地黃飲子治療對腦缺血大鼠行為學評分的影響

劉恒濤

地黃飲子治療對腦缺血大鼠行為學評分的影響

劉恒濤

目的 觀察地黃飲子治療對腦缺血大鼠的行為學評分的影響。方法 選取清潔級大鼠80只，隨機分為地黃飲子組、尼莫地平組、缺血組、對照組，各20只。10%水合氯醛麻醉，暴露并鉗夾雙側頸總動脈40 min，造模使大鼠急性腦缺血。地黃飲子組：造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg。尼莫地平組：造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，缺血組：造模后每日灌服生理鹽水1次。對照組：正常飲食。連續3周。分別在實驗的第1周、第2周、第3周檢測Longa評分、Berderson評分和腦腦梗死面積。結果 對照組Longa評分、Berderson評分和梗死面積為0分。地黃飲子組Longa評分、Berderson評分和腦梗死面積均明顯低于缺血組，差異有統計學意義(P<0.05)，尼莫地平組Longa評分、Berderson評分和梗死面積與缺血組比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 地黃飲子能夠修復腦缺血再灌注損傷，抗氧化作用，減少細胞凋亡，修復神經元，提高學習記憶功能。

腦缺血；地黃飲子；行為學；中風

腦缺血在臨床上較為常見，若控制不好，發展為腦缺血性中風常導致殘疾和死亡，直接影響病人的生活質量。腦缺血時大腦神經受到損傷，神經生長因子受到抑制，缺血區的神經細胞減少，神經功能缺失[1-2]。“毒損腦絡”是中醫對中風理論的新學說，認為由于毒邪損傷了腦絡導致中風發作，絡脈破損或拘攣瘀閉，由氣血滲灌失常導致[3]。中藥地黃飲子具有驅毒化瘀、滋腎陰、補腎陽的功效。近年來，缺血性腦血管病發病率極高，在腦血管病中約占80%[4]，地黃飲子在臨床上治療缺血性腦血管病、中風及后遺癥、血管性癡呆等取得一定療效。本研究觀察地黃飲子對腦缺血大鼠行為學的影響，進一步探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物分組 健康清潔級Wistar大鼠80只，雌雄不限，體重250 g～280 g，由中國醫科大學動物部提供，動物合格證號：SCXK-LN2013-0009。隨機分為地黃飲子組、尼莫地平組、缺血組、對照組，各20只。地黃飲子組：造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg，連續3周。尼莫地平組：造模后每日灌服尼莫地平(天津中央藥業公司生產，生產批號：20130067，規格：每片20 mg。用注射用水溶解)12.5 mg/kg，連續3周。缺血組：造模后每日灌服生理鹽水1次。對照組：正常飲食。連續治療3周。

1.2 造模方法 用10%水合氯醛麻醉大鼠，固定后頸部正中切開，分離出雙側頸總動脈并用動脈夾鉗夾40min，用溫鹽水紗布保護切口創面，松開動脈夾40 min后，再次用動脈夾鉗夾40 min，使大鼠處于急性腦缺血狀態，造模成功。

1.3 藥物 按照《黃帝素問宣明論方》記載的地黃飲子配制：熟地黃12 g，巴戟天15 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，炮附子15 g，麥門冬15 g，肉蓯蓉15 g，五味子10 g，官桂10 g，遠志10 g。用12倍量和10倍量水煎煮2次，每次1 h，將兩次藥液混合，用旋轉儀蒸發濃縮，干燥密封備用。

1.4 行為學Longa評分評定 分別在動物實驗的第1周、第2周、第3周檢測，神經行為學檢查分為5等級：①正常行為，無神經功能缺損為0分；②大鼠左前爪不能完全伸展開，有輕度的神經功能缺損為1分；③大鼠行走時，向一側轉圈，有中度的神經功能缺損為2分；④大鼠行走時，向一側傾倒，有重度的神經功能缺損為3分；⑤大鼠不能自主行走，或者意識喪失為4分。

1.5 Berderson評分評定 分別在動物實驗的第1周、第2周、第3周檢測。方法：提尾懸空時姿勢反應測試，將大鼠提尾懸空1 m，觀察它的前肢變化，正常大鼠四肢向四周伸展抓向地面，整個檢查需要3 min～5 min完成。①正常(0分)：雙前肢不完全伸展，沒有神經功能缺損；②中度(1分)：一側肢體長時間彎曲，如屈腕、肘部屈曲、肘部伸直時腕部屈曲、肩內收；③重度(2分)：將大鼠放在墊子上，抓住它尾巴向不同方向拖拽滑動，大鼠癱瘓側抵抗力嚴重下降，不伴有自主轉圈。④3分：同重度2分的行為，伴有自主轉圈動作。

1.6 腦梗死面積測量 實驗3周后，斷頭取腦，鹽水沖洗大腦并吸干，將大腦冠狀切片，加入1%2.3.5-三苯基四氮唑的磷酸緩沖液中，避光30 min，間隔6 min轉動1次，把腦片放在電鏡圖像分析系統中，計算腦梗死面積，計算公式：腦梗死面積=(白色的梗死面積/片子的總面積)×100%。

1.7 統計學處理 采用SPSS17.0進行統計分析，多組間用單因素方差分析比較，組間兩兩比較用q檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠Longa評分比較 對照組Longa評分為0分。在第1周、第2周、第3周，地黃飲子組Longa評分明顯低于缺血組，差異有統計學意義(P<0.05)，尼莫地平組Longa評分與缺血組比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

分

2.2 各組大鼠Berderson評分比較 對照組Berderson評分為0分。在第1周、第2周、第3周，地黃飲子組Berderson評分明顯低于缺血組，差異有統計學意義(P<0.05)，尼莫地平組Berderson評分與缺血組比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表2。

分

2.3 各組大鼠腦梗死面積比較 對照組腦梗死面積為0。地黃飲子組腦梗死面積明顯低于缺血組，差異有統計學意義(P<0.05)，尼莫地平組腦梗死面積與缺血組比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 各組大鼠腦梗死面積比較 %

3 討 論

正常狀態下，保持氧化與抗氧化間的平衡，使機體免受損傷，若平衡被打破，機體損傷疾病發生。本研究通過夾閉大鼠的頸總動脈，使大鼠腦處于急性缺血缺氧狀態，通過不同的治療方法，觀察大鼠的行為學Longa評分和Berderson評分，測量腦梗死面積，結果顯示：地黃飲子治療效果明顯優于尼莫地平，行為Longa評分、Berderson評分和腦梗死面積明顯低于缺血組。有研究證實：地黃飲子能明顯降低腦細胞的過氧化反應，提高神經細胞神經元超氧化物歧化酶(SOD)活性和含量，提高機體清除過多的氧自由基能力，減少過氧化造成的損傷，維持細胞正常功能，因此地黃飲子治療腦缺血損傷的主要保護機制是增加SOD活性，降低氧自由基含量[5-6]。有研究發現：地黃飲子可以顯著提高腦組織中氧化應激的能力和學習記憶的功能，通過不同劑量的地黃飲子臨床研究顯示，高劑量的地黃飲子明顯提高大鼠腦內抗氧化酶的活性，減少細胞凋亡和氧化損傷，延緩大腦老化，保護腦細胞的功能[7-8]。

有研究發現[9-10]：地黃飲子在治療腦梗死時，可以明顯減輕腦水腫，減輕腦缺血損傷造成的神經功能缺失癥狀，同時改善大鼠腦缺血后再灌注造成的損傷。李文英等[11-12]研究證實地黃飲子能夠使SDF1蛋白表達增高，SDF1/CXCR4信號傳導增強，加快海馬區神經干細胞的增殖、遷移，并在缺血區進一步分化為神經元，彌補神經元缺失造成的損傷。

用地黃飲子治療腦缺血、阿爾茨海默病、老年病等已經取得明顯的治療效果，實驗研究也證實了地黃飲子能夠修復腦缺血再灌注時的損傷，具有抗氧化，減少氧自由基含量，減少細胞凋亡，提高學習記憶能力，修復神經元功能缺失等作用。為臨床上治療老年病提供了更有力的理論依據。

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[12] 王倩，范文濤，賀又舜．地黃飲子對大鼠局灶性腦缺血后SDF-1蛋白的影響[J]．陜西中醫，2014，35(11)：1564-1566．

(本文編輯郭懷印)

遼寧省沈陽市第九人民醫院(沈陽 110024)，E-mail：ly200920516@sina.com

引用信息：劉恒濤.地黃飲子治療對腦缺血大鼠行為學評分的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2017，15(2)：168-170.

R743 R2555.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.02.012

1672-1349(2017)02-0168-03

2016-06-12)