PCR熒光法與PCR-反向點雜交法檢驗人乳頭瘤病毒對比分析

李美珠，林 靜

（佛山市第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

宮頸癌屬于比較常見的女性惡性腫瘤疾病，近年來，患者的發(fā)病人數(shù)不斷增多，加強對此類患者的篩選具有必要性，而人乳頭瘤病毒檢查屬于篩選宮頸癌的重要手段，檢驗人乳頭瘤病毒的方法有多種[1]。筆者研究樣本資料是2014年4月～2017年4月本院收治的100例宮頸炎或是疑似人乳頭瘤病毒感染的患者，研究將PCR熒光法和PCR-反向點雜交法應用于人乳頭瘤病毒檢驗的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

筆者將2014年4月～2017年4月本院收治的100例宮頸炎或是疑似人乳頭瘤病毒感染的患者歸于研究樣本，年齡21～58歲，計算并統(tǒng)計年齡平均值是（34.33±2.05）歲。

1.2 方法

PCR-反向點雜交法檢驗方法：能檢出十八種高危型人乳頭瘤病毒DNA亞型及五種低危型人乳頭瘤病毒DNA亞型，應用的引物是HPV L1基因，基因有452bp。應用的引物MY 09序列是5'-CGTCCMARRG-GAWACTGATC-3'，應用的引物MY l1序列是5'-GCMCAGGGWCATAAYAATGG-3'，其中，M代表A加C，R代表A加G，W代表A加T，Y代表C加T。依據(jù)試劑盒相關(guān)說明書執(zhí)行相關(guān)操作步驟，主要是含有DNA的提取步驟、PCR擴增步驟、雜交步驟、洗膜步驟、顯色步驟。PCR熒光法檢驗方法：能檢出十三種高危型人乳頭瘤病毒DNA亞型，相關(guān)操作步驟主要是，DNA的提取步驟、PCR擴增步驟(總的反應體系有25ul，DNA的模板有2ul)。相關(guān)循環(huán)參數(shù)是94℃預變性5分鐘，94℃保持15秒，60℃保持45秒，開展四十個循環(huán)。

1.3 指標觀察

（1）統(tǒng)計100例宮頸炎或是疑似人乳頭瘤病毒感染的患者不同檢驗方法的陽性檢出合計值。（2）統(tǒng)計100例宮頸炎或是疑似人乳頭瘤病毒感染的患者不同檢驗方法的結(jié)果符合總計值。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS21.0 統(tǒng)計學軟件進行分析，采用x2檢驗，計量資料以例數(shù)（n）、采用百分數(shù)（%）表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 100例患者不同檢驗方法的陽性檢出合計值比較

PCR-反向點雜交法檢驗的陽性檢出合計值29.00%與PCR熒光法檢驗17.00%相對比更高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 100例患者不同檢驗方法的陽性檢出合計值對比

2.2 100例患者不同檢驗方法的結(jié)果符合總計值

PCR熒光法檢驗結(jié)果和PCR-反向點雜交法檢驗結(jié)果相對比，檢查陰性符合總計值是70.00%（14/20），檢查陽性符合總計值是93.02%（80/86），檢查總符合總計值是94.00%（94/100）。

表2 100例患者不同檢驗方法的結(jié)果符合總計值分析

3 討 論

宮頸癌具有比較高的發(fā)病率，對宮頸癌患者健康帶來重要危害[2]。而大多數(shù)宮頸癌均是因受到人乳頭瘤病毒的感染而致病，所以，檢測人乳頭瘤病毒屬于對宮頸癌進行篩查的重要方式[3-4]。

PCR-反向點雜交法能檢出十八種高危型人乳頭瘤病毒DNA亞型及五種低危型人乳頭瘤病毒DNA亞型，PCR熒光法能檢出十三種高危型人乳頭瘤病毒DNA亞型，PCR-反向點雜交法的檢出范圍更廣，不過，PCR-反向點雜交法屬于定性檢測，一般不可用作治療效果相關(guān)判定指標。PCR熒光法一般可用作治療效果相關(guān)判定指標，且不需完成分子雜交過程和洗脫過程等，可減少檢測耗時。筆者結(jié)果呈現(xiàn)，PCR-反向點雜交法檢驗的人乳頭瘤病毒陽性檢出合計值顯著高于PCR熒光法檢驗，出現(xiàn)P＜0.05統(tǒng)計數(shù)值差異，PCR熒光法檢驗結(jié)果和PCR-反向點雜交法檢驗結(jié)果相對比，檢查陰性符合總計值是70.00%（14/20），檢查陽性符合總計值是93.02%（80/86），檢查總符合總計值是94.00%（94/100）。

綜上所述，PCR熒光法和PCR-反向點雜交法用于人乳頭瘤病毒檢驗具有比較高的相符性，而且，PCR-反向點雜交法檢驗的陽性檢出率更高。

[1] 馮瑞梅,陳 汶,喬友林,等.高危型人乳頭瘤病毒核酸體外檢測試劑盒臨床功能驗證的中美指導原則解讀[J].中華腫瘤雜志,2017,39(7):553-557.

[2] 余花艷,任統(tǒng)偉.人乳頭瘤病毒感染宮頸疾病患者外周血中MDSC、Treg、Th17細胞變化研究[J].中華微生物學和免疫學雜志,2017,37(8):586-593.

[3] 趙旭曄,崔 勇,姜淑芳,等.高危型人乳頭瘤病毒E6/E7mRNA檢測在宮頸癌篩查中的意義[J].中華醫(yī)學雜志,2014,94(43):3432-3435.

[4] 張 洋,胡爾西旦·尼亞孜,趙化榮,等.新疆不同民族頭頸部鱗狀細胞癌組織中人乳頭瘤病毒的感染情況及病毒載量分析[J].中華腫瘤雜志,2014,36(11):849-850.