神經前體細胞表達下調蛋白9在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 盛穎玥， 王文遠， 薛育政

(無錫市第三人民醫院 消化科， 江蘇 無錫 214000)

神經前體細胞表達下調蛋白9在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 盛穎玥， 王文遠， 薛育政

(無錫市第三人民醫院 消化科， 江蘇 無錫 214000)

目的 檢測神經前體細胞表達下調蛋白(NEDD)9在胰腺癌和癌旁組織的表達情況，分析其與胰腺癌進展、預后的關系。方法 收集2005年8月-2010年12月于無錫市第三人民醫院治療的98例胰腺癌患者的癌和癌旁組織樣本，應用免疫組化技術檢測患者胰腺癌和癌旁組織中NEDD9的表達，并對NEDD9表達與胰腺癌臨床病理特征的關系進行分析。計數資料組間比較采用χ2檢驗。結果 胰腺癌組織中NEDD9的高表達率明顯高于癌旁組織(57.1% vs 41.8%，χ2=4.592，P=0.032)。胰腺癌組織NEDD9的表達與患者TNM分期、分化程度及有無淋巴結轉移相關(χ2值分別為45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)；與性別、年齡、腫瘤部位、有無肝轉移無相關性(P值均>0.05)。結論 NEDD9可能在胰腺癌的發展和侵襲轉移中起著一定的作用，有可能作為評估胰腺癌預后的分子指標和治療靶點。

胰腺腫瘤； 神經前體細胞表達下調蛋白9； 病理狀態， 體征和癥狀

胰腺癌是我國常見的消化系統惡性疾病，具有惡性程度高、早期診斷困難、有效治療手段缺乏、預后差等特點[1-2]。因此，探索新的有效的分子生物學檢測指標和新的治療靶點十分必要。神經前體細胞表達下調蛋白(neural precursor cell expressed developmen-tally down-regulated，NEDD)9是一種骨架蛋白分子，參與調控細胞遷移、分裂及凋亡，在多種惡性腫瘤如乳腺癌[3]、黑色素瘤[4]中均呈高表達，并與腫瘤的侵襲及轉移密切相關。目前，關于NEDD9在胰腺癌中的表達情況了解甚少，故本研究檢測NEDD9在胰腺癌和癌旁組織中的表達情況，并探討NEDD9的表達與臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2005年8月-2010年12月于本院行手術治療的98例胰腺癌患者的癌和癌旁組織樣本，所有患者術前未經過放、化療及免疫治療等，術后病理確診為胰腺癌。腫瘤分期及臨床病理分級參考《胰腺癌診治指南(2014)》[5]。定義Ⅰ期和Ⅱ期胰腺癌患者為早期,Ⅲ期和Ⅳ期患者為晚期。

1.2 研究方法 采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化技術，按免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)說明書進行操作。NEDD9 多克隆一抗稀釋度為1∶300。二抗采用過氧化物酶標記，以DAB顯色。常規石蠟包埋，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，微波抗原修復，PBS 代替一抗作為陰性對照。根據細胞不同部位著色深淺判斷細胞染色的數量和強度。每個樣本顯微鏡下觀察10 個400倍放大視野，每次觀察其中100個細胞。若陽性細胞<5%，則記為0分;陽性細胞占觀察細胞總數的5%～25%,記為1 分，26%～50%記為2分；>50%記為3分。顯微鏡下觀察染色強度：陽性細胞染色呈黃色為1分；棕黃色為2分； 棕褐色為3 分。采用乘法計算陽性細胞所占總觀察細胞的比值和陽性細胞染色強度的交集以確定最終觀察結果： 0分為陰性，1～4分為弱陽性，5～8分為中陽性，9～12分為強陽性；前兩者為低表達，后兩者為高表達。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行統計學分析。計數資料組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NEDD9 在胰腺癌和癌旁組織中的表達情況 免疫組化結果顯示，NEDD9主要在細胞漿著色。NEDD9在胰腺癌組織中高表達56例(57.1%)，低表達42例(42.9%)；在癌旁組織中高表達4l例(41.8%)，低表達57例(58.2%)。NEDD9在胰腺癌組織中與癌旁組織中的表達程度差異有統計學意義(χ2=4.592，P=0.032)(圖1)。

圖1 NEDD9在胰腺癌和癌旁組織中的表達(×200)a：胰腺癌組織；b：癌旁組織

2.2 NEDD9的表達與患者臨床病理特征的關系 胰腺癌組織NEDD9表達高低與患者臨床分期、腫瘤分化程度以及淋巴結轉移密切相關(χ2值分別為45.02、20.41、36.21，P值均<0.001)，與患者年齡、性別、腫瘤部位、有無肝轉移無相關性(P值均>0.05)(表1)。

表1 NEDD9的表達與臨床病理特征的關系(例)

3 討論

NEDD9作為一種細胞骨架蛋白分子，主要包括SH3 結構域、底物結構域、富含絲氨酸的序列及進化非常保守的C末端結構域，能與多種功能性蛋白相互作用，在細胞黏附、趨化、遷移和侵襲、浸潤、凋亡和細胞周期以及上皮-間質轉化中發揮著重要的作用[6]。NEDD9在胃癌[7]、宮頸癌[8]、肝癌[9]等惡性腫瘤中均有高表達且與腫瘤的遷移、浸潤密切相關。然而，NEDD9在胰腺癌的表達情況不是十分清楚。

本研究結果顯示，NEDD9在胰腺癌組織呈高表達，在癌旁組織呈低表達，兩者比較差異有統計學意義(P<0.05)。與Zhang等[7]對胃癌、Sima等[8]對宮頸癌及Kozyulina等[10]對乳腺癌的研究結果類似。同時胰腺癌組織中NEDD9的高表達與腫瘤臨床特征如分期、分化程度及淋巴結轉移等相關，提示NEDD9可能參與胰腺癌的侵襲轉移過程。關于NEDD9參與腫瘤遷移和侵襲的機制，目前研究[11]認為，NEDD9被Src和FAK磷酸化后直接與接頭分子Crk相互作用，正向調節Src-FAK-Crk遷移開關，促進鈣黏蛋白降解，減慢黏著斑分解，促進整合素受體激活和上皮-間質轉化。體外實驗[12]發現，過表達NEDD9可以促進細胞的遷移，細胞隨機遷移的速度和趨向性反應都有所增強；降低NEDD9的表達可以導致細胞化學趨向性降低。Sima等[8]研究發現，過表達NEDD9能夠促進宮頸癌細胞遷移和侵襲；張思森等[13]研究發現，RNA干擾沉默NEDD9能夠抑制胃癌細胞遷移和侵襲，誘導其凋亡。另外，盡管本研究顯示NEDD9表達與有無肝轉移無明顯相關性，但未來仍需要大量標本證實。

綜上所述，NEDD9 在胰腺癌組織中高表達，可能與胰腺癌浸潤、侵襲相關。NEDD9的檢測方法簡單，臨床易于操作，有可能成為評估胰腺癌患者預后的分子生物學指標和新的分子靶向治療靶點。此外，NEDD9參與胰腺癌細胞生物學行為的具體機制還需要進一步探討。

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引證本文：WU TL, XUE LL, DAI YY, et al. Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(1): 130-132. (in Chinese) 吳鐵龍， 薛麗莉， 戴圓圓， 等. 神經前體細胞表達下調蛋白9在胰腺癌組織中的表達及臨床意義[J]. 臨床肝膽病雜志, 2017, 33(1): 130-132.

(本文編輯：葛 俊)

Expression of NEDD9 and its clinical significance in pancreatic cancer

WUTielong,XUELili,DAIYuanyuan,etal.

(DepartmentofGastroenterology,TheThirdPeople′sHospitalofWuxi,Wuxi,Jiangsu214000,China)

Objective To investigate the expression of neural precursor cell-expressed, developmentally down-regulated 9 (NEDD9) in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues and its association with the progression and prognosis of pancreatic cancer. Methods A total of 98 patients with pancreatic cancer who were treated in The Third People′s Hospital of Wuxi from August 2005 to December 2010 were enrolled, and the samples of pancreatic cancer tissues and adjacent tissues were collected. Immunohistochemistry was used to measure the expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues and adjacent tissues. The chi-square test was used for comparison of categorical data between groups. Results The high expression rate of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues (57.1% vs 41.8%,χ2=4.592,P=0.032). The expression of NEDD9 in pancreatic cancer tissues was significantly associated with TNM stage, degree of tumor differentiation, and lymph node metastasis (χ2=45.02, 20.41, and 36.21, allP<0.001) and not associated with sex, age, tumor location, or presence or absence of liver metastasis (allP>0.05). Conclusion NEDD9 may play a role in the progression and invasion/metastasis of pancreatic cancer and can be used as a prognostic marker and a therapeutic target for pancreatic cancer.

pancreatic neoplasms； NEDD9； pathological conditions, signs and symptoms

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.01.028

2016-08-09；

2016-08-20。

江蘇省“六大人才高峰”基金(WSN-066)；江蘇省“333工程”科研項目(CAE01101-06)；無錫市醫院管理中心科研項目(YGZXQ1310)；無錫市社會發展科技支撐項目(CSE31N1415)

吳鐵龍(1990-)，男，主要從事胰腺癌侵襲浸潤的分子機制研究。

薛育政，電子信箱：xueyz001@163.com。

R735.9

A

1001-5256(2017)01-0130-03