復方銀菊合劑對大鼠實驗性口腔潰瘍愈合及體外抑菌實驗研究*

段 赟，夏小軍，馬 駿，李雪松，開金龍，姚金華

(1.甘肅省腫瘤醫院，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 730020；3.慶陽市中醫醫院，甘肅 慶陽 745000)

·實驗研究·

復方銀菊合劑對大鼠實驗性口腔潰瘍愈合及體外抑菌實驗研究*

段 赟1，夏小軍1，馬 駿2，李雪松1，開金龍3，姚金華3

(1.甘肅省腫瘤醫院，甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 730020；3.慶陽市中醫醫院，甘肅 慶陽 745000)

目的：復方銀菊合劑藥效學、毒理學實驗研究。方法：觀察復方銀菊合劑對大鼠實驗性口腔潰瘍的影響；對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌的體外抑菌作用；多次給藥對大鼠口腔黏膜刺激性實驗。結果：復方銀菊合劑12.5，4.2μL/g體質量2個劑量能明顯促進大鼠實驗性口腔潰瘍愈合；復方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用；復方銀菊合劑12.5μL/g體質量連續給藥7d，對大鼠口腔黏膜無刺激性反應。結論：復方銀菊合劑對大鼠實驗性口腔潰瘍有明顯治療作用，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用，多次給藥對大鼠口腔黏膜無刺激性反應。

復方銀菊合劑/藥效學; 復方銀菊合劑/毒理學 ;口腔潰瘍；實驗動物；大鼠

復方銀菊合劑是甘肅省慶陽市中醫醫院研制的防治白血病化療后口腔潰瘍的純中藥制劑(甘藥制字號：Z04101016)，由金銀花、野菊花、天花粉、生甘草4味中藥材組成，具有清熱解毒、滋陰降火、祛腐生肌之功效，經10余年的臨床運用,療效顯著。現將復方銀菊合劑藥效學、毒理學實驗研究報告如下。

1 材 料

1.1 動 物

Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，體質量180～220g，由蘭州大學實驗動物中心提供，生產許可證號為SCXK(甘)20090004，合格證號為0000262。

1.2 菌 株

金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)和白色念珠菌(ATCC10231)，均由蘭州大學醫學生物化學與分子生物學研究所提供。

1.3 藥 品

復方銀菊合劑，每瓶100mL,由慶陽市中醫醫院提供，批號081203；冰硼含片，白云山湯陰東泰藥業有限責任公司產品，批號080601；鹽酸環丙沙星片，山西津華暉星制藥有限公司產品，批號080513；酮康唑片，西安楊森制藥有限公司產品，批號081006。以上各藥臨用前以生理鹽水配成所需質量分數溶液，調pH值為7.4，高壓滅菌。

2 方法與結果

2.1 統計學方法

2.2 實驗性口腔潰瘍愈合實驗

觀察復方銀菊合劑對口腔潰瘍的治療作用。實驗按照參考文獻[1,2]方法進行。

將40只大鼠隨機分為模型對照組、冰硼含片組、復方銀菊合劑大劑量組、復方銀菊合劑小劑量組4組，每組10只。各組大鼠分別用乙醚麻醉，仰臥固定于鼠板。取一根直徑為4mm的玻璃管；將一個小棉球置于其一端，使之與管口平齊；將玻璃管的棉球端浸在質量分數為900g/L的 苯酚溶液中，使藥液浸透棉球；將其置于大鼠一側頰黏膜上灼燒約60s。移去玻璃管即可見該區域有直徑4～6mm的白色損害；次日肉眼可見大鼠口唇邊潮濕，流口水，頰黏膜處紅腫，即造模成功。復方銀菊合劑大劑量組：給復方銀菊合劑12.5μL/g體質量(相當于臨床人日用量的15倍)，平均分5次滴入大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔2h。復方銀菊合劑小劑量組：給復方銀菊合劑4.2μL/g體質量(相當于臨床人日用量的5倍)，平均分2次滴入大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔4h。冰硼含片組給冰硼含片粉末1.5mg/g(相當于臨床人日用量的15倍)，平均分5次置于大鼠頰黏膜潰瘍處，間隔2h。模型對照組不給藥。每次用藥后禁食、禁水30min，連續給藥6d。

每日給藥前觀察大鼠口腔潰瘍愈合情況，記錄給藥6d后口腔潰瘍面直徑的大小(以mm表示)及大鼠口腔潰瘍愈合的時間和數量。愈合標準：潰瘍直徑<1mm為愈合，潰瘍直徑≥1mm為未愈合。

結果見表1、表2。與模型對照組對比，連續給藥6d，復方銀菊合劑大、小劑量組大鼠口腔潰瘍面直徑減小，口腔潰瘍愈合大鼠數量增加，差別均有統計學意義(P<0.01或P<0.05)。結果表明：復方銀菊合劑能明顯促進大鼠實驗性口腔潰瘍的愈合。

組 別動物數/只潰瘍面直徑/mm模型對照組101.88±0.69冰硼含片組100.85±0.35**復方銀菊合劑大劑量組100.72±0.22**復方銀菊合劑小劑量組101.16±0.63*

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01。

表2 給藥期間各組大鼠口腔潰瘍愈合數量對比

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 體外抑菌試驗

觀察復方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌的體外抑菌作用。采用平皿打孔灌藥法，按照參考文獻[3,4]方法進行。

取滅菌試管7支，編號后排列于試管架上，按照無菌操作法，第1管加入100 0 g/L復方銀菊合劑3 mL，第2～4管各加無 菌生理鹽水3 mL，然后吸1 000 g/L 復方銀菊合劑3 mL加到第2管混勻后，吸出3 mL加到第3管混勻，第3管吸出3 mL加到第4管，混勻。第5管加2 mg/mL的諾氟沙星片水溶液，第6管加1 mg/mL的酮康唑片水溶液，第 7管加無菌生理鹽水。取標號滅菌平皿加熔化后冷卻到40 ℃的牛肉膏湯瓊脂培養基(白色念珠菌用沙氏培養基)20 mL搖勻，待凝固后，用直徑6 mm的無菌打孔器在培養基上均勻打孔(3～4孔/皿)，各孔分別加入以上配好的不同質量分數的藥液和生理鹽水(0.2 mL/孔)，再將培養好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌分別均勻接種各洞口四周，37 ℃孵育24 h，觀察并測出抑菌圈直徑。

結果見表3。復方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用,且作用隨劑量增加而增強。結果表明：復方銀菊合劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用。

表3 復方銀菊合劑對體外抑菌圈直徑的影響 mm

2.4 大鼠口腔黏膜刺激性實驗

觀察復方銀菊合劑多次給藥對大鼠口腔黏膜的刺激性反應。實驗按照參考文獻[2,5,6]方法進行。將20只大鼠隨機分為復方銀菊合劑組和正常對照組2組，每組10只。復方銀菊合劑組給復方銀菊合劑12.5μL/g 體質量(相當于臨床人日用量的15倍)，在4 h內平均分5次滴入大鼠兩側頰黏膜處。正常對照組不做任何處理。給藥24 h后，觀察記錄給藥部位充血和水腫情況，并進行評分；觀察動物有無全身不良反應。每日給藥并觀察，共7 d；停藥后繼續觀察7 d。黏膜充血、水腫評分標準見表4、表5。

結果見表6。給藥后24 h、給藥7 d期間及停藥后7 d，復方銀菊合劑組鼠口腔黏膜均未出現充血和水腫癥狀，刺激反應平均分值為0，未見全身不良反應，與正常對照組對比，無異常。結果表明：復方銀菊合劑12.5 μL/g體質量連續給藥7 d，對大鼠口腔黏膜無刺激性反應。

表4 黏膜刺激性反應及評分標準

表5 黏膜刺激強度評價標準

表6 各組多次給藥后口腔黏膜刺激反應平均分值

n=10

3 討 論

復方銀菊合劑是在課題組反復臨床實踐的基礎上，對白血病化療后口腔潰瘍病因病機進行深入探討與研究，針對病程中虛火與毒火兩大關鍵病理因素，以清熱解毒、滋陰降火、祛腐生肌為治療原則研制而成。先期的臨床研究[7]表明：復方銀菊合劑含漱對白血病化療后口腔潰瘍有很好的防治作用。本研究結果顯示：復方銀菊合劑對大鼠實驗性口腔潰瘍有明顯治療作用，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌均有體外抑菌作用，多次給藥對大鼠口腔黏膜無刺激性反應。此證實了復方銀菊合劑含漱對白血病化療后口腔潰瘍的有效性與安全性，也為進一步擴大臨床應用范圍提供了藥理學依據。

[1]朱萱萱,徐軒,施榮山.愈潰寧治療大鼠口腔潰瘍的實驗研究[J].中藥藥理與臨床,2001，17(5):35-36.

[2]鄭利光,翟所迪.甘草鋅膜對實驗性口腔潰瘍的治療作用及粘膜刺激性研究[J].中國新藥雜志，2006，15(8)：601-603.

[3]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，1994：1340,1387.

[4]陳奇.中藥藥理實驗方法學[M].上海：上海科學技術出版社，2006：755-756.

[5]國家食品藥品監督管理局.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則[M].北京：中國醫藥科技出版社.

[6]中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[S]：209-215.

[7]段赟，李雪松，夏小軍，等.復方銀菊合劑含漱防治白血病化療后口腔潰瘍58例[J].中醫研究，2013，26(3):23.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)01-0070-03

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.32

段赟(1978—)，男(漢族)，甘肅寧縣人，副主任醫師，主要從事中西醫結合血液病臨床研究工作。

馬駿，教授，碩士研究生導師，binbinduan@126.com

慶陽市科技局2008年科技計劃項目(0802NKCM058)

2016-05-05；

2016-11-08