的危害

霉菌毒素不僅可以通過飼料進入畜禽體內(nèi),也可以暴露在雞舍或牛棚的空氣中,通過呼吸作用進入動物機體,造成畜禽的急慢性中毒,表現(xiàn)為迅速破壞肝臟、腎臟、脾臟等解毒器官的結(jié)構(gòu)和功能,抑制畜禽生長,降低畜禽免疫力,并在肝臟、腎臟、肌肉等組織中蓄積,由此可見,霉菌毒素可嚴重危害動物健康和人類食品安全(Duarte等,2011)。

1.1 霉菌毒素對畜禽生產(chǎn)性能的影響 霉菌毒素能夠降低畜禽的采食量、日增重和飼料轉(zhuǎn)化率,對動物機體生長、發(fā)育、繁殖產(chǎn)生影響,其影響程度與家禽品種、日齡,接觸霉菌毒素的劑量、時間長短及環(huán)境因素有關(guān)。

1.1.1 霉菌毒素對生長能力的影響 霉菌毒素不僅可造成體重的變化,還會影響動物的生產(chǎn)能力。Boudra等(2007)對法國西北部的132個牛場進行調(diào)查發(fā)現(xiàn),食用被OTA污染飼料的奶牛產(chǎn)奶量比正常奶牛少0.586 kg/年。另外,OTA可以延遲蛋雞的產(chǎn)蛋時間,減少產(chǎn)蛋數(shù)量,降低鵝的羽毛生長量(Denli等,2008)。在自然條件下,多種霉菌毒素可以同時存在,Wangikar等(2005)研究發(fā)現(xiàn),向新西蘭大白兔的基礎(chǔ)飼糧中添加OTA和AFB1,18 d后平均日增重降低了(0.1±0.1)mg/kg,單獨添加OTA或AFB1比同時添加兩種毒素對體重的影響更加明顯。Stoev等(2001)的研究表明,當OTA和青霉酸(PA)同時添加到豬日糧中時,二者可以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。

綜上所述,霉菌毒素可影響畜禽生長的能力,甚至可以導致死亡,但利用霉菌毒素和其他物質(zhì)之間的拮抗作用,添加合適解毒劑,有利于緩解其毒性作用。

1.1.2 霉菌毒素對繁殖能力的影響 霉菌毒素對畜禽繁殖能力的影響較大,Mohan等(2008)的研究表明,AF可以使公禽睪丸生殖上皮發(fā)生病變,導致睪丸萎縮、重量降低,從而精子生成量減少,繁殖力和受精率下降等,并且可引發(fā)母禽蛋產(chǎn)量和孵化率降低、卵巢囊腫、雌激素分泌量下降等。ZEA是一種外源性雌激素分泌干擾物。Fiorenza Minervini等(2008)報道,體外培養(yǎng)精子和卵細胞時,ZEA可以抑制精子和卵細胞的生長,降低精液和卵母細胞的質(zhì)量,是導致動物繁殖能力降低的主要原因。Alm等(2002)通過研究ZEA和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)對畜禽生殖能力的影響,結(jié)果表明,當DON的濃度達到7.5mmol/L時,對豬生殖細胞的存活可產(chǎn)生顯著影響,但當ZEA的濃度為1.88mmol/L就會產(chǎn)生損害作用,表明ZEA對畜禽生殖能力的影響比DON更顯著。OTA和AFB1的聯(lián)合毒理學研究表明,新西蘭孕期母兔的基礎(chǔ)飼糧中單獨和同時添加OTA和AFB1,可影響胎兒的身體或內(nèi)臟重量的變化,導致毛、骨骼和內(nèi)臟發(fā)生畸形,產(chǎn)生波狀肋、腦積水、腎缺陷等疾病,且OTA和AFB1具有拮抗作用(Wangikar,2005)

綜上所述,霉菌毒素對畜禽的繁殖能力影響較大,因此,采取有效措施降低霉菌毒素含量對解決畜禽生產(chǎn)問題具有重要意義。

1.2 霉菌毒素對畜禽免疫功能的影響 霉菌毒素進入機體主要通過腸道吸收,作為機體抵御外來污染物的第一道防線,腸道屏障至關(guān)重要,負責了機體70%的免疫防御,腸道黏膜具有再生能力,其對霉菌毒素的毒性有較強的敏感性。霉菌毒素種類、濃度的不同,以及暴露時間的長短,對免疫功能的損傷不同。

1.2.1 霉菌毒素引起免疫應(yīng)答 當腸道黏膜受到短期、低濃度霉菌毒素傷害時,可以依靠其自身免疫調(diào)節(jié)能力,維持腸黏膜的完整性。Grenier等(2011)發(fā)現(xiàn),DON和伏馬毒素(FB1)能夠抑制淋巴細胞的增殖,降低仔豬血清中的免疫球蛋白G (IgG)水平,可導致腸道免疫反應(yīng)的失衡,從而破壞腸道黏膜免疫屏障。但也有研究表明,霉菌毒素對畜禽腸道并不產(chǎn)生破壞作用,Swamy等(2002)發(fā)現(xiàn),在雄性肉雞飼糧中單獨添加8.2 mg/kg DON和0.56 mg/kg ZEA,喂養(yǎng)56 d后,血清中的免疫球蛋白數(shù)量并未出現(xiàn)明顯變化。Taranu等(2015)發(fā)現(xiàn),ZEA單獨作用于IPEC-1細胞,與對照組相比,細胞因子的表達量并無明顯變化,但當ZEA與大腸桿菌混合作用后,干擾素-γ(IFN-γ),白介素-10(IL-10)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的分泌量顯著增加。表明霉菌毒素對腸道具有直接促炎作用,可以通過改變腸道功能,增加促炎性細胞因子分泌量,間接引起腸道炎癥。

1.2.2 霉菌毒素破壞免疫功能 當腸道黏膜受到長期、高濃度霉菌毒素傷害,腸道黏膜受到的損害超過其自身調(diào)節(jié)能力時,腸上皮細胞發(fā)生病變,腸道屏障受到損傷,機體將失去腸道免疫功能。霉菌毒素對腸道細胞具有破壞作用,影響真核細胞DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的合成,增加活性氧含量,對細胞產(chǎn)生DNA損傷和氧化損傷。Ivanova等(2012)研究表明,恩鐮孢菌素B(ENB)在25μmol/L高濃度下,可抑制人結(jié)腸癌細胞Caco-2的生長,使細胞停滯在G2/M時期而發(fā)生死亡。Wan等(2014)利用人腸道上皮細胞進行體外試驗,在細胞培養(yǎng)液中單獨或混合添加DON、ZEA、雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)、FB1,均能顯著改變黏蛋白5AC mRNA、黏蛋白5BmRNA的表達量。腸上皮細胞間的緊密連接蛋白是相鄰細胞間的松散連接,具有保護腸黏膜屏障完整性的功能。Diesing等(2011)表明,濃度為2000 ng/mL的DON作用于豬腸道上皮IPEC-1,IPEC-J2細胞后,緊密連接蛋白ZO-1表達量減少,熒光下觀察到腸道細胞結(jié)構(gòu)被破壞,但DON在較低濃度200 ng/mL時可促進細胞的增殖。由此推出,不同劑量的霉菌毒素對細胞的作用不同,研究不同濃度下霉菌毒素發(fā)揮作用的機理至關(guān)重要。

1.3 霉菌毒素對畜禽內(nèi)臟的危害 霉菌毒素通過對臟器的影響,可破壞畜禽機體機能,影響畜禽產(chǎn)量。

1.3.1 霉菌毒素對腸道的破壞作用 曲霉菌、青霉菌以及鐮刀菌等不同類型真菌產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物,廣泛存在于飼料中,通過食道進入消化系統(tǒng),因此腸道中的霉菌毒素濃度最高,破壞作用最明顯,表現(xiàn)在抑制腸道細胞生長,改變腸道結(jié)構(gòu),影響腸道功能等(Maresca等,2010)。Caloni等(2006)用Caco-2細胞進行體外試驗,模擬腸道吸收模型,用不同濃度黃曲霉毒素M1(AFM1)處理細胞24 h后,與對照組相比,AFM1可抑制細胞生長,Caco-2細胞對AFM1有吸收作用,并且分化的Caco-2細胞比未分化的效果更明顯。Kolf-Clauw等(2009)表明,暴露于DON 4 h后,4~5周齡和9~13周齡豬空腸外植體的絨毛長度有所縮短,并呈現(xiàn)出顯著性差異(P<0.05),但在低濃度(0.3 mg/kg)情況下,4~5周齡豬空腸外植體的絨毛長度無明顯變化。Philippe Pinton等(2012)通過體內(nèi)外試驗表明,DON及其衍生物具有細胞毒性,在毒素濃度為10μmol/L時處理4 h后能夠降低細胞存活率,通過激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路減少腸道緊密連接蛋白的表達,破壞腸道屏障完整性,體內(nèi)試驗中,在仔豬日糧中添加DON(2290μg/kg),與對照組相比,DON及其衍生物可引起仔豬空腸外植體萎縮,腸道絨毛融合,縮短腸道絨毛長度。

1.3.2 霉菌毒素對肝腎的破壞作用 肝臟是動物的解毒器官,外來的或體內(nèi)代謝產(chǎn)生的有毒物質(zhì),均要在肝臟解毒變?yōu)闊o毒的或溶解度大的物質(zhì),隨膽汁或尿液排出體外,因此,霉菌毒素經(jīng)過腸胃吸收后,再次損傷肝腎器官。霉菌毒素可以使肝臟和腎臟變性、膽管組織增生、脾紅髓淤血。Denli等(2009)在雄性肉雞飼糧中添加AFB1,與對照組相比,AFB1能夠增加肝臟的重量,且在添加量為2 g/kg時,肝臟中AFB1的殘留量達到最大值,為0.122μg/kg。Dragan等(2008)從屠宰豬中隨機選取90個肝臟和腎臟組織,用液相色譜法對其OTA含量進行檢測,發(fā)現(xiàn)26.6%的肝臟樣品中OTA的含量值為0.22~14.5 ng/g,在肝腎中的含量與血液中的含量相似,最大值為220.8 ng/mL,在肝腎中的含量與在血液中的含量相似,對腎臟組織進行病理學檢測發(fā)現(xiàn),OTA可引起腎小管水腫和細胞空泡化。Tessari等(2006)在肉仔雞的飼料中單獨或同時添加AFB1和FB1,41 d后,與對照組相比,肝臟的重量均有不同程度的增加,進行組織學觀察發(fā)現(xiàn),肝臟空泡變性,膽管細胞增殖,腎小管細胞也發(fā)生變形,且AFB1和FB1具有加性效應(yīng)。以上研究結(jié)果表明,霉菌毒素對肝腎的損傷作用主要體現(xiàn)在影響肝腎細胞的結(jié)構(gòu)和生長,最終導致臟器的重量發(fā)生變化。

2 霉菌毒素的毒性降解

研究表明,去除或降解霉菌毒素有物理、化學和生物三種方法,霉菌毒素熱穩(wěn)定性較強,為其去除和降解帶來一定困難,雖然在試驗階段已經(jīng)開發(fā)了多種方法,但真正投入生產(chǎn)實踐中的較少。

2.1 物理降解

2.1.1 自然條件降解 物理方法包括加熱、灼燒、微波、擠壓、輻照等,在食品加工階段,熱蒸汽可以帶走部分霉菌毒素,但由于其相對熱穩(wěn)定性較高,大部分不易被破壞。加熱法降解霉菌毒素的程度取決于加熱溫度、水分含量和加熱時間。當加熱溫度達到200℃并保持一定時間時,AF才可以被降解。含水量也是影響AF降解的一個重要因素,在高水分含量條件下,其更易被降解,在干燥條件下,霉菌毒素的降解溫度為170℃,而在潮濕的條件,降解溫度則為140℃;在加熱過程中加入氫氧化鈉,可使OTA失去毒性;218℃下加熱玉米FB115min可導致其毒性完全消失;在擠壓AFB1的過程中加入氨,可增加毒素的降解量。

AF具有光敏性,在自然條件下就能被陽光、紫外線和γ射線等輻射作用降解。陽光照射,可以有效降解橄欖油、花生油中的AFB1;研究表明,AFB1在液體中比在固體中更容易被輻射降解,將其溶解在水溶液中,經(jīng)紫外線照射后,其毒性和致突變性可以明顯的降低(Liu等,1998)。

2.1.2 吸附劑降解 齊德生等(2003)研究表明,水合鋁硅酸鹽類對AFB1有較好的吸附能力,但對其他幾種主要霉菌毒素的吸附效果較差,原因是水合鋁硅酸鹽類屬于黏土礦物吸附劑,其表面具有親水性的負電荷,只能夠吸附帶有極性基團的霉菌霉素。李娟娟等(2009)研究發(fā)現(xiàn),用水合鋁硅酸鹽作為吸附劑有較好的吸收效果,在10 min內(nèi)對AFB1的吸附率達到97.69%,且在60min內(nèi)吸附率一直處在96.03%,另外,在日糧中添加0.5%的水合鋁硅酸鈣可以減輕AFB1對來航蛋雞和肉仔雞的毒害作用。

酯化葡配甘露聚糖、聚乙烯聚吡咯烷酮、消膽胺、納米硒、活性炭已被證明也具有廣泛吸收各種毒素因子的作用,其中活性炭被主要用作AFB1毒性預防的研究,在體外中性pH條件下其能夠有效吸收AFB1。在含有10 mmol/L AFB1的飼料中添加0.1%的活性炭能夠減少AFB1對肉雞的影響(Dalvi等,1984)。

2.2 化學降解 化學試劑可以有效降低AFB1的含量,形成不同降解產(chǎn)物。酸性試劑不能完全降解AFB1,可形成黃曲霉毒素B2(AFB2)、黃曲霉毒素B2a(AFB2a)、黃曲霉毒素D1(AFD1)等不完全降解產(chǎn)物。Shukla等(2002)報道,乳酸可以將AFB1轉(zhuǎn)化為AFB2,將黃曲霉毒素G1(AFG1)轉(zhuǎn)化為黃曲霉毒素G2(AFG2)。Aiko等(2015)報道,乳酸可以有效的將AFB1轉(zhuǎn)化為AFB2和AFB2a,但在加熱條件下,主要轉(zhuǎn)化AFB2a。檸檬酸可使AFB1降解為呋喃環(huán)末端鍵合8,9-烯形式的AFB2a,用鹽酸處理的條件下,升高溫度可使AFB1完全降解,無任何毒素殘留。另外,水楊酸、苯甲酸、硼酸、草酸和丙酸等可以有效的降低高粱作物中90%的AFB1。堿可以引起AFB1中內(nèi)酯環(huán)的水解,但可以在酸性條件下恢復毒性,堿化濕磨法是降低谷物中FB1的一種有效方法,Voss等(2013)人報道,蒸煮谷物時加入堿可有效降低FB1的毒性,其他堿性試劑如亞硫酸氫鈉和過氧化氫也可以用作AFB1的降解。

在所有能夠降解霉菌毒素毒性的化學試劑中,氨的效果最顯著,已被應(yīng)用于玉米工業(yè)生產(chǎn)中,氨可將AFB1轉(zhuǎn)化為AFD1,降低其毒性。Prudente等(2002)報道,臭氧可降解動物飼料中90% 的AFB1,經(jīng)臭氧處理后的黃曲霉毒素將失去毒性和誘變性,臭氧也可以有效的降解AFB2和AFG2、 FB1、OTA和ZEA。

2.3 生物降解

2.3.1 微生物 乳酸菌具有非共價鍵結(jié)合作用,可以去除AFB1和AFM1,熱處理和酸處理鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿茵能夠去除玉米中的赤霉烯酮,作用機制是化學鍵結(jié)合而不是代謝作用。一些真菌物種,例如莖點霉菌,能夠防止AFB1的合成并可降解其毒性。霉菌毒素的降解作用可以發(fā)生在多種食品的制備過程中,例如牛奶生產(chǎn),面團發(fā)酵和啤酒釀造等。一些產(chǎn)毒真菌(寄生曲霉、黃曲霉)還可以降解自身產(chǎn)生的毒素。

2.3.2 酶 真菌代謝產(chǎn)物酶可以降解AFB1。蜜環(huán)菌能夠產(chǎn)生多酶系統(tǒng),通過打開呋喃環(huán)降解AFB1(Liu等,1998)。從黃曲霉和寄生曲酶中產(chǎn)生的過氧化物酶可以降解 AFB1和 AFG1(Singh等,1998)。苜蓿植物中的過氧化物酶也可以降解AFB1(Das等,2000)。

2.3.3 植物提取物 植物提取物是一種對人體和環(huán)境安全的抗真菌劑和抗霉菌劑。植物精油具有很強的抗菌性,八角、香茅、馬蒂尼、藍桉、肉桂等提取的精油具有抗真菌活性(Huang等,2010),保甜瓜種子粉和提取精油可以抑制AFB1(Bankole等,2004),野黃桂精油、圣羅勒和野薔薇被作為食品防腐劑可有效抑制產(chǎn)毒真菌和AFB1。研究表明,丁香及其主要成分丁香油,可以抑制霉菌生長和AFB1的產(chǎn)生(Jayashree等,1999),完整的丁香能夠抑制黃曲霉、桔青霉及其他培養(yǎng)介質(zhì)中毒素的生長(Aiko等,2013)。利用植物提取物去除產(chǎn)毒真菌和霉菌毒素比化學處理更具有優(yōu)勢。

3 結(jié)論

霉菌毒素污染飼料及原料后具有很強的毒性,可影響畜禽的生長性能,破壞免疫功能,損傷臟器,進而影響?zhàn)B殖業(yè)的發(fā)展,更會對人體健康造成威脅,因此解決飼料中霉菌毒素污染的問題尤其重要。目前,大量的研究主要集中于如何防止和去除食品和飼料中的霉菌毒素,如使用氨降解飼料中的霉菌毒素等。總之,在不損害營養(yǎng)價值的前提下,開發(fā)一種安全、適宜的脫毒技術(shù)至關(guān)重要。

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Mycotoxins can affect the synthesis of DNA,RNA and protein,and result in oxidative stress through increase the generation of intracellular reactive oxygen species(ROS),causing oxidative damage and DNA damage.Mycotoxins can infect the growth performance,immunologic function and organ failure in low concentration,which can lead to animal deaths in high concentration.Additionally,differentmycotoxins have different damage to animals,choosing appropriate substancemay alleviate toxicity when feeding livestock.Hence,the review described the influence of themycotoxin to the livestock,and summarized themethod of degradation toxicity in physical,chemical and biology aspects.

mycotoxins;livestock;degradation toxicity

S816.3

A

1004-3314(2017)04-0012-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170404

國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(2011CB100805);現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項資金(nycytx-04-01);中國農(nóng)業(yè)科學院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS12);國家自然科學基金資助項目(31501399)

*通訊作者

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