替格瑞洛原料藥粒徑對其片劑體外溶出行為的影響

王 燕，牟 聰，劉金鳳，呂慧敏（1.南京師范大學泰州學院化學與生物工程學院，江蘇泰州 5300；.揚子江藥業集團有限公司藥物研究院，江蘇泰州 5300）

替格瑞洛原料藥粒徑對其片劑體外溶出行為的影響

王 燕1＊，牟 聰2#，劉金鳳2，呂慧敏2（1.南京師范大學泰州學院化學與生物工程學院，江蘇泰州 225300；2.揚子江藥業集團有限公司藥物研究院，江蘇泰州 225300）

目的：研究替格瑞洛原料藥粒徑對其片劑體外溶出行為的影響。方法：取替格瑞洛原料藥及其經粉碎不同時間（15、30、40、60 s）后得到的不同粒徑的粉末A、B、C、D、E，以濕法制粒法制備成片劑；采用紫外分光光度法在300 nm波長處測定上述各自制片在60 min內的體外累積溶出度（以0.2%聚山梨酯溶液為溶出介質，槳法），并以原研片為參比制劑，用相似因子（f2）法比較5種自制片與原研片體外溶出行為的相似性。結果：粉末A、B、C、D、E的d（0.9）分別為69.181、40.778、24.805、12.611、3.083 μm，f2值分別為27.77、36.79、50.06、67.68、79.99。結論：替格瑞洛原料藥粒徑越小，所制片劑溶出行為越接近原研片。原料藥經粉碎后可顯著提高替格瑞洛片的體外溶出度。為獲得與原研片生物等效的制劑，建議替格瑞洛原料藥粉末粒徑分布宜控制在d（0.9）≤20 μm。

替格瑞洛；原料藥；粒徑分布；相似因子；紫外分光光度法；體外溶出度

替格瑞洛（Ticagrelor）是一種新型環戊基三唑嘧啶類抗血小板聚集藥物[1]，2010年在歐洲上市，2012年11月替格瑞洛片（商品名：倍林達）在我國上市，同年我國《經皮冠狀動脈介入治療（PCI）指南》也將其列為抗血小板治療藥物之一，目前已成為國外許多急性冠脈綜合征（ACS）治療指南推薦的抗血小板治療用藥[2-4]。由于替格瑞洛為生物藥劑學分類系統（BCS）Ⅳ類化合物，為難溶性藥物，其粒徑分布會影響替格瑞洛片的體外溶出行為。筆者通過對原料藥進行不同時間的粉碎得到不同粒徑分布的粉末，再通過相同的制備工藝制成不同批次的自制片，與原研參比制劑進行體外溶出行為的對比研究，以期優選出原料藥粉末的最適粒徑分布，制備出與原研參比制劑生物利用度一致的產品[5]。

1 材料

1.1 儀器

DFT-50型手提式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；GSL-101BII型激光顆粒分布測量儀（遼寧儀表研究所有限責任公司）；XP205型電子天平、HX204型快速水分測定儀（瑞士Mettler Toledo公司）；G20濕法制粒機（深圳信宜特科技有限公司）；YD-3型硬度測定儀（天津市國銘醫藥設備有限公司）；Y-160型搖擺式顆粒機（江蘇省泰州市第三制藥機械廠）；C&C800型旋轉式壓片機（北京創博佳維科技有限公司）；RCZ-8M型智能藥物溶出儀、ZKT-18F型真空脫氣儀（天津天大天發有限公司）；Cary50 Bio型紫外-可見分光光度儀（美國Varian公司）。

1.2 藥品與試劑

替格瑞洛片（原研片，阿斯利康制藥有限公司，批號：TDBH1312084，規格：90 mg/片）；替格瑞洛原料藥（批號：TGRLYL-15001，純度：99.5%）、替格瑞洛對照品（批號：TGRL-1404，純度：99.9%）均來源于揚子江藥業集團有限公司；甘露醇（青島明月海藻集團有限公司，批號：3601309023）；磷酸氫鈣（湖州展望藥業股份有限公司，批號：20120815）；羥丙基纖維素[日本曹達貿易（上海）有限公司，批號：121110]；羧甲基淀粉鈉（湖州藥業股份有限公司，批號：20130716）；硬脂酸鎂（浙江中維藥業有限公司，批號：130201）；95%乙醇（批號：20131114）、聚山梨酯80（批號：20131016）均來源于國藥集團化學制劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 不同粒徑分布原料的制備

取適量替格瑞洛原料藥并過80目篩，得樣品A；取適量樣品A倒入粉粹機中，依次粉碎15、30、40、60 s，分別取各個時間點粉碎后的原料藥作為樣品B、C、D、E[6]。

2.2 樣品粒徑分布的測定

按2015年版《中國藥典》（四部）通則測定粒度方法中的第三法[7]，各取樣品A、B、C、D、E適量，分別加入分散劑0.5%聚山梨酯80中，超聲5 min（頻率：40 kHz，功率：240 W），制成穩定的分散體，測定粒徑分布，結果見表1。

表1 樣品粒徑分布測定結果Tab 1 Distribution of particle size of samples

由表1可見，與樣品A比較，其余4種樣品的粒徑均減小，表明對原料藥進行粉碎后，可減小其粒徑，且隨著粉碎時間的延長，原料藥的粒徑逐漸減小。

2.3 替格瑞洛片的制備

片芯輔料選用甘露醇、磷酸氫鈣、羥丙基纖維素、羧甲淀粉鈉和硬脂酸鎂，制備工藝采用濕法制粒。稱取樣品A、B、C、D、E各90.0 g，甘露醇136 g，磷酸氫鈣44 g，羥丙基纖維素9 g，羧甲基淀粉鈉9 g，適量95%乙醇，混勻，濕法制粒，加入硬脂酸鎂3.0 g，混勻，壓片，即得不同的自制替格瑞洛片，依次編批號為TGRLP-15001、TGRLP-15002、TGRLP-15003、TGRLP-15004、TGRLP-15005。

2.4 溶出度測定方法的建立

參照片劑溶出度測定的一般方法。本品選用2015年版《中國藥典》（四部）通則0931中的第二法即槳法進行操作[7-8]。

2.4.1 溶出介質的選擇 參考替格瑞洛片進口藥品注冊標準（標準號：JX20110193）[9]的溶出方法，選取0.2%聚山梨酯80溶液為溶出介質。

2.4.2 測定波長的確定 分別取替格瑞洛對照品、自制片（批號：TGRLP-15005）、原研片，用0.2%聚山梨酯80溶液制備成每1 mL約含替格瑞洛20 μg的溶液。另取空白輔料適量，用0.2%聚山梨酯80溶液超聲提取，得空白溶液。取上述4種溶液冷卻至室溫，參考2015年版《中國藥典》（四部）通則0401方法[7]進行紫外掃描。結果，對照品和2種片劑溶液均在300 nm波長處有最大吸收。空白輔料及自制片的紫外掃描結果見圖1。

圖1 紫外掃描圖譜Fig 1 UV scanning spectrum

由圖1可知，空白輔料對主藥替格瑞洛檢測無干擾。故確定檢測波長為300 nm。

2.4.3 線性關系考察 精密稱取替格瑞洛對照品25.76 mg，置于250 mL量瓶中，加0.2%聚山梨酯80溶液稀釋至刻度，搖勻，作為線性貯備溶液。精密量取上述貯備溶液適量至相應量瓶中，用0.2%聚山梨酯80溶液稀釋至刻度，搖勻，制備質量濃度分別為1.03、2.06、5.14、10.29、20.57、25.71μg/mL的對照品溶液。分別取上述溶液適量，在300 nm波長處分別測定吸光度（A）。將A與對應質量濃度（c）進行線性回歸，結果線性方程為A＝0.030 8c－0.004 5（R2＝0.999 9）。結果表明，替格瑞洛檢測質量濃度線性范圍為1.03～25.71 μg/mL。

2.4.4 重復性和中間精密度試驗 取自制片（批號：TGRLP-15005）6片，照“2.4.2”項下方法制備溶液，在300 nm波長處分別測定吸光度，進行方法的重復性試驗，結果吸光度的RSD＝1.0%（n＝6）。另取本品6片，由不同的試驗人員在不同日期采用不同的溶出儀和紫外-可見分光光度儀進行溶出度測定，進行方法中間精密度試驗，結果溶出度的RSD＝0.80%（n＝6）。

2.4.5 回收率試驗 分別取替格瑞洛對照品約45、72、90 mg（分別為處方量的50%、80%、100%）及相應處方比例的空白輔料210 mg（此為1片的空白輔料量），精密稱定，置于同一溶出杯中，依法進行溶出度測定。于45 min時，取溶出液適量，過濾；精密量取續濾液2 mL，置于10 mL量瓶中，加0.2%聚山梨酯80溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。每個濃度各平行制備3份。在300 nm波長處分別測定吸光度，計算回收率，結果見表2。

表2 回收率試驗結果Tab 2 Results of recovery tests

結果表明，低、中、高3個濃度水平的回收率在98.12%～101.45%，平均回收率為100.50%（RSD＝1.17%，n＝3），表明該方法準確度良好。

2.5 溶出行為的比較

分別取自制片和原研片各6片，分別于0、5、10、15、30、45、60 min取樣后照溶出度測定法測定，溶出介質選用0.2%聚山梨酯溶液。同時，以原研片為參比制劑，用相似因子（f2）法[10]比較各樣品的累積溶出度，繪制溶出曲線，結果見表3、圖2。

表3 自制片與原研片的累積溶出度比較Tab 3 Comparison of accumulative dissolution rate between prepared tablet and original tablet

圖2 自制片與原研片溶出曲線比較Fig 2 Comparison of dissolution curve between prepared tablet and original tablet

由表3及圖2可見，在以0.2%聚山梨酯溶液為溶出介質時，有2個批號的自制品（批號：TGRLP-15004、TGRLP-15005）與原研片比較f2值較大（＞50），表明其與原研片的溶出行為更相似。這2個批號自制品對應的原料藥粉末粒徑d（0.9）分別為12.611、3.083 μm。

3 討論

本試驗采用紫外-可見分光光度法測定替格瑞洛含量，不但方法操作簡便，且線性關系較好，方法學考察均符合要求。

由于替格瑞洛在純水、0.1 mol/L鹽酸、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液4種介質中累積溶出度均小于10%，沒有臨床指導意義。故在選用本試驗的溶出介質時未考察其在上述4種常見溶出介質中的溶出行為，而選用0.2%聚山梨酯80溶液為溶出介質。

經試驗發現，制備替格瑞洛片的原料藥在未經粉粹處理時，所制片與原研片比較，f2僅為27.77，表明其與原研片溶出行為極不相似；原料藥經粉碎后所制片劑，隨著d（0.9）的減小，與原研片比較后的f2值逐漸增大，在當d（0.9）≤24.805 μm時，f2≥50，表明自制品與原研片在0.2%聚山梨酯80溶出介質中溶出行為相似。因此為了降低臨床試驗風險，獲得與原研片生物等效的制劑，建議制備替格瑞洛片時，其原料藥的粒徑分布應控制 d（0.9）≤20 μm。

[1] Teng R，Oliver S，Hayes MA，et al.Absorption，distribution，metabolism，and exeretion of ticagrelor in healthy subjects[J].Drug Metab Dispos，2010，38（9）：1514-1521.

[2] 孫秀波，付春毅，張亞同，等.新型抗血小板聚集藥物：替格瑞洛的研究進展[J].中國藥房，2015，26（4）：2010-2013.

[3] Zeneca.Brilinta，Brilique（ticagrelor）[EB/OL].[2016-03-10].http：//www.astrazeneca.com.cn/en/medicines/en-cardiovascular/en-brilinta.

[4] 中國網.治療ASC患者的新選擇：倍林達中國上市獲批準[EB/OL].（2012-11-30）[2016-03-10].http：//www.Chinadaily.com.cn/hqcj/2012-11/30/content_15975879.htm.

[5] 張慶剛，程剛.鹽酸厄洛替尼不同粒徑分布對其片劑溶出行為的影響[J].食品與藥品，2015，17（2）：83-86.

[6] 肖亞寶，文君，崔生法.格列美脲微粉的制備及其對溶出度的影響[J].中國粉體技術，2014，20（2）：31-34.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：38-40、121-124、374-378.

[8] 國家食品藥品監督管理總局.普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則[S].2015-02-05.

[9] 國家食品藥品監督管理總局.替格瑞洛片進口藥品注冊標準 JX20110193[S].2011.

[10] 謝沐風.溶出曲線相似性的評價方法[J].中國醫藥工業雜志，2009，40（4）：308-310.

（編輯：劉 萍）

Effects of Particle Size of Ticagrelor Crude Drug on in vitro Dissolution Behavior of Ticagrelor Tablets

WANG Yan1，MU Cong2，LIU Jinfeng2，LYU Huimin2（1.College of Chemistry and Biological Engineering，Taizhou College，Nanjing Normal University，Jiangsu Taizhou 225300，China；2.Drug Research Institute，Yangtze River Pharmaceutical Group Co.Ltd.，Jiangsu Taizhou 225300，China）

OBJECTIVE：To study the effects of particle size of ticagrelor crude drug on in vitro dissolution behavior of Ticagrelor tablets.METHODS：Ticagrelor crude drug and different particle size of ticagrelor powder A，B，C，D，E after smashing for different time（15，30，40，60 s）were used to prepare the tablet by wet granulation method.Accumulative in vitro dissolution rate of prepared tablets within 60 min were determined by UV spectrophotometry at 300 nm（using 0.2%tween as medium，paddle method）.Using original tablet as reference preparation，the similarity factor（f2）method was used to compare the similarity of dissolution behavior between 5 prepared tablets and original tablet.RESULTS：d（0.9）of powder A，B，C，D，E were 69.181，40.778，24.805，12.611，3.083 μm，respectively.The corresponding f2were 27.77，36.79，50.06，67.68，79.99.CONCLUSIONS：The particle size of ticagrelor crude drug is much smaller，and the dissolution behavior of prepared tablet is closer to that of original tablet. The in vitro dissolution rate of Ticagrelor tablets is improved remarkably by micronization technology.In order to produce Ticagrelor tablets with the same bioavailability as original tablet，particle size of ticagrelor crude drug powder should be controlled with d（0.9）≤20 μm.

Ticagrelor；Crude drug；Particle size distribution；Similarity factor；UV spectrophotometry；in vitro dissolution

R943

A

1001-0408（2017）01-0119-03DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.01.31

2016-03-04

2016-05-04）

＊助教，碩士。研究方向：藥物多晶型、藥物新劑型與新技術。電話：0523-86152059。E-mail：806503228@qq.com

#通信作者：助理工程師。研究方向：藥物新劑型與新技術。電話：0523-86975063。E-mail：542671045@qq.com