腦血疏口服液對腦出血大鼠血腫體積及神經功能的影響

劉志華 吳 鴻

(河南省中醫院腦病科，河南 鄭州 450002)

腦血疏口服液對腦出血大鼠血腫體積及神經功能的影響

劉志華 吳 鴻1

(河南省中醫院腦病科，河南 鄭州 450002)

目的 探討腦血疏口服液對腦出血(ICH)模型大鼠血腫體積及神經功能的影響。方法 77只雄性SD大鼠，隨機分為ICH對照組(n=35)、ICH實驗組(n=35)及假手術組(n=7)，ICH對照組和實驗組使用Ⅳ型膠原酶造模，術后12 h給予ICH實驗組腦血疏口服液灌胃1 ml/kg，其他兩組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。治療后將ICH對照組和實驗組分為1、2、4、7、14 d 5個亞組，每組7只，采用Longa法對兩組不同時間的神經功能進行評估，并測量腦血腫體積的變化。結果 治療后7 d和14 d，ICH實驗組大鼠Longa評分顯著低于ICH對照組(均P<0.05)，治療后4～14 d ICH實驗組大鼠血腫體積顯著小于ICH對照組(均P<0.05)。結論 腦血疏口服液治療ICH大鼠療效確切，能顯著促進血腫的吸收，恢復大鼠神經功能。

腦血疏口服液；腦出血

腦出血(ICH)是一種原發性非外傷性腦實質內出血的急性腦血管病，起病急驟、發展迅速、致死和致殘率高，發病30 d內的死亡率高達約46%，存活的患者也大多存在不同程度的神經功能損傷癥狀，其中超過80%的患者在發病6個月內生活不能自理，超過50%的患者終生殘疾，生存質量受到極大影響，也給家庭造成了沉重的負擔〔1〕。迄今為止，ICH的發病機制尚未完全闡明，其病理改變既包括了血腫對周圍組織的機械壓迫和血腫的占位效應對腦組織造成的直接破壞，也包括了血腫的繼發性損傷〔2〕。因為出血迅速，機械壓迫和占位效應已經產生損傷，因此對ICH的治療不能解決血腫對腦組織的直接損傷作用，但是普遍認為對于ICH的繼發性神經損傷的治療能取得較好療效〔3〕。目前，ICH的治療主要依靠甘露醇等脫水劑，缺乏神經保護藥物，療效不甚理想。腦血疏口服液是根據中醫名著《醫林改錯》和《金匱要略》中的方劑調整而成〔4〕，具有活血、化瘀的作用。本研究應用腦血疏口服液治療ICH模型大鼠，觀察其對神經功能和血腫體積影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 SD雄性大鼠77只，體重200～250 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司〔合格證號:SCXK(滬)2009-0005,清潔級〕。動物飼喂在實驗室(生物安全防護水平為BSL-1)，實驗室溫度恒定(24.2±1.1)℃，相對濕度50%～70%，維持12 h光照節律，自由攝食、飲水。所有大鼠依據隨機數字表法分為ICH對照組(n=35)、ICH實驗組(n=35)及假手術組(n=7)。

1.2 實驗試劑和儀器 Ⅳ型膠原酶購自美國Sigma公司，腦血疏口服液購自山東沃華醫藥科技股份有限公司(國藥準字Z20070059)，10%水合氯醛購自成都科龍化工試劑廠，生理鹽水和4%多聚甲醛購自美國Hyclone公司，1 μl微量注射器購自上海醫用激光儀器廠，大鼠腦立體定位儀購自深圳瑞沃德生命科技有限公司，高速冷凍切片機購自沈陽龍首電子儀器有限公司，倒置顯微鏡及電子成像系統購自日本Olympus公司。

1.3 造模方法 所有大鼠適應性喂養7 d后，禁食禁水8 h。10%水合氯醛360 mg/kg腹腔注射，待大鼠進入麻醉狀態后，頭部備皮，俯臥位將大鼠頭部固定于立體定位儀上，沿正中矢狀縫縱行切開頭部皮膚，鈍性分離皮下組織，用過氧化氫溶液棉球輕輕擦掉骨膜，充分暴露冠狀縫和前囟，在冠狀縫前1 mm中線右側3 mm處用牙科鉆鉆開顱骨。ICH組處理方法：將預先潤洗過的微量注射器吸取Ⅳ型膠原酶2 μl緩慢勻速注射進腦組織尾狀核內，注射時間約為3 min，留針15 min，緩慢抽出注射器。假手術組處理方法：進針后不注射，留針15 min后抽出注射器。術后所有大鼠封閉顱骨缺口，縫合頭皮，并給予慶大霉素0.3 ml肌注，預防感染，并將大鼠送回籠中繼續飼養。

1.4 治療方法 術后12 h，ICH實驗組給予腦血疏口服液灌胃，1 ml/kg，2次/d；ICH對照組及假手術組給予同等劑量生理鹽水灌胃，2次/d。

1.5 觀察指標 ICH實驗組及對照組大鼠分別于治療后1、2、4、7、14 d進行神經功能評估，然后斷頭處死，測量血腫體積，每次分組處理，每組7只。

1.5.1 神經功能評價 術后12 h、治療1、2、4、7、14 d后，采用Longa法〔5〕對大鼠進行神經功能評估：無神經病學癥狀，0分；左前肢伸展不全，1分；行走時左側旋轉，2分；行走時左側跌倒，3分；行走不能，4分。術后12 h評分≥1分說明ICH模型制備成功，評分<1的大鼠則剔除，按分組原則隨機抽樣補齊動物后重新制備模型。

1.5.2 血腫體積測量 將處死后的大鼠取出全腦，生理鹽水沖洗后置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，固定后將大鼠腦組織固定于高速冷凍切片機上，以注射器進針通道為中心行冠狀面連續切片，層厚0.5 mm，切片用石蠟包埋、蘇木素-伊紅(HE)染色，在光學顯微鏡下觀察并照相，應用圖像分析系統計算血腫體積，血腫體積=切片厚度(mm)×切片出血灶面積(mm2)×切片數量〔3〕。

1.6 統計學方法 應用SPSS17.0軟件，計量資料組間比較采用t檢驗。

2 結 果

2.1 神經功能評分 術后12 h ICH組大鼠出現不同程度的左側肢體功能障礙，且Longa評分≥1分，而假手術組大鼠則沒有肢體活動異常，提示造模成功。治療后1～14 d ICH實驗組和對照組的Longa評分均呈現逐漸下降的趨勢，且治療后1～4 d，ICH實驗組和對照組大鼠Longa評分未見統計學差異(P>0.05)，治療后7 d和14 d ICH實驗組大鼠Longa評分顯著低于ICH對照組(均P<0.05)。見表1。

2.2 血腫體積變化 取大鼠腦組織時，ICH對照組和實驗組大鼠均可在右側尾狀核處觀察到不同程度的血腫，并伴隨血腫周圍組織腫脹和中線位移等表現。血腫體積隨飼喂時間增加逐漸減小，治療后1～2 d兩組大鼠血腫體積無統學差異(P>0.05)，治療后4～14 d ICH實驗組大鼠血腫體積顯著小于ICH對照組(均P<0.05)。見表1。

組別Longa評分(分)1d2d4d7d14d腦血腫體積(mm3)1d2d4d7d14dICH對照組3.28±0.512.85±0.712.57±0.782.28±0.631.42±0.7154.83±2.0651.35±2.3848.62±3.3144.61±3.5933.57±4.16ICH實驗組3.14±0.452.71±0.642.14±0.611.51±0.520.71±0.4453.65±2.2749.36±3.8643.75±3.6836.17±3.8821.73±3.74t值0.5450.3881.1492.4942.2491.0181.1612.6034.2245.600P值0.5960.7050.2730.0280.0440.3290.2680.0230.0010.000

3 討 論

ICH的病因主要有高血壓、動脈硬化等，主要發生在40歲以上人群中，其中50歲以上人群是高發人群；但近年來研究發現ICH發病呈現年輕化的趨勢〔6〕。目前的治療方法主要有藥物治療、手術治療和輔助治療，其中手術治療雖能及時清除病灶，但是并不能逆轉已經受損的神經功能，并且手術造成的出血也可能損傷患者其他腦組織。因此，目前缺乏循證醫學的明確證據，手術治療方法仍存在爭議；輔助治療包括降血壓、降顱內壓、維持水鹽平衡、調節體溫等，對血腫的消除沒有直接作用，僅能保護神經功能不受進一步損傷〔7〕。

中醫治療講究辨證施治，對中風的治療歷史悠久，有針灸和中藥內服外敷等，傳統中醫中沒有將缺血性中風和出血性中風進行有效區分，二者雖然癥狀相同，卻各具特點，因此以往采取中藥治療并未獲得良好療效〔8〕。腦血疏口服液由《醫林改錯》中的補陽還五湯加上《金匱要略》中的大黃蟅蟲丸調整而來，主要成分為黃芪、水蛭、牡丹皮、石菖蒲、大黃、牛膝、川芎等〔4〕。本研究將其應用于Ⅳ型膠原酶致ICH大鼠治療，結果顯示腦血疏口服液治療ICH大鼠療效顯著，有助于血腫吸收，促進神經功能恢復。現代醫學研究表明ICH后繼發性的腦水腫引起的占位效應是影響患者預后的重要危險因素，早期由于血凝塊收縮，血液中的液體成分外滲導致水腫發生，隨后由于出血導致的凝血酶活化，促進細胞毒性水腫形成，并影響血腦屏障功能，進一步導致血管源性水腫〔9〕，凝血酶的活化在這一過程中發揮了重要作用。現有研究表明黃芪提取物黃芪苷對于凝血酶激活途徑中的凝血酶受體基因的表達具有顯著的抑制作用，可以從源頭上阻斷這一病理改變的進展，減輕腦出血后繼發性水腫造成的損傷〔10〕。此外，水蛭素也具有特異性凝血酶抑制劑的功能，與黃芪苷發揮協同作用，有效控制了繼發性水腫對腦神經功能造成的損傷〔11〕。腦血疏口服液中的其余幾位藥材還具有益氣、活血、化瘀的功能，其中大黃、石菖蒲組成的中藥灌腸應用于治療高血壓性ICH患者也取得了良好的療效〔12〕，提示本方劑組方合理，療效確切。

1 常 燃,紀鳳穎,張琳焓,等.腦出血繼續出血的臨床及CT的診斷研究進展〔J〕.現代生物醫學進展,2014;14(28):5579-81,5551.

2 李 萍,趙樹明,胡亞男,等.腦出血發病機制研究進展〔J〕.中華老年心腦血管病雜志,2015;17(2):214-5.

3 任吉祥,畢鐵琳,周翔宇,等.破血化瘀,填精補髓方劑對腦出血大鼠腦血腫周圍組織生長因子的表達〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(2):445-9.

4 康 蓓,宋允章,郭生龍,等.腦血疏口服液治療大面積腦梗死臨床效果觀察〔J〕.中國醫藥,2015;10(4):508-10.

5 Li W,Gao J,Wei S,etal.Application values of clinical nursing pathway in patients with acute cerebral hemorrhage〔J〕.Exp Ther Med,2016;11(2):490-4.

6 吳鵬杰,劉 偉,李勝利,等.高血壓腦出血的外科治療〔J〕.中國微侵襲神經外科雜志,2015;20(4):164-5.

7 遲風令,孫樹杰,唐學杰,等.1310例高血壓腦出血手術療效總結〔J〕.中華急診醫學雜志,2013;22(12):1333-7.

8 侯學寨,張志民,郭麗菊,等.水蛭活血散腫口服液對實驗性腦出血大鼠腦水腫的影響〔J〕.河北中醫,2013;35(5):756-7.

9 惠衛寧,褚榮濤,邵國平,等.腦出血后血腫周圍腦組織腦細胞凋亡與凝血酶的關系〔J〕.江蘇醫藥,2013;39(22):2713-6,封3.

10 趙 劍,劉廣輝,梁 亮,等.黃芪甲苷對大鼠腦出血后腦水腫及水通道蛋白4表達的影響〔J〕.寧夏醫科大學學報,2015;37(8):879-82,886,前插2.

11 王新高,趙性泉.腦血疏口服液治療急性腦出血的配對研究〔J〕.中西醫結合心腦血管病雜志,2015;13(7):937-8.

12 羅 衛,劉曉燕,胡珍淵,等.中西醫結合治療高血壓性腦出血術后認知功能障礙臨床觀察〔J〕.現代中西醫結合雜志,2013;22(16):1749-50.

〔2015-11-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

劉志華(1966-)，男，主任醫師，主要從事神經內科方面的研究。

R743

A

1005-9202(2017)01-0047-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.021

1 河南省中醫院中心試驗室