Aptima HPV聯合宮頸液基細胞學篩查宮頸癌前病變的臨床研究

范瑩瑩,張 健△,徐 冰

1.上海交通大學醫學院附屬國際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學第三醫院婦科(北京 100191)

△通訊作者

Aptima HPV聯合宮頸液基細胞學篩查宮頸癌前病變的臨床研究

范瑩瑩1,張 健1△,徐 冰2

1.上海交通大學醫學院附屬國際和平婦幼保健院婦科(上海 200123),2.北京大學第三醫院婦科(北京 100191)

目的：探討Aptima HPV聯合宮頸液基細胞學在篩查宮頸癌前病變中的作用。方法：選擇25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對象，先進行TCT檢查，ASC-US及以上患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細胞學陰性者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測。結果：Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加,其陽性率也增加且具有統計學差異(χ2=52.135,P<0.05),陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率且具有統計學差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發現有統計學差異(χ2=1.998,P>0.05)。靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統計學差異(P>0.05)。結論：Aptima HPV聯合宮頸液基細胞學篩查對于早期發現宮頸癌前病變具有重要的臨床價值。

宮頸癌是威脅女性生命健康居第二位的惡性腫瘤,據統計全球每年新發宮頸癌達50余萬例，每年有約23萬的女性死于宮頸癌[1],我國每年新發宮頸癌約15萬例,每年有約8萬的女性死于宮頸癌,近年來,宮頸癌新發病例數逐年上升,且呈年輕化的趨勢[2]。研究發現人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)是宮頸癌發生和發展的首要因素，本研究擬以陰道鏡活檢病理診斷作為金標準[3]，評價宮頸液基細胞學分別聯合Aptima HPV檢測、Cobas HPV分型檢測技術及羅氏CINtec-Plus細胞學檢測，用于宮頸癌前病變篩查,期望發現更有效的宮頸癌聯合篩查的方法,為宮頸癌篩查提供新策略。

材料與方法

1 一般資料 選取2014年5月至2016年5月就診的25～65歲有性生活史半年以上人群1506例作為研究對象，納入標準：無宮頸物理治療及手術史，無盆腔放射史，均排除妊娠。采樣前3 d無性生活、陰道沖洗及陰道炎。

2 研究方法 ①宮頸液基細胞學(TCT)檢查：所有研究對象均將宮頸管內和鱗柱上皮交界處采集的細胞涮洗在TCT專用取樣瓶中，經TCT專用制片機制成薄層涂片，經巴氏染色后鏡檢。宮頸細胞學診斷按照國際癌癥協會推薦的TBS(2001)分類法[4]。所有研究對象均采用宮頸液基細胞學進行初篩，宮頸細胞學ASC-US及以上患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查；并在宮頸細胞學陰性的患者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測，以評估篩查的漏檢率。②Aptima HPV E6/E7 mRNA表達檢測：采用TCT剩余標本，加入試劑處理后的標本采用QuantiVirus TM冷光儀檢測；檢測結果為光子數，經計算軟件轉換為拷貝數，≥1 copy/ml為陽性。③Cobas HPV DNA檢測：將鱗柱上皮交界處和宮頸管采集的細胞涮洗在HPV專用取樣瓶中，采用Cobas HPV(羅氏)評估HPV感染情況。④CINtec-Plus檢測：采用羅氏的CINtec-Plus檢測試劑盒(羅氏)，采用TCT剩余標本，進行檢測，雙染陽性的考慮為陽性，單染或者不染色的考慮為陰性。⑤組織病理學檢查：陰道鏡下宮頸活檢病理作為金標準。對病檢結果≥CIN2的患者行子宮頸電環切除(LEEP)或冷刀錐切術(CKC)，以獲取進一步病理診斷。若不同部位有不同級別診斷，以病理級別最高者作為最后診斷。

3 統計學方法 資料采用Epi Data 3.0軟件進行錄入，采用SPSS 20.0統計學軟件包進行統計分析，計數資料采用例數(百分比)表示，其比較采用χ2檢驗,評估檢測結果的陽性率、陰性率、靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值等，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 TCT、Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測和病理檢查結果 見表1。1506例研究對象,TCT檢查結果為未見上皮內病變及惡性細胞(NILM)1317例(87.45%)，≥無明確意義的非典型細胞的改變(ASC-US)189例(12.55%)，對189例≥ASC-US患者均進行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus及陰道鏡檢查，病理檢查為CIN1、CIN2、CIN3、ICC(宮頸浸潤癌)的患者，Aptima HPV E6/E7 mRNA總體陽性率為82.08%(142/173)，低于Cobas HPV DNA總體陽性率89.60%(155/173)且具有統計學差異(χ2=4.018,P<0.05),高于CINtec-Plus總體陽性率79.19%(137/173)，但無統計學差異(χ2=0.463,P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加，其陽性率也增加且具有統計學差異(χ2=52.135,P<0.05)，陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率且具有統計學差異(χ2=49.625,P<0.05),CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間無統計學差異(χ2=1.998,P>0.05)。在1317例NILM的患者中隨機抽取5%行Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測,篩查的漏檢率為1.52%(1/66)。

表1 病理檢查結果與Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus檢測結果關系 [例(%)]

2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對CIN2診斷價值 見表2。本研究中靈敏度以Cobas HPV DNA最高,但其特異度僅45.45%為最低,特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高,Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度無統計學差異(P>0.05),Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus特異度、陽性預測值、陰性預測值均具有統計學差異(P<0.05)。

表2 Aptima HPV E6/E7 mRNA、Cobas HPV DNA、CINtec-Plus對CIN2診斷價值(%)

討 論

宮頸癌的主要致病病因為高危型的HPV,所以對女性檢測是否感染高危型的HPV,對于防控宮頸癌的發病具有重要的意義[5]。宮頸液基細胞學聯合HPV DNA已經在臨床上廣泛用于宮頸癌的普查，但是宮頸液基細胞學檢查在宮頸感染HPV病毒等因素的協同作用下引起細胞核的形態學改變以后才能進行臨床診斷，所以其不能早期發現疾病，HPV DNA檢測只是能夠對病毒感染的類型進行判斷，不能夠表達感染病毒的致癌基因活性[6]，所以尋找能夠早期發現高危人群的篩查辦法是十分必要的。

目前有研究[7]發現高危HPV感染,會引起宮頸上皮內發生病變后,導致E6、E7的表達增多,而E6、E7基因是HPV編碼區中的癌基因,基因編碼產物E6、E7蛋白聯合發揮作用,可抑制P53蛋白功能,從而抑制細胞凋亡,E7蛋白還可通過抑制pRB使細胞周期失控。研究發現E6/E7mRNA的表達與宮頸病變程度呈正相關[8]。本研究發現Aptima HPV E6/E7 mRNA隨著宮頸病變級別的增加，其陽性率也增加，陽性率變動范圍高于Cobas HPV DNA及CINtec-Plus，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯高于正常或炎癥及CIN1的陽性率，CIN2、CIN3、ICC三者的Aptima HPV E6/E7 mRNA陽性率之間未發現具有統計學差異。靈敏度以Cobas HPV DNA最高，但其特異度僅45.45%為最低，特異度、陽性預測值、陰性預測值以Aptima HPV E6/E7 mRNA最高，未發現Aptima HPV E6/E7 mRNA與Cobas HPV DNA的靈敏度具有統計學差異。進一步驗證了E6/E7 mRNA 表達是宮頸癌發生發展的必經步驟，E6/E7基因的轉錄產物E6/E7mRNA 反映了癌基因活性，其相比DNA，E6、E7 mRNA與病變的相關性更好。

綜上所述，Aptima HPV聯合宮頸液基細胞學篩查對于早期發現宮頸癌前病變具有重要的臨床價值。

[1] 易利紅.hTERC基因與宮頸癌前病變及宮頸癌發生發展關系的探究[J].海南醫學院學報,2016,22(11)：1141-1144.

[2] 宮 輝,顧平清,劉 柱,等.人乳頭瘤病毒致宮頸癌細胞免疫逃逸機制探討[J].實用老年醫學,2010,24(1):40-42.

[3] 羅 旻,譚詩生,倪婷婷,等.宮頸癌術后盆腔不同體外照射療法的劑量學研究[J].貴州醫藥,2014,38(6):498-501.

[4] 潘秦鏡.TBS(2001)判讀要點及鑒別診斷[C].//第九屆全國子宮頸癌前期病變暨子宮腫瘤高峰論壇論文集,2012：121-124.

[5] 崔亞杰,張培蓮.宮頸上皮內瘤變中人乳頭瘤病毒基因分型及感染狀況研究[J].陜西醫學雜志,2015,44(10)：1308-1309.

[6] Sarah I, Maria TS, Sara B,etal.Tissue Genotyping of 37 In Situ and Invasive Cervical Cancer With a Concomitant Negative HC2 HPV DNA Test[J].Journal of Lower Genital tract Disease, 2014,18(1):87-91.

[7] Broccolo F, Fusetti L, Rosini S,etal.Comparison of oncogenic HPV type-specific viral DNA load and E6/E7 mRNA detection in cervical samples: Results from a multicenter study[J].Journal of Medical Virology,2013,85(3):472-482.

[8] 張魏芳.高危型人乳頭瘤病毒早期蛋白E6和E7調控細胞周期的機制研究[D].山東大學, 2010.

(收稿：2016-06-20)

子宮頸腫瘤 多相篩查 @Aptima HPV @液基細胞學 @羅氏CINtec-Plus細胞學檢測

R737.33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.02.009