不同消毒劑抑菌效果觀察

（河南農業大學牧醫工程學院，河南 鄭州 450002）

不同消毒劑抑菌效果觀察

王潔瓊，趙玉杰，周薇帆，周云飛，陳盼盼，李新生

（河南農業大學牧醫工程學院，河南 鄭州 450002）

針對3種常見的致病菌（金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌），選取3種消毒劑，檢測對比其抑菌效果。方法：使用普通肉湯對3種消毒劑進行不同比例稀釋，分別接種10 μl 1×1011CFU/ml的金黃色葡萄球菌菌懸液、沙門氏菌菌懸液和大腸桿菌菌懸液，培養8 h和24 h后，根據OD值測定結果判斷其抑菌效果。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細菌生長，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當提高濃度或延長時間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無效的情況。3種消毒劑對沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對較好，對大腸桿菌抑菌效果相對較差。

消毒劑；稀釋度；OD值；抑菌效果

消毒劑是指能夠殺滅傳播媒介中的病原微生物，從而使之無害的制劑［1］。其主要作用機理是改變微生物賴以生存的環境，致使微生物的內外結構發生改變，主要代謝機能出現障礙，生長發育受阻，從而喪失活性失去致病力。不同類型的消毒劑有不同的消毒效果［2］。消毒劑按照其作用水平可分為滅菌劑、高效消毒劑、中效消毒劑、低效消毒劑。近幾年，消毒劑已廣泛應用于工業、醫療衛生、農業等各個行業，人們對消毒劑的應用研究有了很大的進展。

該試驗選取了聚維酮碘、稀戊二醛、戊二醛癸甲溴銨3種消毒劑。目前聚維酮碘作為一種優良的皮膚黏膜消毒劑和外用藥已被許多國家藥典收錄［3］；戊二醛是一種高效消毒劑和滅菌劑，廣泛用于石油開采、醫藥衛生、生物化學、食品化妝品的防腐等方面；戊二醛癸甲溴銨可以廣譜、高效殺滅各種細菌及芽孢、病毒、支原體、真菌、霉菌和衣原體。隨著消毒劑的頻繁使用，抗藥菌株不斷出現，有必要定期測定評價不同消毒劑的消毒效果，為此筆者開展了相關研究，現將結果報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 消毒劑 3種消毒劑，實驗室編號分別為A、B、C，其中A為聚維酮碘溶液，B為稀戊二醛溶液，C為戊二醛癸甲溴銨溶液。

1.1.2 菌種 3株標準菌株：致病性的金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、沙門氏菌（ATCC 13076）、大腸桿菌（ATCC 25922），編號分別為P、S、D。

1.1.3 培養基 普通肉湯、普通瓊脂培養基。

1.2 操作過程和方法

1.2.1 培養基制備 普通肉湯、普通瓊脂培養基配制按照《中華人民共和國獸藥典》標準進行［4］。

1.2.2 平板菌落總數測定 將金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌的菌液分別進行10倍倍比稀釋，選取稀釋至107、108、109、1010的菌液進行平板計數。分別用1 ml滅菌吸管移1 ml稀釋液于滅菌皿內，每個稀釋度做兩個平皿；稀釋液移入平皿后，及時將涼至46℃普通瓊脂培養基注入平皿約15 ml，并轉動平皿混合均勻，同時將普通瓊脂培養基傾入加有1 ml滅菌水的滅菌平皿內作空白對照；待瓊脂凝固后，翻轉平板，置37℃溫箱內培養48 h后記下各平板的菌落數，求出同稀釋度下的各平板平均菌落數。用普通肉湯培養基將3種菌懸液稀釋至1×1011CFU/ml。

1.2.3 測定試驗所用3種菌株的OD值與菌落總數的關系 將15個試管分成3組，每組5個，分別加入10 ml的普通肉湯培養基。第1組中分別加入未稀釋葡萄球菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的葡萄球菌菌液各10 μl；第2組中分別加入未稀釋沙門氏菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的沙門氏菌菌液各10 μl；在第3組中分別加入稀釋至1011、1010、109、108、107的大腸桿菌菌液各10 μl。在37℃恒溫培養振蕩器內培養24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值，繪制曲線圖。

1.2.4 稀釋 用高壓滅菌的普通肉湯培養基分別對A、B、C3種消毒劑進行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000 8個稀釋度稀釋，總量定為10 ml。各分別稀釋3組。

1.2.5 接菌 向第1組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液；第2組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液；第3組消毒劑A、B、C的8個稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時分別設置陰性對照普通肉湯培養基＋10 μl LB培養液，陽性對照普通肉湯培養基＋10 μl對應菌液。所接菌液均為1× 1011CFU/ml。

1.2.6 培養及OD值測定 在37℃恒溫培養振蕩器內培養，分別在培養8 h和24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值［5］。

1.2.7 確定最佳稀釋度 ①用高壓滅菌的普通肉湯培養基對消毒劑A進行1∶10、1∶20、1∶40、1∶60、1∶80 5個稀釋度稀釋，對消毒劑B、C進行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000 4個稀釋度稀釋，總量均定為10 ml。各分別稀釋3組。②向第1組消毒劑A1、B1、C1的各個稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液，第2組A2、B2、C2的各個稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液，第3組A3、B3、C3的各個稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時分別設置陰性對照普通肉湯培養基＋10 μl LB培養液，陽性對照普通肉湯培養基＋10 μl對應菌液。③在37℃恒溫培養振蕩器內培養，在培養8 h和24 h時每管取2 ml運用紫外分光光度計在600 nm波長下測定其OD值。確定3種消毒劑的最佳稀釋度。

2 結果

2.1 平板菌落總數測定結果

通過平板菌落總數測定可得葡萄球菌的細菌含量為2.43×1011CFU/ml；沙門氏菌的細菌含量為1.34×1011CFU/ml；大腸桿菌的細菌含量為4.88×1014CFU/ml。

2.2 不同稀釋度的3種消毒劑抑菌效果的OD值測定結果

消毒劑A的8個稀釋度下OD值測定顯示8 h和24 h時均有大量細菌增殖，對3種菌均無抑菌效果；消毒劑B的8個稀釋度下OD值測定顯示8 h時在1∶100和1∶200下對葡萄球菌和沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對大腸桿菌有抑菌效果。24 h時在1∶100下對葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100和1∶200下對沙門氏菌仍有抑菌效果，而在8個稀釋度下對大腸桿菌均無抑菌效果；消毒劑C的8個稀釋度的OD值測定顯示8 h時在1∶100、1∶200、1∶500下對3種菌均有抑菌效果。24 h時在1∶100和1∶200下對葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100、1∶200和1∶500下對沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對大腸桿菌有抑菌效果。

2.3 最佳稀釋度測定結果

通過對培養8 h和24 h時OD值的測定結果分析可得：消毒劑A的最佳稀釋度為1∶10；消毒劑B的最佳稀釋度為1∶100；消毒劑C的最佳稀釋度為1∶200。

3 討論

消毒是貫徹預防為主方針的一項重要措施，目的是消滅被傳染源散播于外界環境中的病原體，以切斷傳播途徑，阻止疫病繼續蔓延。隨著我國養殖集約化程度的提高，畜產品市場流通日趨頻繁，病原微生物傳播概率大大增加；同時隨著國外引進畜禽優良品種的渠道、途徑多樣化，疫病控制的難度越來越大，嚴重威脅了我國畜牧業的健康發展。很多養殖場的衛生防疫工作已經做得很好，但仍然不時有傳染病的發生，主要原因是養殖環境已經受到污染。

該試驗采用OD值（光密度值）法對3種消毒劑的抑菌效果進行了快速有效的評價。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細菌生長，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當提高濃度或延長時間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無效的情況。3種消毒劑對沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對較好，對大腸桿菌抑菌效果相對較差。

聚維酮碘溶液在最大稀釋度1∶100時尚無抑菌效果，因此對消毒劑A重新選擇稀釋度稀釋。在實際消毒中，考慮到部分消毒劑具有逐漸揮發或避光保存等特點，而且該試驗中細菌是完全浸泡在一定濃度下的消毒劑中，與實際的應用環境有些許差別。因此，建議3種消毒劑的工作濃度為100%殺滅細菌的稀釋度，即消毒劑A 1∶10；消毒劑B 1∶100；消毒劑C 1∶200。另外,在實際消毒環境中細菌的含量各不相同，結果的準確性也有待進一步研究。故在具體消毒時，可根據消毒的對象性質、受污染的程度等因素，選擇合適的消毒劑、有效的濃度、足夠的作用時間，以確保達到很好的消毒效果。理想的消毒劑應該是高效、低毒、價廉［6］。目前市場供應的消毒劑要達到這一理想標準是很難的，就毒性而言，許多消毒劑或多或少地存在一定毒性，因此，正確選擇與使用消毒劑對畜禽生產者來說就顯得比較重要［7］。

［1］邱梅，郝智慧，龐云露，等.國內外獸用消毒劑的研究現狀與發展趨勢［J］.中國獸藥雜志，2011，45（6）: 43-47.

［2］陳小強，王晶鈺，張中航，等.規模化雞場消毒劑的篩選與消毒效果評價［J］.動物醫學進展，2011，32（11）：85-89.

［3］巴劍波，劉玉明，殷明，等.聚維酮碘的理化性能及其消毒應用研究進展［J］.中國消毒學雜志，2009，（5）：548-550.

［4］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典［M］．2010年版.北京：中國農業出版社，2011.

［5］喬軍，孟慶齡.運用OD值法進行細菌計數的研究［J］．中國家禽，1996，（4）：26-27.

［6］甘孟候，趙余放，周蛟，雞病防治［M］.北京：農業出版社.1992.

［7］計慧琴，王丙云，陳志勝，等.常用消毒劑對 H3N2豬流感病毒的殺滅效果［J］.畜牧與獸醫，2014，46（1）：89-91.

S859.79＋9.1

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：1004-5090（2017）01-0006-02

2016-10-30）