海南檳榔提取物急性毒性研究及保健飲料開發(fā)

劉月麗+劉讓如+陳良+虞道銳+任瑞+劉輝+易西南

摘 要 研究海南檳榔提取物的急性毒性及保健飲料的開發(fā)。一次性灌胃給予小鼠最大容積和最大混懸濃度的檳榔提取物，觀察小鼠急性毒性反應(yīng)，評(píng)價(jià)檳榔提取物的安全性；正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化得出檳榔提取物、白砂糖和檸檬酸的最佳配方；用不同用量的阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉作為穩(wěn)定劑，評(píng)價(jià)最佳穩(wěn)定劑。14 d內(nèi)，小鼠外觀、精神、行為無異常，檳榔提取物最大給藥量為5.0 g/kg；檳榔飲料的最佳配方為檳榔提取物添加量0.2%，檸檬酸添加量0.05%，白砂糖添加量10%，檳榔飲料的最佳穩(wěn)定劑為0.2%的阿拉伯膠。檳榔提取物安全性高，檳榔保健飲料具有檳榔的淡香味，適合大眾口味。

關(guān)鍵詞 檳榔 ；急性毒性 ；保健飲料

中圖分類號(hào) S59 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.11.020

Abstract To study acute toxicity and preparation of functional health beverage of betel nut extract cultivated in Hainan Island； Betel nut extract was given to mice in the maximum volume and concentration， the response of mice was observed within 14 days to evaluate safety of betel nut extract. Orthogonal experimental design was employed to optimize the preparation of betel nut extract， white granulated sugar and citric acid and then the best stabilizer was figured out among different dose of arabic gum， sodium carboxymethyl cellulose and sodium alga acid. Mice did not show abnormal response to betel nut extract in appearance， consciousness， and behavior within 14 days， the maximum dose of betel nut extract was 5.0 g/kg. Optimized preparation of functional health beverage of betel nut extract was 0.2% betel nut extract， 0.05% citric acid and 10% white granulated sugar. 0.2% arabic gum was the best stabilizer. Betel nut extract is safe and functional health beverage of it posses light smell of betel nut and is suitable to be consumed among population.

Keywords Betel nut ； Acute toxicity ； Functional health beverage

檳榔是四大南藥之首，在海南廣泛種植，檳榔提取物富含多酚，能清除氧自由基，長期應(yīng)用可以減少腸道脂肪的吸收，是中醫(yī)常用的驅(qū)蟲、消積藥物。因其食用和藥用價(jià)值，檳榔已得到廣泛的應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，長期咀嚼檳榔可以導(dǎo)致口腔黏膜下纖維性變、免疫抑制以及神經(jīng)、生殖毒性等，限制了檳榔的使用[1]；檳榔保健飲料前期已有報(bào)道，主要以檳榔鮮果或檳榔花為主要原料制備[2-3]。本研究采用乙醇浸泡、過濾，獲得檳榔提取物，評(píng)價(jià)其急性毒性，并以安全性較高的檳榔提取物為主要原料，開發(fā)檳榔保健飲料，拓寬檳榔的使用范圍。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料

健康雄性昆明種小鼠40只，體重18～22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（粵）2013-0002。

檳榔鮮果，采至海南萬寧后安鎮(zhèn)，檸檬酸、白砂糖均為食用級(jí)，阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉為藥用級(jí)。

1.1.2 設(shè)備及儀器

Anke TDL80-2B型離心機(jī)，Phenix UV1800PC型紫外可見分光光度計(jì)。

1.2 方法

1.2.1 檳榔提取物的制備

將檳榔鮮果洗凈，切開，40℃烘干，粉碎。稱取檳榔粉末20 g，按料液體積比1：10、1：8、1：6加80%乙醇冷浸3 d，提取3次，過濾，合并濾液，定容至500 mL，得檳榔80%乙醇提取物溶液。旋蒸，冷凍干燥，得檳榔提取物。

1.2.2 檳榔提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)

檳榔提取物用0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，得最大濃度混懸液（0.1 g/mL合生藥量0.125 g/mL）。取小鼠20只，灌胃給予最大劑量（40 mL/kg）檳榔提取物，觀察1周，未見死亡，故按最大耐受量進(jìn)行試驗(yàn)。小鼠分為2組，給藥組和對(duì)照組，每組20只。禁食12 h后，給藥組按最大容積灌胃給予檳榔提取物的混懸液1次，對(duì)照組給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉，給藥后觀察小鼠急性毒性反應(yīng)，記錄動(dòng)物的外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、攝食、大小便及其顏色、被毛、膚色、呼吸，鼻、眼、口腔有無異常分泌物，體重變化以及死亡等情況，給藥后連續(xù)觀察4 h。其后每天固定時(shí)間觀察1次，連續(xù)觀察14 d。給藥后第7天、第14天稱重，末次稱重后，脫頸椎將其處死，進(jìn)行大體解剖觀察，若發(fā)現(xiàn)肉眼可見病變，則進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.2.3 檳榔提取物保健飲料生產(chǎn)工藝流程

檳榔保健飲料的生產(chǎn)工藝流程為：新鮮檳榔果→烘干、粉碎→浸提→過濾、旋蒸→冷凍、干燥→取檳榔提取物→調(diào)配→冷藏。

1.2.4 保健飲料最佳配方和最佳穩(wěn)定劑判定

采用L9（34）正交試驗(yàn)方案（見表1）研究檳榔提取物添加量（0.1%，0.2%，0.3%）、白砂糖添加量（6%，8%，10%）及檸檬酸添加量（0.05%，0.10%，0.15%）對(duì)飲料品質(zhì)的影響，感官評(píng)價(jià)飲料品質(zhì)，總分為100分，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見表2。感官評(píng)價(jià)由22位相關(guān)人員根據(jù)感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)完成，以此判斷最佳配方。最佳配方飲料再加入不同濃度的阿拉伯膠（0.1%、0.2%）、羧甲基纖維素鈉（0.1%、0.2%）、海藻酸鈉（0.1%、0.2%），取部分飲料于高速離心機(jī)中4 000 r/min離心15 min，于600 nm下測定其吸光度，對(duì)比離心后與離心前的吸收度值，比值越大者越穩(wěn)定。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

結(jié)果以（χ±S）表示，用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析比較2組小鼠間體質(zhì)量變化，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 檳榔提取物急性毒性結(jié)果

給藥組小鼠精神行為狀態(tài)無異常，毛色光澤，攝食飲水情況正常，無躁動(dòng)不安、呼吸障礙、心跳過速、驚厥、突眼等急性毒性表現(xiàn)，14 d后小鼠均健康存活，未見明顯毒性反應(yīng)。處死小鼠后，觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器，未觀察到肉眼可見病變。小鼠體重給藥前后無明顯變化，見表3。故得出小鼠對(duì)檳榔提取物的最大給藥量為5 g/kg（生藥量）2.2 檳榔飲料的最佳配方和最佳穩(wěn)定劑判定

由極差大小分析，對(duì)檳榔飲料口感影響的主次順序?yàn)锽（白砂糖添加量%）>A（檳榔提取物添加量%）>C（檸檬酸添加量%），即最佳配方為A2B3C1，即檳榔提取物添加量為0.2%，檸檬酸添加量為0.05%，白砂糖添加量為10%，該配方下的檳榔初飲料色澤呈淡紅褐色，感覺舒服，口感細(xì)膩，酸甜適中，沒有苦澀感，有淡淡的檳榔香味，大多數(shù)評(píng)價(jià)者認(rèn)為其較適合大眾化口味，試驗(yàn)結(jié)果見表4。通過對(duì)比加入前和加入后的檳榔保健飲料的吸光度可知，檳榔保健飲料的最佳穩(wěn)定劑為0.2%的阿拉伯膠，具體見表5。

3 結(jié)論與討論

檳榔是四磨湯、柴胡舒肝丸等多種中藥方劑中的組成成分，具有殺蟲、消積、行氣和利水等功效[4]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，檳榔提取物有抗氧化、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)、調(diào)節(jié)血脂、抗疲勞以及抗菌作用[5-11]。檳榔堿的神經(jīng)毒性、免疫毒性以及口腔黏膜下纖維變性毒性[1]等大大限制了檳榔的應(yīng)用。本研究采用檳榔鮮果40℃烘干，80%乙醇冷浸、提取、冷凍烘干，得檳榔乙醇的粗提物，此方法過濾出檳榔果的纖維殘?jiān)Ａ魴壚乒喾蛹捌淇寡趸δ躘6，12]。

一次性灌胃給予小鼠最大濃度最大體積的檳榔80%乙醇提取物，觀察其急性毒性反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1周內(nèi)小鼠未出現(xiàn)死亡，未測出LD50，繼而進(jìn)行最大給藥量試驗(yàn)。最大容積最大濃度灌胃1次后，連續(xù)觀察14 d，小鼠未出現(xiàn)精神行為狀態(tài)異常，14 d后均健康存活，未見明顯毒性反應(yīng)，處死后肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎，未發(fā)現(xiàn)異常，體重給藥前后無明顯變化。由此可知，檳榔提取物的小鼠最大給藥量為5.0 g/kg。

檳榔提取物保健飲料最佳配方：檳榔提取物添加量0.2%，檸檬酸添加量0.05%，白砂糖添加量10%；最佳穩(wěn)定劑：0.2%的阿拉伯膠。該配方下飲料顏色為淡紅褐色，口感細(xì)膩，酸甜適中，沒有苦澀感，有淡淡的檳榔香味，較適合大眾化口味。檳榔是全球廣泛使用的嗜好品，但檳榔毒性限制了其使用。檳榔保健飲料除去檳榔的纖維成分，保留其它營養(yǎng)物質(zhì)及抗氧化成分，具有較高的食用價(jià)值。

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