烏頭湯合防己黃芪湯的鎮(zhèn)痛抗炎作用研究

劉志標(biāo)，陳笑媚

烏頭湯合防己黃芪湯的鎮(zhèn)痛抗炎作用研究

劉志標(biāo)，陳笑媚

目的 比較烏頭湯合防己黃芪湯、烏頭湯、防己黃芪湯的鎮(zhèn)痛抗炎作用。方法 采用熱板法、扭體法觀察烏頭湯合防己黃芪湯、烏頭湯、防己黃芪湯的鎮(zhèn)痛作用；采用蛋清所致的小鼠足跖腫脹炎癥模型、二甲苯致小鼠耳腫脹模型，觀察3種湯劑的抗炎作用。結(jié)果 烏頭湯合防己黃芪湯組的熱板鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于烏頭湯組、防己黃芪湯組，冰醋酸扭體鎮(zhèn)痛率為62.32%，足跖腫脹率低于烏頭湯組、防己黃芪湯組，二甲苯致耳腫脹抑制率為68.68%。結(jié)論 烏頭湯合防己黃芪湯有鎮(zhèn)痛抗炎作用，且作用強(qiáng)于烏頭湯、防己黃芪湯。

烏頭湯合防己黃芪湯；鎮(zhèn)痛；抗炎

0 引言

烏頭湯首見(jiàn)于《金匱要略·中風(fēng)歷節(jié)病脈證并治五》，主治歷節(jié)病，即骨質(zhì)增生、痛風(fēng)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，是治療風(fēng)寒濕痹的代表方[1]。防己黃芪湯見(jiàn)于《金匱要略》，主治風(fēng)濕氣虛癥，是風(fēng)濕證、治療風(fēng)水的常用方劑[2-3]。筆者觀察了烏頭湯合防己黃芪湯對(duì)活動(dòng)期強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者血清TNF-α、IL-1、IL-6的影響，結(jié)果表明，烏頭湯合防己黃芪湯治療AS療效顯著，優(yōu)于烏頭湯組、防己黃芪湯組(P<0.05)[4]。從中醫(yī)角度辨病辨證，AS病因由風(fēng)熱、風(fēng)寒、風(fēng)濕或兼雜所致，從臨床實(shí)際出發(fā)，可分為風(fēng)濕熱郁、風(fēng)寒濕阻、肝腎空虛、痰熱互結(jié)等證型[5]。從中西醫(yī)結(jié)合防治的思路及方法上，應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽(yáng)平衡，提高免疫功能，抗炎鎮(zhèn)痛，改善關(guān)節(jié)自主活動(dòng)能力[6]。本文是在已有研究[4]基礎(chǔ)上，針對(duì)鎮(zhèn)痛抗炎模型進(jìn)行的藥理學(xué)研究，以驗(yàn)證支持臨床合方用藥的療效。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠，雌雄兼用，體重(20±2)g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(粵)2014-0005。根據(jù)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)和性別分籠喂養(yǎng)，自由采食飲水。

1.2 藥品 制川烏AconitumcarmichaeliiDebx.產(chǎn)于四川江油(批號(hào)：140420)，麻黃EphedrasinicaStapf.產(chǎn)于內(nèi)蒙古(批號(hào)：140423)，白芍PaeonialactifloraPall.產(chǎn)于安徽亳州(批號(hào)：140506)，黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.) Bunge.產(chǎn)于內(nèi)蒙古(批號(hào)：140425)，甘草GlycyrrhizauralensisFisch.產(chǎn)于內(nèi)蒙古烏拉(批號(hào)：140513)，防己StephaniatetrandraS.Moore.產(chǎn)于廣東(批號(hào)：140522)，白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.產(chǎn)于浙江(批號(hào)：140526)，藥材均購(gòu)于康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)陳笑媚主管中藥師鑒定。吲哚美辛片(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：140511)；其他所用試劑均為分析純，水為純凈水。

1.3 儀器 智能熱板儀(RB-200，成都泰盟科技有限公司)；萬(wàn)分之一分析天平(SH1MADZU，廣州儀通興化儀器儀表有限公司)；雙拼數(shù)控超聲波清洗器(上海聲彥超聲波儀器有限公司)。

2 方法

2.1 給藥劑量的設(shè)置 分別以人用烏頭湯合防己黃芪湯、烏頭湯、防己黃芪湯、吲哚美辛的劑量，根據(jù)體重?fù)Q算法：動(dòng)物用藥劑量(g/kg)=K×人用劑量(g/kg)，計(jì)算小鼠的用藥劑量(20 g K=9.01)。各組給藥劑量：烏頭湯合防己黃芪湯組為2.00 g/kg，烏頭湯組為2.00 g/kg，防己黃芪湯組為2.00 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照吲哚美辛組為0.65 g/kg，生理鹽水對(duì)照組劑量為20.00 g/kg。

2.2 藥液的制備 烏頭湯合防己黃芪湯(制川烏∶防己∶麻黃∶白芍∶黃芪∶甘草∶炒白術(shù)為6∶12∶9∶9∶15∶9∶9)各單味藥混合，進(jìn)行2次煎煮，煎煮時(shí)間均為1.5 h，過(guò)濾，合并2次濾液。旋蒸濃縮至所需體積，以0.4 g/mL放入冰箱備用。烏頭湯(制川烏∶麻黃∶白芍∶黃芪∶甘草為6∶9∶9∶9∶9)、防己黃芪湯(防己∶黃芪∶甘草∶炒白術(shù)為12∶15∶6∶9)的制備方法同烏頭湯合防己黃芪湯。

2.3 熱板鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[7-8]取雌性小鼠，放入(55±0.5) ℃熱板測(cè)痛儀中，以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，測(cè)定小鼠給藥前痛閾值。痛閾值<30 s視為合格小鼠，將50只合格小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。連續(xù)6 d灌胃給藥，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水24 h，第7天各組小鼠繼續(xù)給藥，給藥后30、60、90、120 min測(cè)量小鼠的痛閾值。測(cè)定過(guò)程中，如60 s內(nèi)小鼠無(wú)痛厥反應(yīng)，立即取出，并以60 s計(jì)算。痛閾值提高百分率(%)=(給藥后痛閾值-給藥前痛閾值)/給藥前痛閾值×100%。

2.4 冰醋酸扭體試驗(yàn)[9]取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，給藥方法同“2.3”項(xiàng)。末次給藥后30 min，腹腔注射0.6%冰醋酸，0.2 mL/只，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，記錄小鼠15 min內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)。各給藥組與空白對(duì)照組比較。藥物鎮(zhèn)痛百分率(%)=(對(duì)照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對(duì)照組扭體次數(shù)×100%。

2.5 足跖腫脹試驗(yàn)[10]取雄性小鼠50只，隨機(jī)平均分為5組。在小鼠左后足跖正面上端作一清晰橫線，利用容積測(cè)量裝置，采用排水法測(cè)定鼠爪體積(Vn)，分別測(cè)3次，取平均值為給藥前的足跖體積。連續(xù)灌胃給藥5 d，于末次給藥1 h后，用生理鹽水溶液調(diào)配好的10%蛋清(0.1 mL/跖)注入小鼠左后腿跖皮下，測(cè)定小鼠足跖體積(Vt)，計(jì)算足跖的腫脹率。腫脹率=(致炎后足跖體積-致炎前足跖體積)/致炎前足跖體積×100%。

2.6 二甲苯致耳腫脹試驗(yàn)[11]取健康小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。陽(yáng)性藥物僅第3天給藥，其余各組均連續(xù)灌胃給藥3 d，1次/d，末次給藥60 min后，在小鼠右耳正反面均勻涂抹二甲苯20 μL/只致炎，左耳不涂作為對(duì)照，用直徑9 mm的打孔器在左右耳相同位置打下耳片，稱(chēng)量左右耳的質(zhì)量，并計(jì)算其差值(腫脹度)及抑制率。腫脹度=右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量。腫脹率=(右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量)/左耳質(zhì)量×100%。

3 結(jié)果

3.1 熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 由表1可見(jiàn)，防己黃芪湯組的鎮(zhèn)痛作用不明顯，1h后，烏頭湯組的鎮(zhèn)痛作用較生理鹽水對(duì)照組減弱，而烏頭湯合防己黃芪湯組、吲哚美辛組的鎮(zhèn)痛效果與生理鹽水對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且作用時(shí)間長(zhǎng)。

表1 熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，*P<0.05；與給藥前痛閾值比較，△P<0.05

3.2 冰醋酸扭體試驗(yàn) 烏頭湯合防己黃芪湯組、吲哚美辛組的鎮(zhèn)痛效果與生理鹽水對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，烏頭湯合防己黃芪湯組的鎮(zhèn)痛率為62.32%，接近吲哚美辛的鎮(zhèn)痛率(71.06%)，而防己黃芪湯組、烏頭湯組的鎮(zhèn)痛率低于烏頭湯合防己黃芪湯組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

3.3 足跖腫脹試驗(yàn) 在1、2 h時(shí)，烏頭湯組、防己黃芪湯組與生理鹽水對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，防己黃芪湯組在4 h時(shí)、烏頭湯組在6 h時(shí)的足跖腫脹率與生理鹽水對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明其抗炎作用減弱，而6 h時(shí)，烏頭湯合防己黃芪湯組與生理鹽水對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

3.4 二甲苯致耳腫脹試驗(yàn) 烏頭湯合防己黃芪湯組、吲哚美辛組的抑制率高于生理鹽水對(duì)照組(P<0.01)；防己黃芪湯組、烏頭湯組的抑制率低于烏頭湯合防己黃芪湯組(P<0.05)，腫脹度高于烏頭湯合防己黃芪湯組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表2 冰醋酸扭體試驗(yàn)結(jié)果

注：劑量同表1；與生理鹽水對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

表3 足跖腫脹試驗(yàn)結(jié)果

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

表4 二甲苯致耳腫脹試驗(yàn)結(jié)果(n=10)

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

4 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，烏頭湯合防己黃芪湯組的鎮(zhèn)痛、抗炎作用均強(qiáng)于單用烏頭湯、防己黃芪的效果，且其鎮(zhèn)痛、抗炎作用與陽(yáng)性對(duì)照吲哚美辛接近，表明烏頭湯、防己黃芪湯合用起到了加合的作用，優(yōu)于單個(gè)方劑使用。本試驗(yàn)從另外一個(gè)方面驗(yàn)證了文獻(xiàn)[4]的研究結(jié)果，為臨床合方用藥提供了數(shù)據(jù)和參考依據(jù)，說(shuō)明烏頭湯合防己黃芪湯的藥理藥效及臨床研究具有一定的價(jià)值。

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Study on the analgesic and anti-inflammatory effect of Wutou decoction with fangji huangqi decoction

LIU Zhi-biao,CHEN Xiao-mei

(Pharmacy Department of Longgang Central Hospital,Shenzhen 518100,China)

Objective To compare the analgesic and anti-inflammatory effects among Wutou decoction with fangji huangqi decoction,Wutou decoction and Fangji huangqi decoction.Methods The analgesic effects of Wutou decoction with fangji huangqi decoction,Wutou decoction and Fangji huangqi decoction were observed by using hot plate method and torsion body method.The anti-inflammatory effects of the 3 decoctions were observed by antagonism by egg-white-induced paw edema model and xylene-induced mice ear swelling model.Results The analgesic effect of Wutou decoction with fangji huangqi decoction was better than that of Wutou decoction and Fangji huangqi decoction,and the analgesic rate of acetic acid was 62.32%;the foot swelling rate of Wutou decoction with fangji huangqi decoction was lower than that of Wutou decoction and Fangji huangqi decoction,and the inhibition rate of xylene-induced ear swelling was 68.68%.Conclusion Wutou decoction with fangji huangqi decoction has analgesic and anti-inflammatory effect,which is better than Wutou decoction and Fangji huangqi decoction.

Wutou decoction with fangji huangqi decoction;Analgesia;Anti-inflammatory

2016-05-29

深圳市龍崗中心醫(yī)院藥劑科，深圳 518100

深圳市龍崗區(qū)2013年度科技計(jì)劃醫(yī)療衛(wèi)生項(xiàng)目(YS2013129)

10.14053/j.cnki.ppcr.201701008